本文關(guān)鍵詞：mTOR通路通過(guò)CD44促進(jìn)神經(jīng)元再生的內(nèi)在機(jī)制的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：神經(jīng)損傷類疾病的治療一直是困擾醫(yī)學(xué)界的一大難題。目前，治療神經(jīng)損傷類疾病的方法大體包括細(xì)胞的替代治療和改善神經(jīng)受損后局部抑制性的微環(huán)境兩個(gè)方面。由于中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元損傷后再生失敗的原因錯(cuò)綜復(fù)雜，上述治療手段的效果往往不能從根本上解決問(wèn)題。因此，闡明神經(jīng)元內(nèi)在再生能力的機(jī)制，探究神經(jīng)損傷軸突再生的相關(guān)通路仍然是神經(jīng)損傷類疾病治療的關(guān)鍵。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)體外誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞分化，使其具有成熟神經(jīng)元的特征，從而用作本研究的體外神經(jīng)細(xì)胞模型。通過(guò)用RNA干擾技術(shù)下調(diào)分化SH-SY5Y細(xì)胞中PTEN基因表達(dá)，從而使mTOR通路激活，檢測(cè)相關(guān)CD44分子表達(dá)是否上調(diào)及其與軸突生長(zhǎng)的內(nèi)部聯(lián)系，進(jìn)一步探討mTOR通路是否通過(guò)CD44分子促進(jìn)軸突生長(zhǎng)，進(jìn)而提高神經(jīng)元的再生能力。 方法：體外培養(yǎng)SH-SY5Y細(xì)胞，并用10μM全反式維甲酸(RTRA)誘導(dǎo)分化3d，用倒置顯微鏡觀察誘導(dǎo)組SH-SY5Y細(xì)胞形態(tài)變化情況，并設(shè)立對(duì)照組。利用RT-PCR及免疫組織化學(xué)染色技術(shù)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)誘導(dǎo)組與對(duì)照組SH-SY5Y細(xì)胞微管相關(guān)蛋白(Microtubule associated protein MAP2)表達(dá)及轉(zhuǎn)錄情況，進(jìn)而驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組細(xì)胞分化程度的差異；隨后對(duì)分化成熟的細(xì)胞進(jìn)行PTEN RNAi實(shí)驗(yàn)，利用熒光顯微鏡對(duì)各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞進(jìn)行觀察，檢測(cè)實(shí)驗(yàn)干擾組的熒光轉(zhuǎn)染效率；利用RT-PCR技術(shù)對(duì)干擾24h后各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞PTEN的轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行檢測(cè)；利用western blot技術(shù)對(duì)干擾36h后磷酸化核糖體(Ps6K)蛋白與雷帕霉素靶蛋白(mTOR)表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)；利用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)CD44轉(zhuǎn)錄水平，并與對(duì)照組進(jìn)行比較，觀測(cè)CD44表達(dá)水平與軸突生長(zhǎng)關(guān)系是否呈現(xiàn)正相關(guān)；將誘導(dǎo)后的細(xì)胞同時(shí)進(jìn)行PTEN與CD44基因的共同干擾，并觀察兩種基因轉(zhuǎn)錄共同下調(diào)后，細(xì)胞軸突的長(zhǎng)度變化情況。 結(jié)果： RT-PCR結(jié)果證實(shí)誘導(dǎo)3d的細(xì)胞與對(duì)照組相比較，MAP2的轉(zhuǎn)錄水平明顯上調(diào)。免疫組織化學(xué)方法證實(shí)，誘導(dǎo)3d的細(xì)胞與對(duì)照組相比較MAP2陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯增加。隨后我們用RNAi技術(shù)對(duì)誘導(dǎo)分化的SH-SY5Y細(xì)胞進(jìn)行PTEN基因干擾，24h后用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)PTEN基因的轉(zhuǎn)錄水平，與對(duì)照組相比，其轉(zhuǎn)錄水平明顯下調(diào)。36h后我們?cè)俅螜z測(cè)干擾后細(xì)胞的mTOR與Ps6K蛋白的表達(dá)水平，與陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組相比，其蛋白表達(dá)水平明顯上調(diào)，差異顯著（p0.05）。干擾PTEN基因24h之后，發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組CD44轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)，與陰性對(duì)照組和單純誘導(dǎo)組相比差異顯著（p0.05）。隨后利用imageproplus6.0分別對(duì)各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞進(jìn)行軸突長(zhǎng)度測(cè)量，并將各組數(shù)據(jù)分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)干擾3d細(xì)胞的軸突長(zhǎng)度明顯長(zhǎng)于單純誘導(dǎo)組和陰性對(duì)照組細(xì)胞的軸突長(zhǎng)度，差異顯著（P0.05），當(dāng)PTEN RNAi與CD44RNAi共同干擾時(shí)，PTEN單純干擾組細(xì)胞軸突長(zhǎng)度明顯長(zhǎng)于共同干擾組和單純誘導(dǎo)組細(xì)胞的軸突長(zhǎng)度，差異顯著（P0.05）。 結(jié)論：mTOR通路激活后通過(guò)CD44分子表達(dá)上調(diào)促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞突起生長(zhǎng)，從而促進(jìn)神經(jīng)元的再生。
【關(guān)鍵詞】：mTOR通路 CD44 神經(jīng)再生 軸突生長(zhǎng) 神經(jīng)損傷
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R741
【目錄】：

