本文關(guān)鍵詞：神經(jīng)母細(xì)胞瘤中DKK3基因啟動子甲基化及其表達(dá)失活的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景與目的 神經(jīng)母細(xì)胞瘤是是嬰幼兒最常見的腫瘤。有將近一半的神經(jīng)母細(xì)胞瘤發(fā)生在2歲以內(nèi)的嬰幼兒。目前關(guān)于神經(jīng)母細(xì)胞瘤真正的病因尚不清楚,一些遺傳易感因素被發(fā)現(xiàn)與神經(jīng)母細(xì)胞瘤的發(fā)病相關(guān)。近年來研究發(fā)現(xiàn),一些抑癌基因其DNA序列完整并未發(fā)現(xiàn)有基因突變、基因缺失等一系列變化,隨后逐漸認(rèn)識到表觀遺傳學(xué)的改變,尤其是DNA甲基化狀況,其參與了腫瘤的發(fā)生與發(fā)展這一事件。DNA甲基化是可逆的并且可以在一些去甲基化藥物的作用下,逆轉(zhuǎn)抑癌基因啟動子區(qū)域的甲基化狀態(tài)并恢復(fù)其功能,從而抑制腫瘤生長�，F(xiàn)在存在兩種去甲基化藥物:5-氮雜胞苷,即5-azaC,以及5-氮雜脫氧胞苷,即5-aza CdR。5-aza C是去甲基化藥物的一種,在DNA復(fù)制過程中,其與甲基轉(zhuǎn)移酶結(jié)合,并且形成共價復(fù)合物,重新表達(dá)因甲基化而失活的抑癌基因,并使其恢復(fù)功能,起到抑制腫瘤細(xì)胞生長的作用�，F(xiàn)階段的研究表明DKK3基因是一個新發(fā)現(xiàn)的候選抑癌基因,可以拮抗Wnt信號傳導(dǎo)通路子,DKK3基因?qū)儆贒ickkopf家族的一員,與Wnt受體復(fù)合體競爭性結(jié)合并且選擇性抑制Wnt信號通路,使其失活,進(jìn)而沉默拮抗基因,使其失去對通路的抑制作用進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞無限增殖,引發(fā)腫瘤。研究表明,DKK3基因啟動子區(qū)富含CpG島,以及DKK3基因啟動子區(qū)的高度甲基化,是導(dǎo)致DKK3基因表達(dá)失活的重要原因,目前許多的腫瘤細(xì)胞系或惡性腫瘤組織,如胃癌、食管癌、大腸癌,以及前列腺癌、乳腺癌及肺癌等組織中缺失或表達(dá)下調(diào),但在神經(jīng)母細(xì)胞瘤中dkk3基因啟動子甲基化,以及轉(zhuǎn)錄表達(dá)狀況,5-azac對神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞nb-1細(xì)胞增殖及dkk3基因的影響國內(nèi)外尚無文獻(xiàn)報道。因此我們運(yùn)用半定量rt-pcr、甲基化聚合酶鏈反應(yīng),分別從rna水平檢測dkk3基因mrna在nb及對應(yīng)的神經(jīng)母細(xì)胞瘤瘤旁組織tac中的轉(zhuǎn)錄情況,從dna水平檢測dkk3基因啟動子區(qū)域甲基化在nb及對應(yīng)癌旁組織tac中啟動子甲基化狀況并分析它們與臨床病理特征及分期的關(guān)系,隨后采用甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-氮雜胞苷(5-azac)對神經(jīng)母細(xì)胞瘤nb-1細(xì)胞株進(jìn)行干預(yù),探討dkk3基因在神經(jīng)母細(xì)胞中表達(dá)失活的機(jī)制,5-azac對nb-1細(xì)胞株生長增殖及其dkk3基因表達(dá)的影響,從而測定dkk3基因是否是神經(jīng)母細(xì)胞的候選抑癌基因,尋找腫瘤治療的新靶點(diǎn)。材料與方法1.采用半定量rt-pcr,從rna水平檢測dkk3基因在51例nb及tac組織中的轉(zhuǎn)錄情況,采用甲基化聚合酶鏈反應(yīng)(msp),從dna分子水平測定在nb以及tac組織中dkk3基因啟動子的甲基化情況,分析其在臨床上的關(guān)系。2.經(jīng)2、5、10、20、50、100、200、400μmol/l的5-azac處理神經(jīng)母細(xì)胞瘤tpc-1細(xì)胞后,并采用mtt觀察其對細(xì)胞生長的作用;應(yīng)用rt-pcr技術(shù),甲基化特異性pcr,測定細(xì)胞經(jīng)5-azac(5、10、20、50μmol/l)處理后,dkk3基因dkk3基因啟動子甲基化狀態(tài)以及mrna的表達(dá)。3.