本文關(guān)鍵詞：自噬對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎小鼠線粒體凋亡及炎癥反應(yīng)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景與目的多發(fā)性硬化(multiple sclerosis, MS)是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)(central nervous system)的自身免疫性疾病,其典型病理改變?yōu)榘踪|(zhì)脫髓鞘、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、軸突損傷及血腦屏障的破壞等,有新舊病灶共存的特點(diǎn)。多發(fā)性硬化的病理形成機(jī)制尚不完全明確,近年通過(guò)尸檢和一系列影像學(xué)等檢查發(fā)現(xiàn)廣泛的少突膠質(zhì)細(xì)胞凋亡是最早出現(xiàn)的病理改變,并隨即出現(xiàn)小膠質(zhì)細(xì)胞激活、聚集,而此時(shí)髓鞘形態(tài)完整,無(wú)明顯炎細(xì)胞浸潤(rùn)及軸突損傷等。之后數(shù)周甚至數(shù)月才出現(xiàn)單核巨噬細(xì)胞及淋巴細(xì)胞的浸潤(rùn)、白質(zhì)脫髓鞘及軸突損傷等MS典型的病理改變,學(xué)者們用激活前損傷區(qū)(preactive lesion)的新概念來(lái)代表MS這種新發(fā)病灶出現(xiàn)時(shí)的早期病理改變,少突膠質(zhì)細(xì)胞凋亡和小膠質(zhì)細(xì)胞激活聚集是激活前損傷區(qū)特征性的改變。實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(Experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE)C57BL/6小鼠模型是研究MS的理想動(dòng)物模型,病程中呈典型的緩解-復(fù)發(fā)過(guò)程。本課題組早期研究發(fā)現(xiàn),在EAE小鼠中,線粒體能量衰竭和損傷是引起少突膠質(zhì)細(xì)胞凋亡的始動(dòng)因素,可能是激活前損傷區(qū)形成的重要原因,從而導(dǎo)致MS典型病理改變的發(fā)生。并且我們發(fā)現(xiàn)線粒體損傷和神經(jīng)細(xì)胞凋亡伴隨整個(gè)EAE病理過(guò)程,與疾病嚴(yán)重程度一致。但造成線粒體損傷的原因尚不清楚。自噬是細(xì)胞維持穩(wěn)態(tài)的重要生物現(xiàn)象,當(dāng)線粒體受損時(shí),細(xì)胞可啟動(dòng)自噬來(lái)清除受損的線粒體及凋亡因子,從而保護(hù)細(xì)胞免于壞死、凋亡的危險(xiǎn)。此外,一系列研究證實(shí)自噬對(duì)T細(xì)胞具有前存活和前死亡的雙重作用,是自身免疫及炎癥反應(yīng)的重要介導(dǎo)者。在離體培養(yǎng)的單核細(xì)胞中,也發(fā)現(xiàn)抑制自噬能促進(jìn)IL-1β的分泌。說(shuō)明白噬對(duì)炎癥反應(yīng)的發(fā)生也起著至關(guān)重要的作用。本實(shí)驗(yàn)探索自噬在EAE病程中的時(shí)序變化,并探討自噬激活劑雷帕霉素(Rapamycin, RAP)對(duì)EAE線粒體凋亡的影響,以及予以自噬抑制劑3甲基腺嘌呤(3-Methyladenine,3-MA)后EAE小鼠炎癥反應(yīng)程度的變化,初步闡明自噬對(duì)EAE小鼠線粒體凋亡及炎癥反應(yīng)的作用,旨在為多發(fā)性硬化的治療提供新的思路。方法第一部分：將96只C57BL/6雌性小鼠分為正常組、EAE模型組、EAE+雷帕霉素組、EAE+PBS組,EAE+雷帕霉素組自免疫日起每日腹腔注射雷帕霉素(lmg/kg/d)。神經(jīng)功能評(píng)分觀察各組小鼠神經(jīng)功能變化。