本文關鍵詞：大鼠腦缺血再灌注后Cathepsin L與細胞自噬的相關性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的通過建立大鼠腦缺血再灌注損傷模型,觀察大鼠腦缺血再灌注損傷后損傷區(qū)神經(jīng)細胞內的自噬體、溶酶體的形態(tài)學變化,檢測cathepsin L及自噬相關蛋白LC3 II表達的變化;觀察cathepsin L特異性抑制劑Z-FY-DMK對腦缺血再灌注損傷后神經(jīng)細胞自噬的影響。方法將大鼠隨機分為正常組、假手術組、模型組、干預組,后三組再分為3h、6h、12h、24h這四個時間點。應用改良的Longa線栓法制作大鼠腦缺血再灌注損傷模型(MCAO),正常組無特殊處理,假手術組插線深度為9±0.5mm。干預組在術前30分鐘側腦室穿刺注射Z-FY-DMK(1nmol,5ul DMSO),假手術組及模型組在術前30分鐘側腦室注入等體積的DMSO溶液。采用Longa’s的5級標準評分法評價各組大鼠腦缺血再灌注后各時間點的神經(jīng)功能缺損。采用TTC染色觀察各組大鼠腦缺血再灌注后24h的腦組織梗死灶。采用Western bolt檢測cathepsin L及自噬相關蛋白LC3II在各組各時間點表達的變化。采用電鏡觀察自噬體、溶酶體的形態(tài)學變化。結果1.大鼠腦缺血再灌注損傷模型建立成功率88.89%。2.TTC染色正常組、假手術組未見腦組織梗死灶;模型組和干預組缺血側皮質可見蒼白色梗死灶,干預組梗死面積較模型組減小,且干預組大鼠神經(jīng)功能評分較模型組改善。3.電鏡觀察正常組及假手術組神經(jīng)細胞核膜完整、染色質結構正常,可以觀察到溶酶體的存在,數(shù)量較少,未見自噬體。模型組3小時可見溶酶體數(shù)量增多、體積增大,可觀察到出現(xiàn)自噬體;6~12h自噬體、溶酶體數(shù)量顯著增多,可觀察到自噬體包裹的細胞器殘體,可觀察到呈泡狀的自噬溶酶體;24小時仍可見自噬體、溶酶體,但數(shù)量較前均有所減少。干預組各時間點鏡下所見與模型組相似,但自噬體、自噬溶酶體等結構數(shù)量較之減少。4.Western bolt檢測cathepsin L:正常組、假手術組各時間點cathepsin L的表達相同;模型組cathepsin L的表達在大鼠腦缺血再灌注3h、6h、12h呈上升趨勢,12h達到高峰,24h下降,各時間點表達量均高于假手術組。干預Cathepsin L在各時間點的表達趨勢與模型組相同,各時間點的表達量均高于假手術組,低于模型組。5.Western bolt檢測LC3II蛋白:正常組、假手術組各時間點LC3II蛋白的表達相同;模型組LC3II蛋白的表達在大鼠腦缺血再灌注3h、6h、12h呈上升趨勢,12h達到高峰,24h下降,各時間點表達量均高于假手術組。干預組LC3II蛋白在各時間點的表達趨勢與模型組相同,各時間點的表達量均高于假手術組,低于模型組。結論(1)在大鼠腦缺血再灌注損傷后,細胞自噬的活性增強。(2)在大鼠腦缺血再灌注損傷中,Cathepsin L參與了細胞自噬的介導。
【關鍵詞】：腦缺血再灌注損傷 溶酶體 細胞自噬 Cathepsin L LC3 II
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R743.3
【目錄】：

• 摘要6-9
• Abstract9-14
• 第1章 緒論14-16
• 第2章 材料和方法16-26
• 2.1 材料16-20
• 2.1.1 主要儀器及設備16-17
• 2.1.2 主要實驗試劑及藥品17
• 2.1.3 常用溶液的配置17-20
• 2.2 實驗動物20
• 2.3 方法20-24
• 2.3.1 實驗動物分組20
• 2.3.2 建立大鼠大腦中動脈（MCA）缺血再灌注模型20-22
• 2.3.3 大鼠側腦室注射給藥22
• 2.3.4 處理標本22-24
• 2.4 統(tǒng)計學分析24-26
• 第3章 結果26-36
• 3.1 動物模型成功率26
• 3.2 神經(jīng)功能評分26-27
• 3.3 TTC染色27-28
• 3.4 Western bolt檢測28-33
• 3.4.1 Western bolt檢測大鼠腦缺血再灌注后各時間點cathepsin L的表達及Z-FY-DMK對其的作用28-30
• 3.4.2 Western bolt檢測大鼠腦缺血再灌注后各時間點LC3II蛋白的表達及Z-FY-DMK對其的作用30-33
• 3.5 電鏡檢測33-36
• 第4章 討論36-44
• 4.1 大鼠腦缺血再灌注的模型制備36-37
• 4.1.1 實驗動物的選擇36
• 4.1.2 實驗大鼠的選擇36-37
• 4.2 腦缺血再灌注損傷概述37-38
• 4.3 腦缺血再灌注損傷與cathepsin L38-39
• 4.4 腦缺血再灌注損傷與細胞自噬39-41
• 4.4.1 細胞自噬概述39
• 4.4.2 細胞自噬的檢測39-41
• 4.5 細胞自噬與cathepsin L41-44
• 第5章 結論44-46
• 參考文獻46-50
• 附錄50-52
• 綜述52-60
• 參考文獻57-60
• 作者攻讀學位期間的科研成果60-62
• 致謝62

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