發(fā)布時間：2017-05-22 15:15

  本文關(guān)鍵詞：人胚胎干細(xì)胞源間充質(zhì)干細(xì)胞分泌的微囊泡對大鼠坐骨神經(jīng)損傷修復(fù)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的探討人胚胎干細(xì)胞(human embryonic stem cells,hESCs)源間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells,MSCs)分泌的膜性囊泡(microvesicle,MVs)對SD(sprague-dawley,SD)大鼠坐骨神經(jīng)損傷的修復(fù)作用,初步探討其發(fā)揮作用的機制。方法1、超速離心法分離及純化hESC-MSC-MVs,電子顯微鏡對其進行鑒定。2、建立SD大鼠坐骨神經(jīng)壓榨性損傷模型,應(yīng)用坐骨神經(jīng)功能指數(shù)(Sciatic nerve function index,SFI)和HE染色等方法評價hESC-MSC-MVs對大鼠坐骨神經(jīng)損傷的治療效果。實時定量PCR(Real-time PCR)檢測hESC-MSCs和hESC-MSC-MVs與坐骨神經(jīng)損傷修復(fù)相關(guān)的mi RNA。3、體外分離SD胎鼠神經(jīng)干細(xì)胞(neural stem cells,NSCs),與hESC-MSC-MVs共培養(yǎng),免疫熒光染色檢測神經(jīng)特異性標(biāo)志GAP-43的表達并評價hESC-MSC-MVs對NSCs分化的作用。結(jié)果1、成功分離和純化了hESC-MSC-MVs,通過電子顯微鏡觀察了hESC-MSC-MVs的分泌過程。2、構(gòu)建了SD大鼠坐骨神經(jīng)壓榨性損傷模型。神經(jīng)損傷后第2周,與對照組相比,hESC-MSCs組和hESC-MSC-MVs組足印形態(tài)優(yōu)于PBS組,hESC-MSCs組受損側(cè)較正常側(cè)仍有差異,hESC-MSC-MVs組損傷側(cè)與正常側(cè)足印相似。hESC-MSCs及hESC-MSC-MVs能夠促使模型大鼠受損側(cè)后肢形態(tài)恢復(fù)及再生神經(jīng)纖維數(shù)量的增加,顯著降低腓腸肌肌肉萎縮程度。Real-time PCR檢測發(fā)現(xiàn),hESC-MSC-MVs以及hESC-MSCs中含有miRNA-222、miRNA-125、miRNA-29b、mi RNA-29c,其中miRNA-222相對表達量最高。3、成功分離SD胎鼠的NSCs。hESC-MSCs及hESC-MSC-MVs都能夠促使NSCs分化為神經(jīng)元,神經(jīng)突起較密而且長,而hESC-MSC-MVs作用效果更加明顯。結(jié)論hESC-MSC-MVs對坐骨神經(jīng)壓榨性損傷有顯著修復(fù)作用,修復(fù)機制可能與其能夠顯著促使NSCs分化為神經(jīng)元,進而促使神經(jīng)纖維的銜接有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：人胚胎干細(xì)胞 間充質(zhì)干細(xì)胞 微囊泡 坐骨神經(jīng)損傷 神經(jīng)干細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R745.4
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-12
• 主要英文縮略詞索引12-13
• 第一章 緒論13-24
• 1.1 周圍神經(jīng)損傷13
• 1.2 周圍神經(jīng)損傷再生機制13-14
• 1.3 間充質(zhì)干細(xì)胞14-19
• 1.3.1 間充質(zhì)干細(xì)胞概述15
• 1.3.2 間充質(zhì)干細(xì)胞的來源及生物學(xué)特性15-16
• 1.3.3 間充質(zhì)干細(xì)胞與周圍神經(jīng)損傷16-19
• 1.4 間充質(zhì)干細(xì)胞分泌的微囊泡19-22
• 1.4.1 微囊泡概述19-20
• 1.4.2 微囊泡來源及生物學(xué)特性20-21
• 1.4.3 間充質(zhì)干細(xì)胞分泌的微囊泡與神經(jīng)組織損傷修復(fù)21-22
