發(fā)布時(shí)間：2022-10-22 20:42

　　[研究背景] 很多miRNA在基因組中以簇的形式存在,序列相似、轉(zhuǎn)錄方向一致且協(xié)同發(fā)揮作用。miR-183、miR-96和miR-182共同構(gòu)成miR-183/96/182簇。miR-183/96/182簇的成員位于人類染色體7q32.2,相距4413bp內(nèi)且轉(zhuǎn)錄方向相同。這些miRNA轉(zhuǎn)錄于基因間區(qū)且有獨(dú)立的啟動(dòng)子。這些miRNA的協(xié)同表達(dá)可能在人類生命活動(dòng)的正常生理或病理?xiàng)l件下（包括腫瘤）發(fā)揮著重要的作用。人類miR-183/96/182簇在多種腫瘤中高表達(dá),且這種過(guò)表達(dá)對(duì)于膀胱癌、前列腺癌和尿細(xì)胞學(xué)搜檢來(lái)說(shuō)是一種很好的標(biāo)志物。miR-183/96/182簇的多效性體現(xiàn)在可調(diào)節(jié)髓母細(xì)胞瘤的細(xì)胞存活、增殖和遷移。然而,miR-183/96/182簇的協(xié)同表達(dá)在膠質(zhì)瘤的發(fā)生和發(fā)展中的作用機(jī)制尚不清楚。 [miR-183/96/182簇調(diào)控膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖與凋亡] 原位雜交及qRT-PCR均證實(shí)miR-183、miR-96和miR-182在腦膠質(zhì)瘤中高表達(dá)。在U251、U87細(xì)胞中轉(zhuǎn)染miR-183/96/182簇中的單個(gè)或全部miRNA mimics48h后進(jìn)行MTT... 

【文章頁(yè)數(shù)】：60 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
主要縮略詞簡(jiǎn)表
第一章 前言
技術(shù)路線
第二章 材料與方法
    2.1 細(xì)胞
    2.2 組織樣本
    2.3 菌株
    2.4 質(zhì)粒載體
    2.5 酶類
    2.6 試劑盒
    2.7 抗體
    2.8 其它生化試劑
    2.9 細(xì)胞培養(yǎng)用試劑
    2.10 探針及引物
    2.11 主要儀器
    2.12 原位雜交檢測(cè)miRNA的表達(dá)
    2.13 原位雜交結(jié)果分析
    2.14 培養(yǎng)細(xì)胞及組織的RNA制備
        2.14.1 培養(yǎng)細(xì)胞總RNA的抽提
        2.14.2 組織細(xì)胞總RNA的抽提
        2.14.3 RNA中痕量DNA的消化
    2.15 real-time PCR檢測(cè)
        2.15.1 miRNA檢測(cè)
        2.15.2 mRNA檢測(cè)
    2.16 細(xì)胞蛋白抽提
        2.16.1 細(xì)胞總蛋白的抽提
        2.16.2 線粒體/胞漿蛋白抽提
        2.16.3 BCA測(cè)蛋白濃度
    2.17 Western blot檢測(cè)
    2.18 miRNA和si-RNA轉(zhuǎn)染目的細(xì)胞
    2.19 MTT
    2.20 Hoechst檢測(cè)細(xì)胞凋亡
    2.21 流式細(xì)胞分析細(xì)胞凋亡的變化
    2.22 miRNA的靶基因驗(yàn)證
    2.23 JC-1檢測(cè)MMP(△Ψm)
    2.24 H_2DCFDA檢測(cè)胞內(nèi)ROS生成
    2.25 統(tǒng)計(jì)分析
第三章 結(jié)果
    1. miR-183/96/182簇在膠質(zhì)瘤組織中高表達(dá)
    2. miR-183/96/182簇促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖并抑制FGF9、CPEB1和FOXO1的表達(dá)
    3. miR-183/96/182簇調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡和線粒體跨膜電位(MMP,△Ψm)
    4. miR-183/96/182簇對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞內(nèi)ROS生成的影響
    5. miR-183/96/182簇調(diào)控AKT/P53/凋亡信號(hào)通路
    6. miR-183/96/182簇沉默可以增加膠質(zhì)瘤細(xì)胞對(duì)化療的敏感性
第四章 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間主要研究成果
個(gè)人簡(jiǎn)歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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