本文關(guān)鍵詞：缺氧誘導(dǎo)因子1α與著絲粒蛋白W在人膠質(zhì)瘤組織及細(xì)胞中表達(dá)的相關(guān)性，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：神經(jīng)膠質(zhì)瘤起源于神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞[1,2],是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中最常見(jiàn)、難治的原發(fā)性惡性腫瘤[3],大約占顱內(nèi)腫瘤的一半[4]。既往有相關(guān)調(diào)查表明,神經(jīng)膠質(zhì)瘤的發(fā)生、發(fā)展和侵襲等過(guò)程都是多階段的、多種基因參與的結(jié)果[5],但是其中的具體機(jī)制至今尚不明了[5]。著絲粒蛋白W(centromere protein W,CENP-W)又稱腫瘤上調(diào)蛋白2(cancer-up-regulated gene 2,CUG2)基因,是2007年發(fā)現(xiàn)的一種致癌基因[7]。研究發(fā)現(xiàn),CENP-W在卵巢、肝臟、肺、胰腺和結(jié)腸等惡性腫瘤組織中普遍存在高表達(dá)[8,9]。它的過(guò)表達(dá)既可以促進(jìn)細(xì)胞的增殖,另一方面又可以誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡[10],具有很復(fù)雜的作用機(jī)制[11]。實(shí)驗(yàn)證明,CENP-W的過(guò)表達(dá)可誘發(fā)腫瘤形成[12],與人體各種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和遷徙等過(guò)程有重要關(guān)系。缺氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)是缺氧環(huán)境誘導(dǎo)下細(xì)胞產(chǎn)生的一種核轉(zhuǎn)錄因子[13,14],可調(diào)控多種靶基因的表達(dá)[15],它在一般環(huán)境中很容易分解[16]。然而,目前CENP-W與HIF-1α在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中的表達(dá)相關(guān)性尚未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。目的:本研究以Ⅰ~Ⅳ級(jí)神經(jīng)膠質(zhì)瘤組織、瘤旁腦組織和U251膠質(zhì)細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,檢測(cè)HIF-1α與CENP-W在神經(jīng)膠質(zhì)瘤組織及細(xì)胞中的表達(dá)及其相關(guān)性,探討它們與膠質(zhì)瘤生物學(xué)行為的關(guān)系,以期為膠質(zhì)瘤的防治提供一些依據(jù)。方法:第一部分應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色方法檢測(cè)41例含不同級(jí)別的膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本、3例瘤旁腦組織標(biāo)本中HIF-1α和CENP-W的表達(dá)水平,并統(tǒng)計(jì)學(xué)分析蛋白表達(dá)水平與膠質(zhì)瘤臨床病理特征的關(guān)系,以及兩蛋白表達(dá)之間的相關(guān)性。第二部分應(yīng)用不同濃度氯化鈷[17]抑制膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞中HIF-1α的分解,細(xì)胞培養(yǎng)48 h后采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)CENP-W mRNA表達(dá)的變化,24h后采用蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)細(xì)胞中C ENP-W蛋白的表達(dá)的變化,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果,探索當(dāng)HIF-1α含量升高時(shí)對(duì)U251細(xì)胞中CENP-W蛋白及mRNA表達(dá)的影響。第三部分應(yīng)用特異性小干擾rna(smallinterferencerna,sirna)干擾u251細(xì)胞中hif-1α表達(dá)使其下調(diào)后,采用蛋白質(zhì)印跡法和實(shí)時(shí)熒光定量pcr法分別檢測(cè)cenp-w蛋白及mrna表達(dá)的變化。