• 1.5 小結(jié)22-24
• 第二章 研究目的、內(nèi)容、方法、實驗設(shè)計方案和意義24-26
• 2.1 研究目的24
• 2.2 研究內(nèi)容24
• 2.3 研究方法24-25
• 2.4 實驗設(shè)計方案25
• 2.5 研究意義25-26
• 第三章 人胚胎干細(xì)胞源間充質(zhì)干細(xì)胞分泌的微囊泡的分離26-40
• 3.1 材料26-29
• 3.1.1 人胚胎干細(xì)胞26
• 3.1.2 主要器材及耗材26-27
• 3.1.3 試劑及配制27-29
• 3.2 方法29-33
• 3.2.1 飼養(yǎng)層制備29-30
• 3.2.2 h ESCs培養(yǎng)30-31
• 3.2.3 人胚胎干細(xì)胞自發(fā)分化為間充質(zhì)干細(xì)胞31
• 3.2.5 h ESC-MSC-MVs的分離和純化31-32
• 3.2.6 透射電鏡樣本制備32
• 3.2.7 細(xì)胞爬片及掃描電鏡樣品制備32
• 3.2.8 細(xì)胞超薄切片樣品制備32-33
• 3.3 結(jié)果33-36
• 3.3.1 人胚胎干細(xì)胞形態(tài)33-34
• 3.3.2 人胚胎干細(xì)胞自發(fā)分化為間充質(zhì)干細(xì)胞34-35
• 3.3.3 h ESC-MSC-MVs形態(tài)特征及分泌過程35-36
• 3.4 討論36-40
• 第四章 人胚胎干細(xì)胞源間充質(zhì)干細(xì)胞分泌的微囊泡對大鼠坐骨神經(jīng)壓榨性損傷修復(fù)研究及機制40-54
• 4.1 材料40-42
• 4.1.1 人胚胎干細(xì)胞40
• 4.1.2 實驗用動物40
• 4.1.3 主要儀器及耗材40-41
• 4.1.4 主要試劑及配制41-42
• 4.2 方法42-47
• 4.2.1 h ESC-MSCs培養(yǎng)42-43
• 4.2.3 大鼠坐骨神經(jīng)損傷修復(fù)實驗43-44
• 4.2.4 外部體征觀察44
• 4.2.5 坐骨神經(jīng)功能指數(shù)44-45
• 4.2.6 標(biāo)本組織的收集和制備45
• 4.2.7 坐骨神經(jīng)損傷修復(fù)相關(guān)的mi RNA檢測45-47
• 4.3 結(jié)果47-51
• 4.3.1 術(shù)后外部體征觀察47-48
• 4.3.2 坐骨神經(jīng)功能指數(shù)檢測48-49
• 4.3.3 神經(jīng)纖維HE染色49
• 4.3.4 腓腸肌肌肉HE染色49-50
• 4.3.5 mi RNA定量檢測50-51
• 4.4 討論51-54
• 第五章 人胚胎干細(xì)胞源間充質(zhì)干細(xì)胞分泌的微囊泡促使神經(jīng)干細(xì)胞分化研究54-62
• 5.1 材料54-56
• 5.1.1 人胚胎干細(xì)胞54
• 5.1.2 實驗用動物54-55
• 5.1.3 主要器材及耗材55
• 5.1.4 主要試劑及配制55-56
• 5.2 方法56-57
• 5.2.1 人胚胎干細(xì)胞自發(fā)分化為間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)及鑒定56
• 5.2.2 h ESC-MSC-MVs分離提純及濃度測試56
• 5.2.3 神經(jīng)干細(xì)胞分離及培養(yǎng)56-57
• 5.2.4 實驗分組57
• 5.2.5 神經(jīng)干細(xì)胞分化57
• 5.3 結(jié)果57-60
• 5.3.1 神經(jīng)干細(xì)胞形態(tài)特征58
• 5.3.2 神經(jīng)干細(xì)胞的分化58-59
• 5.3.3 神經(jīng)元熒光染色59-60
• 5.4 討論60-62
• 結(jié)論與展望62-63
• 結(jié)論62
• 展望62-63
• 參考文獻63-82
• 致謝82-83
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及獲獎情況83
• 一、發(fā)表論文83
• 二、參加課題研究83
• 三、獲獎情況83

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本文編號：386069