進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,應(yīng)用spss10.0統(tǒng)計(jì)軟件,數(shù)據(jù)處理:兩樣本率比較應(yīng)用四格表的x2檢驗(yàn);兩樣本定量資料采用t檢驗(yàn),以p0.05為差異顯著性的標(biāo)準(zhǔn);多樣本均數(shù)的比較,采用單因素方差分析的方法。結(jié)果1.在nb中,dkk3基因mrna表達(dá)的陽性率分別為100%和43.4%,在tac組織中,沒有出現(xiàn)dkk3基因啟動子的甲基化的狀況,nb組織中38.8%出現(xiàn)dkk3基因啟動子甲基化狀況,表示2組差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);nb中dkk3基因啟動子的甲基化及mrna的表達(dá)與患者的病理學(xué)分級有明顯相關(guān)性(p0.05)。2.dkk3基因啟動子的甲基化在神經(jīng)母細(xì)胞瘤中的表達(dá),與其mrna表達(dá)呈現(xiàn)明顯的負(fù)相關(guān)性(P0.05)3.經(jīng)不同濃度5-azaC處理NB-1細(xì)胞后,隨著藥物作用時間的延長和藥物濃度的增加,細(xì)胞的生長受到明顯抑制,呈時間和劑量依賴性(P0.05);經(jīng)5、10、20、50μmol/L藥物濃度的5-azaC處理NB-1細(xì)胞48h后,DKK3mRNA的相對表達(dá)量依次為0.199±0.015、0.348±0.009、0.457±0.016、0601±0.010,表達(dá)強(qiáng)度與5-azaC藥物濃度呈劑量依賴關(guān)系(F=370.356,P0.01);MSP檢測結(jié)果顯示,經(jīng)5-azaC處理后,DKK3基因啟動子高甲基化的區(qū)域發(fā)生部分去甲基化(Fm=295.342,Fum=189.148;P0.05)。結(jié)論1.DKK3基因啟動子區(qū)域的甲基化是DKK3基因失活的重要機(jī)制,在NB的發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用。2.5-azaC能有效逆轉(zhuǎn)神經(jīng)母細(xì)胞瘤NB-1中DKK3基因的異常甲基化,從而增強(qiáng)DKK3基因表達(dá),抑制腫瘤細(xì)胞生長。
【關(guān)鍵詞】：NB DKK3 神經(jīng)母細(xì)胞瘤 甲基化 Wnt通路 5-氮雜胞苷
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R739.4
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-13
• 縮略詞表13-14
• 前言14-17
• 材料與方法17-26
• 結(jié)果26-32
• 討論32-35
• 結(jié)論35-36
• 參考文獻(xiàn)36-40
• 附圖40-41
• 綜述部分41-61
• 參考文獻(xiàn)56-61
• 致謝61

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 趙玉鳳;李鋒;付欣鴿;曹玉文;李麗;劉偉;;DKK3基因甲基化與乳腺癌的相關(guān)性研究[J];農(nóng)墾醫(yī)學(xué);2010年03期

2 邱慶安;呂云福;陳一明;林友剛;伍海鷹;劉寧;;5-氮雜-2′-脫氧胞苷對胃癌AGS細(xì)胞CHFR基因去甲基化作用及意義[J];山東醫(yī)藥;2011年14期

3 付靜;張雁軍;魯慶陽;張丹杰;;結(jié)腸癌組織RASSF1A基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)和啟動子區(qū)甲基化研究[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2010年23期

4 ;Dickkopf3 overexpression inhibits pancreatic cancer cell growth in vitro[J];World Journal of Gastroenterology;2011年33期

5 王寧;楊斌;駱瑩;王濤;王鳳梅;高英堂;杜智;;Wnt途徑拮抗劑Dickkopf-3蛋白在肝細(xì)胞癌中表達(dá)亞細(xì)胞定位及臨床意義[J];中國腫瘤臨床;2012年02期

  本文關(guān)鍵詞：神經(jīng)母細(xì)胞瘤中DKK3基因啟動子甲基化及其表達(dá)失活的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：382434