于免疫后3d、7d、16d、30d通過(guò)Western Blot檢測(cè)各組小鼠腦白質(zhì)Beclin-1及Cytochrome(cyt-c)表達(dá)水平,免疫熒光雙標(biāo)檢測(cè)免疫后7天caspase-3在少突膠質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)水平。第二部分：20只C57BL/6雌性小鼠建模后分別于3、7、16、30 d用Western blot檢測(cè)CNS中LC3B的變化。另將60只小鼠分為正常對(duì)照組、EAE模型組、EAE+3-MA組,EAE+3-MA組白免疫日起每日腹腔注射3-MA(100 nmol/pL,2 pL/d)神經(jīng)功能評(píng)分觀察備組小鼠神經(jīng)功能變化。免疫組化檢測(cè)各組小鼠免疫后7 d小膠質(zhì)細(xì)胞激活情況,Western blot檢測(cè)免疫后急性期(16d)慢性期(30 d)白介素-1β(IL-1β)的表達(dá),HE染色觀察CNS炎性細(xì)胞浸潤(rùn)情況。結(jié)果1. Western bolt示與正常組相比,EAE組LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ自免疫后7d開始降低(P0.05)此后一直呈低表達(dá)水平(P0.01)beclinl表達(dá)水平與LC3B一致；cyt-c的表達(dá)自7d時(shí)顯著升高(P0.01),于16d時(shí)達(dá)高峰(P0.01)自噬激活劑RAP能升高自噬相關(guān)蛋白beclinl的水平,抑制cyt-c表達(dá)水平(P0.05)免疫熒光雙標(biāo)示EAE免疫后7d少突膠質(zhì)細(xì)胞即高表達(dá)caspase-3,EAE+RAP組少突膠質(zhì)細(xì)胞caspase-3表達(dá)水平低于模型組(P0.05)2.免疫組織化學(xué)示EAE免疫后7 d即有小膠質(zhì)細(xì)胞激活,EAE+3-MA組EAE小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞激活程度較EAE模型組嚴(yán)重P0.05)Western bolt示免疫后16、30 d,EAE模型組高表達(dá)IL-1β,EAE+3-MA組小鼠IL-1β表達(dá)水平較同時(shí)間點(diǎn)EAE模型組商P0.05)HE染色結(jié)果顯示,EAE+3-MA組炎細(xì)胞浸潤(rùn)比同時(shí)間點(diǎn)EAE模型組加重(P0.05)呈典型“血管袖套樣”改變；3.EAE小鼠在最早免疫后9 d開始發(fā)病,大多數(shù)集中在12’16 d發(fā)病,并于16’20 d達(dá)到疾病高峰；EAE+RAP組EAE小鼠較模型組神經(jīng)功能評(píng)分顯著降低,疾病嚴(yán)重程度減輕(P0.01)EAE+3-MA組小鼠發(fā)病時(shí)間提前,神經(jīng)功能評(píng)分增高,疾病嚴(yán)重程度加重(P0.05)結(jié)論1.在EAE免疫后7天就出現(xiàn)了自噬水平的降低,提示自噬水平的降低可能是EAE病理改變發(fā)生、發(fā)展的重要原因。2.自噬激活劑雷帕霉素能增加EAE自噬水平,降低免疫后早期少突膠質(zhì)細(xì)胞凋亡,減少病程中線粒體凋亡關(guān)鍵蛋白cyt-c釋放,可能是雷帕霉素通過(guò)增強(qiáng)自噬水平清除受損線粒體從而抑制線粒體損傷介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。3.自噬抑制劑3-MA能促進(jìn)EAE免疫后早期小膠質(zhì)激活、聚集,增加EAE急性期、慢性期IL-1β表達(dá)及炎細(xì)胞浸潤(rùn),從而促進(jìn)炎癥的發(fā)生。4.自噬在EAE中有著抑制激活前損傷區(qū)形成、線粒體凋亡及抗炎的作用,對(duì)MS尋求治療及預(yù)防復(fù)發(fā)提供了新的臨床思路。
【關(guān)鍵詞】：實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎 激活前損傷區(qū) 自噬 線粒體凋亡 炎癥反應(yīng)
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R744.51
【目錄】：

