近年來的研究表明,miRNAs與lncRNAs在基因的調(diào)控方面發(fā)揮著重要作用,其表達(dá)異常與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。SALL4在腦膠質(zhì)瘤中異常過表達(dá),與膠質(zhì)瘤的發(fā)生有關(guān)。miRNAs與SALL4的調(diào)控關(guān)系目前只有我們實(shí)驗(yàn)室的一例報(bào)道,lncRNA對(duì)SALL4的調(diào)控作用還未見報(bào)道。實(shí)驗(yàn)室前期發(fā)現(xiàn),具有相同種子區(qū)的miR-103、miR-195、mi R-15b過表達(dá)后,競(jìng)爭(zhēng)性的抑制腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。為進(jìn)一步研究miR-103、miR-195、miR-15b的作用,本論文將從miR-103、miR-195、miR-15b表達(dá)下調(diào)的角度研究其功能。應(yīng)用MTT增殖實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),miR-103、miR-195、miR-15b表達(dá)下調(diào)后,能夠顯著的促進(jìn)細(xì)胞的增殖能力;應(yīng)用Transwell遷移、侵襲實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),miR-103、miR-195、mi R-15b表達(dá)下調(diào)后,能夠不同程度的促進(jìn)細(xì)胞的遷移和侵襲能力,并且同時(shí)轉(zhuǎn)染miR-103、miR-195、miR-15b抑制劑后,對(duì)細(xì)胞的遷移和侵襲能力并沒有產(chǎn)生協(xié)同增加的作用。說明miR-103、miR-195、miR-15b對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的作...

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 課題研究背景及目的和意義
    1.2 SALL4的國內(nèi)外研究進(jìn)展及分析
        1.2.1 SALL4簡(jiǎn)介
        1.2.2 SALL4基因與腫瘤發(fā)生的關(guān)系
    1.3 miRNAs研究現(xiàn)狀
        1.3.1 miRNAs簡(jiǎn)介
        1.3.2 miRNAs與腫瘤
        1.3.3 miR-103/195/15b在腫瘤中的研究進(jìn)展
    1.4 lncRNAs的研究現(xiàn)狀
        1.4.1 lncRNAs簡(jiǎn)介
        1.4.2 lncRNAs的轉(zhuǎn)錄和加工過程
        1.4.3 lncRNAs的作用機(jī)制
        1.4.4 lncRNAs與腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)系
    1.5 主要研究?jī)?nèi)容
    1.6 實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線
第2章 實(shí)驗(yàn)材料方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞系
        2.1.2 抗體
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)主要試劑及配方
        2.1.4 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染
        2.2.2 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
        2.2.3 PCR反應(yīng)
        2.2.4 熒光素酶雙報(bào)告實(shí)驗(yàn)
        2.2.5 慢病毒包裝構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系
        2.2.6 Transwell檢測(cè)細(xì)胞的遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)
        2.2.7 細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)
        2.2.8 Western blot
        2.2.9 免疫熒光
        2.2.10 原位雜交
        2.2.11 caspase3/7 檢測(cè)細(xì)胞凋亡
    2.3 生物信息學(xué)預(yù)測(cè)網(wǎng)站及分析軟件
第3章 miR-103/195/15b以SALL4為靶基因影響細(xì)胞的增殖與遷移
    3.1 miR-103/195/15b表達(dá)下調(diào)后對(duì)細(xì)胞增殖與遷移的影響
        3.1.1 miR-103/195/15b表達(dá)下調(diào)效果檢測(cè)
        3.1.2 miR-103/195/15b表達(dá)下調(diào)后對(duì)細(xì)胞增殖的影響
        3.1.3 miR-103/195/15b表達(dá)下調(diào)后對(duì)細(xì)胞遷移的影響
        3.1.4 miR-103/195/15b表達(dá)下調(diào)后對(duì)細(xì)胞侵襲的影響
    3.2 SALL4為miR-103/195/15b直接靶基因的確認(rèn)
        3.2.1 熒光素酶雙報(bào)告系統(tǒng)檢測(cè)
        3.2.2 miR-103/195/15b表達(dá)下調(diào)后對(duì)SALL4的影響
        3.2.3 確認(rèn)miR-103/195/15b以SALL4為靶基因的回復(fù)實(shí)驗(yàn)
    3.3 討論
    3.4 本章小結(jié)
第4章 LINC00665與SALL4共表達(dá)促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖與遷移
    4.1 LINC00665與SALL4相關(guān)性分析
        4.1.1 生物信息學(xué)分析
        4.1.2 LINC00665在膠質(zhì)瘤組織和細(xì)胞系中的表達(dá)分析
        4.1.3 LINC00665與SALL4在膠質(zhì)瘤組織中表達(dá)相關(guān)性分析
    4.2 LINC00665在細(xì)胞中的定位
    4.3 LINC00665對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖和遷移的影響
        4.3.1 慢病毒包裝并篩選LINC00665過表達(dá)的細(xì)胞系
        4.3.2 LINC00665過表達(dá)后促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖能力
        4.3.3 LINC00665過表達(dá)后促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移與侵襲
        4.3.4 LINC00665過表達(dá)后對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞周期的影響
        4.3.5 LINC00665過表達(dá)后對(duì)miR-103/195/15b、SALL4、c-Myc和Tenascin-C的表達(dá)影響
    4.4 討論
    4.5 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3745603