應(yīng)用特異性sirna干擾u251細(xì)胞中cenp-w表達(dá)使其下調(diào)后,采用蛋白質(zhì)印跡法和實(shí)時(shí)熒光定量pcr法檢測(cè)hif-1α蛋白及mrna表達(dá)的變化,并用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析結(jié)果,進(jìn)一步探索u251細(xì)胞中hif-1α和cenp-w表達(dá)的相關(guān)性。結(jié)果:1.免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果提示cenp-w主要表達(dá)于細(xì)胞核,有明顯的異質(zhì)性,在瘤旁正常組織、低級(jí)別(Ⅰ~Ⅱ)和高級(jí)別(Ⅲ~Ⅳ)膠質(zhì)瘤標(biāo)本中其表達(dá)陽(yáng)性率分別是67%(2/3)、82%(14/17)和92%(22/24),統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示各組cenp-w表達(dá)率之間沒(méi)有明顯差異(χ2=1.794,p=0.408);但比較免疫組織化學(xué)評(píng)分發(fā)現(xiàn),高級(jí)別組評(píng)分(3.58±1.06)普遍比低級(jí)別組(2.88±1.50)高,其中瘤旁組評(píng)分(2.00±2.00)最低。hif-1α主要表達(dá)于細(xì)胞核,高級(jí)別膠質(zhì)瘤中有少量表達(dá)于細(xì)胞質(zhì),有明顯的異質(zhì)性;在瘤旁正常組織、低級(jí)別和高級(jí)別膠質(zhì)瘤標(biāo)本中其表達(dá)陽(yáng)性率分別是0%(0/3)、47%(8/17)和79%(19/24),各組表達(dá)陽(yáng)性率之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=9.440,p=0.009)。另外,cenp-w和hif-1α在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)與患者性別、年齡及膠質(zhì)瘤病理類型均沒(méi)有明顯的關(guān)系。2.氯化鈷模擬缺氧實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,當(dāng)50μmol/l氯化鈷處理膠質(zhì)瘤u251細(xì)胞24~48h后,細(xì)胞生長(zhǎng)狀況和未經(jīng)氯化鈷處理的細(xì)胞相比無(wú)明顯不同,顯微鏡下可見(jiàn)處理組細(xì)胞生長(zhǎng)良好,同條件下細(xì)胞密度較高,細(xì)胞形態(tài)無(wú)明顯異常。實(shí)時(shí)熒光定量pcr結(jié)果顯示,50μmol/l氯化鈷處理u251細(xì)胞24h后,hif-1αmrna表達(dá)水平無(wú)明顯變化(t=1.965,p=0.08),cenp-wmrna表達(dá)水平升高(t=18.263,p0.01)。蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)結(jié)果顯示,50μmol/l氯化鈷處理u251細(xì)胞48h后,hif-1α蛋白的表達(dá)水平明顯升高(t=10.271,p0.01),cenp-w蛋白表達(dá)水平也明顯升高(t=7.813,p0.01)。3.hif-1asirna轉(zhuǎn)染u251細(xì)胞36h后,實(shí)時(shí)熒光定量pcr結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染hif-1αsirna組hif-1αmrna表達(dá)水平較轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照組(q=10.01,p0.01)和未轉(zhuǎn)染對(duì)照組(q=9.64,p0.01)明顯降低,cenp-wmrna表達(dá)水平也較明顯下降(q=9.95,p0.01;q=10.52,p0.01),2個(gè)對(duì)照組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。轉(zhuǎn)染48 h后,轉(zhuǎn)染HIF-1αsiRNA組HIF-1α蛋白表達(dá)水平較2個(gè)對(duì)照細(xì)胞組明顯降低(q=6.95,P0.01;q=7.59,P0.01),CENP-W蛋白表達(dá)水平也相應(yīng)下降(q=5.01,P0.05;q=5.82,P0.01),2個(gè)對(duì)照組之間差異亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4.CENP-W siRNA轉(zhuǎn)染U251細(xì)胞36 h后,實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染CENP-W siRNA組CENP-W mRNA表達(dá)水平較轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照組(q=9.43,P0.01)和未轉(zhuǎn)染對(duì)照組(q=8.95,P0.01)明顯降低;然而,HIF-1αmRNA表達(dá)水平在3組之間無(wú)明顯變化(P0.05)。