• 英漢縮略名詞對(duì)照5-6
• 中文摘要6-10
• 英文摘要10-15
• 前言15-17
• 第一部分 自噬對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎小鼠激活前損傷區(qū)及線粒體凋亡的影響17-28
• 1 材料與試劑17-19
• 2 實(shí)驗(yàn)方法19-22
• 3 結(jié)果22-26
• 4 討論26-28
• 第二部分 自噬在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎小鼠中的抗炎作用28-37
• 1 材料與試劑28-29
• 2 實(shí)驗(yàn)方法29-31
• 3 結(jié)果31-35
• 4 討論35-37
• 全文總結(jié)37-38
• 參考文獻(xiàn)38-41
• 文獻(xiàn)綜述41-49
• 參考文獻(xiàn)45-49
• 致謝49-50
• 在讀期間發(fā)表論文50

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1 葉青;鄭民華;;自噬的分子機(jī)制與病理生理意義[J];國(guó)際病理科學(xué)與臨床雜志;2007年04期

2 何韜;王海杰;譚玉珍;;自噬在細(xì)胞存活和死亡中的作用[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2008年01期

3 張志才;邵增務(wù);;自噬分子機(jī)制的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2008年01期

4 趙勇;師長(zhǎng)宏;伍靜;張海;;自噬的形態(tài)特征及分子調(diào)控機(jī)制[J];中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志;2010年10期

5 王梅;李慶林;;自噬與癌癥的治療[J];安徽醫(yī)藥;2010年08期

6 伍靜;趙勇;師長(zhǎng)宏;張海;;自噬的形態(tài)特征及分子調(diào)控[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2010年20期

7 王雄;譚璐;;自噬研究進(jìn)展[J];亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥;2010年10期

8 卞龍艷;;運(yùn)動(dòng)與自噬的關(guān)系進(jìn)展研究[J];齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2011年07期

9 王偉;徐忠東;陶瑞松;;腫瘤發(fā)生過(guò)程中自噬與凋亡關(guān)系的研究[J];合肥師范學(xué)院學(xué)報(bào);2011年06期

10 王光輝;;自噬與疾病[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2012年03期

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1 韋雪;漆永梅;張迎梅;;鎘、活性氧自由基與自噬發(fā)生的分子機(jī)制[A];中國(guó)活性氧生物學(xué)效應(yīng)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集（第一冊(cè)）[C];2011年

2 秦正紅;粱中琴;陶陸陽(yáng);黃強(qiáng);劉春風(fēng);蔣星紅;倪宏;邢春根;;自噬在細(xì)胞生存與死亡中的作用[A];中國(guó)藥理學(xué)會(huì)第九次全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨全國(guó)藥理學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2007年

3 秦正紅;;自噬與腫瘤和神經(jīng)細(xì)胞生存——藥物作用的新靶位[A];全國(guó)生化與分子藥理學(xué)藥物靶點(diǎn)研討會(huì)論文摘要集[C];2008年

4 李芹;丁壯;;自噬功能研究進(jìn)展[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第八屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨第十五次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2013年

5 胡晨;張璇;滕衍斌;胡海汐;周叢照;;家蠶中自噬相關(guān)蛋白Atg8的結(jié)構(gòu)研究[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)2009年學(xué)術(shù)交流會(huì)論文摘要匯編[C];2009年

6 陳希;李民;Xiao-Ming Yin;李林潔;;通過(guò)不同途徑誘導(dǎo)自噬的化合物對(duì)Atg9的依賴性不同[A];細(xì)胞—生命的基礎(chǔ)——中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)2013年全國(guó)學(xué)術(shù)大會(huì)·武漢論文摘要集[C];2013年