• 前言4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-12
• 英文縮略詞12-14
• 第一章 文獻(xiàn)綜述14-27
• 1.1 神經(jīng)軸突生長(zhǎng)抑制因子及其受體復(fù)合物研究進(jìn)展14-17
• 1.1.1 軸突生長(zhǎng)抑制因子14-16
• 1.1.2 相關(guān)抑制因子受體復(fù)合物研究進(jìn)展16-17
• 1.1.3 改善局部微環(huán)境的治療手段17
• 1.2 影響中樞神經(jīng)元內(nèi)源性再生能力的因素17-27
• 1.2.1 生長(zhǎng)調(diào)控機(jī)制與神經(jīng)再生18-19
• 1.2.2 mTOR 信號(hào)通路19-22
• 1.2.3 CD44 的研究進(jìn)展22-27
• 第二章 材料與方法27-38
• 2.1 實(shí)驗(yàn)試劑27-28
• 2.2 實(shí)驗(yàn)儀器28-29
• 2.3 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞29
• 2.4 實(shí)驗(yàn)試劑配制29-31
• 2.5 實(shí)驗(yàn)方法31-38
• 2.5.1 神經(jīng)細(xì)胞模型的建立31-32
• 2.5.2 用 RT-PCR 技術(shù)及免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)誘導(dǎo)細(xì)胞的分化程度32-34
• 2.5.3 通過(guò) RNA 干擾技術(shù)使 PTEN 表達(dá)下調(diào)34-35
• 2.5.4 Western blot 檢測(cè)干擾 36h 后 mTOR，Ps6K 蛋白的表達(dá)水平35-36
• 2.5.5 RT-PCR 檢測(cè) CD44 及 TUBB3 轉(zhuǎn)錄水平36
• 2.5.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理與圖像的分析，軸突長(zhǎng)度的測(cè)量36-38
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果38-46
• 3.1 全反式維甲酸（RTRA）誘導(dǎo) SY5Y 細(xì)胞分化38
• 3.2 誘導(dǎo)細(xì)胞分化程度的鑒定38-39
• 3.3 應(yīng)用 RNAi 技術(shù)使 PTEN 表達(dá)下調(diào)并檢測(cè)其轉(zhuǎn)錄水平39-40
• 3.4 Western blot 技術(shù)檢測(cè) PTEN 基因下調(diào)后，mTOR 蛋白，Ps6K 蛋白表達(dá)水平40-41
• 3.5 免疫組織化學(xué)方法檢測(cè) Ps6K 蛋白表達(dá)水平41-42
• 3.6 PTEN 抑制后，mTOR 通路激活對(duì) SY5Y 細(xì)胞突起長(zhǎng)度的影響42-43
• 3.7 檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組 CD44 轉(zhuǎn)錄水平43
• 3.8 檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組 TUBB3 轉(zhuǎn)錄水平43-44
• 3.9 共同干擾實(shí)驗(yàn)44-46
• 第四章 討論46-50
• 第五章 結(jié)論50-51
• 參考文獻(xiàn)51-57
• 作者簡(jiǎn)介及在學(xué)期間所取得的科研成果57-58
• 致謝58

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 申崇標(biāo);陳力學(xué);劉寶松;周冀英;曾照芳;邵陽(yáng);;下調(diào)PTEN基因?qū)θX缺血再灌注大鼠神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用研究[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2010年07期

  本文關(guān)鍵詞：mTOR通路通過(guò)CD44促進(jìn)神經(jīng)元再生的內(nèi)在機(jī)制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：383013