轉(zhuǎn)染48 h后,轉(zhuǎn)染CENP-W siRNA組CENP-W蛋白表達(dá)水平較2個(gè)對(duì)照組明顯降低(q=5.74,P0.01,q=5.39,P0.05),而HIF-1α蛋白表達(dá)水平無(wú)明顯變化(q=2.95,q=2.64,P0.05)。結(jié)論:1.以瘤旁腦組織做為對(duì)照,HIF-1α和CENP-W在膠質(zhì)瘤標(biāo)本均存在高表達(dá),與腫瘤級(jí)別呈正相關(guān),且HIF-1α和CENP-W在膠質(zhì)瘤標(biāo)本中的表達(dá)呈一定的相關(guān)性,提示HIF-1α和CENP-W可能共同參與了膠質(zhì)瘤的發(fā)生與發(fā)展。2.應(yīng)用氯化鈷模擬缺氧實(shí)驗(yàn),成功證明當(dāng)U251細(xì)胞中HIF-1α適量積聚時(shí),細(xì)胞中CENP-W的表達(dá)也升高,表明HIF-1α可能調(diào)節(jié)U251細(xì)胞CENP-W的表達(dá)。3.HIF-1αsiRNA轉(zhuǎn)染U251細(xì)胞后CENP-W的表達(dá)也隨之降低,進(jìn)一步表明HIF-1α可能調(diào)節(jié)U251細(xì)胞CENP-W的表達(dá)。4.CENP-W siRNA轉(zhuǎn)染U251細(xì)胞后HIF-1α的表達(dá)無(wú)明顯改變,提示U251細(xì)胞中CENP-W對(duì)HIF-1α的表達(dá)無(wú)明顯影響。5.HIF-1α和CENP-W表達(dá)均與膠質(zhì)瘤的病理級(jí)別呈正相關(guān)。HIF-1α可以調(diào)節(jié)CENP-W的表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：著絲粒蛋白W RNA 小分子干擾 缺氧誘導(dǎo)因子1 α亞基
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R739.4
【目錄】：

• 摘要3-6
• ABSTRACT6-11
• 第1章 前言11-14
• 第2章 材料與方法14-25
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料14-17
• 2.1.1 標(biāo)本來(lái)源14-15
• 2.1.2 膠質(zhì)瘤細(xì)胞系來(lái)源15-16
• 2.1.3 主要材料和試劑16-17
• 2.1.4 主要儀器和設(shè)備17
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法17-25
• 2.2.1 免疫組織化學(xué)法檢測(cè)HIF-1α 和CENP-W在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)17-19
• 2.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)及氯化鈷模擬缺氧實(shí)驗(yàn)19-22
• 2.2.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)相關(guān)mRNA的表達(dá)22-23
• 2.2.4. HIF-1α siRNA和CENP-W siRNA轉(zhuǎn)染23-25
• 第3章 結(jié)果25-30
• 3.1 膠質(zhì)瘤組織中CENP-W和HIF-1a表達(dá)呈正相關(guān)性25-27
• 3.2 氯化鈷抑制HIF-1α 分解并上調(diào)CENP-W表達(dá)27-28
• 3.3 HIF-1α siRNA抑制HIFa表達(dá)后下調(diào)CENP-W表達(dá)28-29
• 3.4 CENP-W siRNA抑制CENP-W表達(dá)后對(duì)HIF-1α 表達(dá)無(wú)影響29-30
• 第4章 討論30-34
• 第5章 結(jié)論與展望34-35
• 5.1 結(jié)論34
• 5.2 展望34-35
• 致謝35-36
• 參考文獻(xiàn)36-39
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明39-40
• 綜述40-48
• 參考文獻(xiàn)46-48

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 楊華;夏章勇;苗瀅;李玉芹;陶勇;;缺氧誘導(dǎo)因子-1a和血清促紅細(xì)胞生成素在腦出血患者中的表達(dá)及意義[J];中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志;2008年01期

  本文關(guān)鍵詞：缺氧誘導(dǎo)因子1α與著絲粒蛋白W在人膠質(zhì)瘤組織及細(xì)胞中表達(dá)的相關(guān)性，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：374625