7 陳涓涓;敬靜;蔡元博;張俊龍;;針對(duì)活體細(xì)胞自噬行為的發(fā)光金屬配合物的設(shè)計(jì)[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第28屆學(xué)術(shù)年會(huì)第8分會(huì)場(chǎng)摘要集[C];2012年

8 寧曉潔;鐘自彪;王彥峰;付貞;葉啟發(fā);;缺血再灌注誘導(dǎo)小鼠肝細(xì)胞自噬[A];2013中國(guó)器官移植大會(huì)論文匯編[C];2013年

9 吳曉琦;李丹丹;鄧蓉;江山;楊芬;馮公侃;朱孝峰;;CaMKKβ磷酸化Beclin 1調(diào)控自噬及其在腫瘤治療中的作用[A];2011醫(yī)學(xué)科學(xué)前沿論壇第十二屆全國(guó)腫瘤藥理與化療學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2011年

10 周鴻雁;裴中;陳杰;申存周;錢浩;劉妍梅;冼文彪;鄭一帆;陳玲;;線粒體動(dòng)力改變參與了LRRK2突變導(dǎo)致的自噬[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十三次全國(guó)神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

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1 生命學(xué)院;俞立課題組在《科學(xué)》發(fā)文揭示自噬調(diào)控的重要機(jī)制[N];新清華;2012年

2 周飛 張粹蘭;花櫚木“自噬”可抗癌[N];廣東科技報(bào);2011年

3 張明永;水稻自噬基因研究取得新進(jìn)展[N];廣東科技報(bào);2011年

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1 賈盛楠;轉(zhuǎn)錄因子p8調(diào)控自噬的功能研究[D];浙江大學(xué);2015年

2 皮會(huì)豐;DNM1L蛋白介導(dǎo)的線粒體自噬在鎘致肝臟毒性中的作用研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

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5 陳江偉;自噬在椎間盤退變中的作用及機(jī)制研究[D];上海交通大學(xué);2014年

6 李榮榮;自噬在布比卡因肌毒性中的作用及機(jī)制研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2015年

7 王維;NF-κB信號(hào)通路參與介導(dǎo)的自噬在高血壓大鼠心血管重構(gòu)的作用研究[D];山東大學(xué);2015年

8 劉春朋;日糧硒缺乏對(duì)雞肝臟蛋白質(zhì)組學(xué)及自噬變化的影響[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

9 梁蓓蓓;P53凋亡刺激蛋白ASPP2調(diào)控細(xì)胞自噬的研究[D];上海交通大學(xué);2012年

10 易聰;乙�；谧允蛇^(guò)程中的功能和分子機(jī)制的研究[D];清華大學(xué);2012年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 匡紅;Jnk2通過(guò)smARF的降解來(lái)調(diào)控壓力誘導(dǎo)的線粒體自噬及組織損傷[D];浙江理工大學(xué);2015年

2 洪永桃;自噬在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞中的作用及甲氨蝶呤對(duì)自噬的影響[D];川北醫(yī)學(xué)院;2015年

3 李寧;自噬在嗎啡心肌保護(hù)中的作用及機(jī)制研究[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

4 劉冰;腦缺血預(yù)處理對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注后自噬及凋亡的影響[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

5 王存凱;microRNA-30a-5p通過(guò)抑制自噬阻止肝星狀細(xì)胞激活[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

6 張宇程;泛素連接酶HOIL-1L在線粒體自噬中的功能與機(jī)制研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2015年

7 唐芙蓉;自噬對(duì)奶山羊雄性生殖干細(xì)胞生物學(xué)特性的影響[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

8 陳軍童;腎損傷分子1對(duì)高糖誘導(dǎo)人腎小管上皮細(xì)胞自噬作用的影響[D];鄭州大學(xué);2015年

9 包勇;Kap1在LBH589誘導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞MCF-7自噬形成中的作用[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

10 魏園玉;P53缺失型HL-60白血病細(xì)胞內(nèi)Nucleostemin下調(diào)對(duì)mTOR通路介導(dǎo)的自噬活性的影響[D];鄭州大學(xué);2015年

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本文編號(hào)：368994