發(fā)布時間：2022-10-22 20:42

　　[研究背景] 很多miRNA在基因組中以簇的形式存在,序列相似、轉錄方向一致且協(xié)同發(fā)揮作用。miR-183、miR-96和miR-182共同構成miR-183/96/182簇。miR-183/96/182簇的成員位于人類染色體7q32.2,相距4413bp內且轉錄方向相同。這些miRNA轉錄于基因間區(qū)且有獨立的啟動子。這些miRNA的協(xié)同表達可能在人類生命活動的正常生理或病理條件下（包括腫瘤）發(fā)揮著重要的作用。人類miR-183/96/182簇在多種腫瘤中高表達,且這種過表達對于膀胱癌、前列腺癌和尿細胞學搜檢來說是一種很好的標志物。miR-183/96/182簇的多效性體現(xiàn)在可調節(jié)髓母細胞瘤的細胞存活、增殖和遷移。然而,miR-183/96/182簇的協(xié)同表達在膠質瘤的發(fā)生和發(fā)展中的作用機制尚不清楚。 [miR-183/96/182簇調控膠質瘤細胞的增殖與凋亡] 原位雜交及qRT-PCR均證實miR-183、miR-96和miR-182在腦膠質瘤中高表達。在U251、U87細胞中轉染miR-183/96/182簇中的單個或全部miRNA mimics48h后進行MTT... 

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
主要縮略詞簡表
第一章 前言
技術路線
第二章 材料與方法
    2.1 細胞
    2.2 組織樣本
    2.3 菌株
    2.4 質粒載體
    2.5 酶類
    2.6 試劑盒
    2.7 抗體
    2.8 其它生化試劑
    2.9 細胞培養(yǎng)用試劑
    2.10 探針及引物
    2.11 主要儀器
    2.12 原位雜交檢測miRNA的表達
    2.13 原位雜交結果分析
    2.14 培養(yǎng)細胞及組織的RNA制備
        2.14.1 培養(yǎng)細胞總RNA的抽提
        2.14.2 組織細胞總RNA的抽提
        2.14.3 RNA中痕量DNA的消化
    2.15 real-time PCR檢測
        2.15.1 miRNA檢測
        2.15.2 mRNA檢測
    2.16 細胞蛋白抽提
        2.16.1 細胞總蛋白的抽提
        2.16.2 線粒體/胞漿蛋白抽提
        2.16.3 BCA測蛋白濃度
    2.17 Western blot檢測
    2.18 miRNA和si-RNA轉染目的細胞
    2.19 MTT
    2.20 Hoechst檢測細胞凋亡
    2.21 流式細胞分析細胞凋亡的變化
    2.22 miRNA的靶基因驗證
    2.23 JC-1檢測MMP(△Ψm)
    2.24 H_2DCFDA檢測胞內ROS生成
    2.25 統(tǒng)計分析
第三章 結果
    1. miR-183/96/182簇在膠質瘤組織中高表達
    2. miR-183/96/182簇促進膠質瘤細胞的增殖并抑制FGF9、CPEB1和FOXO1的表達
    3. miR-183/96/182簇調節(jié)細胞凋亡和線粒體跨膜電位(MMP,△Ψm)
    4. miR-183/96/182簇對膠質瘤細胞內ROS生成的影響
    5. miR-183/96/182簇調控AKT/P53/凋亡信號通路
    6. miR-183/96/182簇沉默可以增加膠質瘤細胞對化療的敏感性
第四章 討論
結論
參考文獻
綜述
    參考文獻
致謝
攻讀碩士學位期間主要研究成果
個人簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3696836