本文關(guān)鍵詞：MGMT基因啟動子甲基化在腦膠質(zhì)瘤發(fā)生中的作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:對臨床收集并放置于零下80攝氏度低溫冰箱的不同級別的膠質(zhì)瘤標本,取部分組織石蠟包埋并切片后進行免疫組化檢測腫瘤標本MGMT甲基化情況,另取部分標本組織用組織DNA提取試劑盒提取全基因組DNA,采用巢式PCR對MGMT啟動子基因甲基化進行擴增,以及變性高效液相色譜(DHPLC)檢測并驗證MGMT啟動子甲基化存在情況。方法:第一部分:將人腦膠質(zhì)瘤各個標本以及瘤周正常腦組織分別取部分組織進行免疫組化實驗,觀察腫瘤組織及瘤周正常組織的甲基化情況。第二部分:將人腦膠質(zhì)瘤切取部分用于全基因組DNA提取,并采用巢式PCR對MGMT啟動子基因甲基化進行擴增,后進行變性高效液相色譜(DHPLC)驗證MGMT啟動子甲基化情況以及采用甲基化特異性PCR進行膠質(zhì)瘤標本甲基化檢測。結(jié)果:1、分別對不同WHO分級的膠質(zhì)瘤進行MGMT啟動子基因甲基化檢測,發(fā)現(xiàn)2例WHO I級膠質(zhì)瘤有0例出現(xiàn)甲基化,WHO II級膠質(zhì)瘤30例,檢測出14例出現(xiàn)甲基化,甲基化比例為14/30即甲基化率為46.7%,WHO II-III級膠質(zhì)瘤11例,檢測出4例有存在甲基化,甲基化比例為4/11即甲基化率36.4%,WHO III級膠質(zhì)瘤22例,檢測出13例存在有甲基化,甲基化比例為13/22即甲基化率為59.1%,WHO IV級膠質(zhì)瘤26例,檢測出8例存在甲基化,甲基化比例為8/26,及甲基化率為30.8%。2、同時對該91例膠質(zhì)瘤標本采用高效液相色譜(DHPLC)、甲基化特異性PCR檢查甲基化情況以及進行免疫組化觀察甲基化情況,三種方法檢測的結(jié)果上存在一致性。結(jié)論:通過對不同級別的膠質(zhì)瘤進行甲基化特異性PCR、免疫組化以及高效液相色譜(DHPLC)檢查啟動子MGMT甲基化情況,發(fā)現(xiàn)在較低級別的膠質(zhì)瘤中存在MGMT甲基化發(fā)生頻率較大,而在高級別的膠質(zhì)瘤中MGMT甲基化的頻率則相對要低一些,但無論是在低級別人腦膠質(zhì)瘤還是在較高級別的人腦膠質(zhì)瘤中都存在一定頻率的MGMT啟動子基因甲基化,這表明MGMT啟動子基因甲基化是導致人腦膠質(zhì)瘤發(fā)生的因素之一。
【關(guān)鍵詞】：膠質(zhì)瘤 MGMT啟動子基因 甲基化
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R739.41
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 第1章 前言10-12
• 第2章 材料和方法12-25
• 2.1 試劑和材料12-14
• 2.1.1 主要試劑12-13
• 2.1.2 主要儀器13
• 2.1.3 主要試劑配制13-14
• 2.2 實驗方法和步驟14-24
• 2.2.1 膠質(zhì)瘤標本及瘤周正常組織標本14-16
• 2.2.2 HRP免疫組織化學染色16-18
• 2.2.3 膠質(zhì)瘤標本組織DNA提取18-19
• 2.2.4 DNA亞硫酸氫鹽修飾19-21
• 2.2.5 甲基化特異性PCR21-22
• 2.2.6 以腫瘤組織提取的DNA為模板進行甲基化擴增，產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳22-24
• 2.2.7 變性高效液相色譜（DHPLC）檢測甲基化24
• 2.3 統(tǒng)計學數(shù)據(jù)分析24-25
• 第3章 結(jié)果25-31
• 3.1 膠質(zhì)瘤MGMT蛋白表達的免疫組化檢測25-26
• 3.2 膠質(zhì)瘤標本組織DNA提取后濃度選擇26-27
• 3.3 膠質(zhì)瘤標本MGMT基因啟動子區(qū)MSP結(jié)果27-28
• 3.4 變性高效液相色譜（DHPLC）檢測甲基化情況28-29
• 3.5 MGMT基因啟動子區(qū)甲基化與膠質(zhì)瘤患者年齡、性別及病理診斷之間的關(guān)系29-31
• 第4章 討論31-35
• 4.1 DNA甲基化與腫瘤之間的關(guān)系31-32
• 4.2 MGMT表達陽性及基因啟動子區(qū)甲基化與膠質(zhì)瘤32-34
• 4.3 MGMT基因啟動子區(qū)甲基化檢測方法34-35
• 第5章 結(jié)論與展望35-36
• 5.1 結(jié)論35
• 5.2 展望35-36
• 致謝36-37
• 參考文獻37-39
• 綜述39-44
• 參考文獻43-44

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