本文關(guān)鍵詞：毛蕊異黃酮通過調(diào)控TGF-β介導(dǎo)的間質(zhì)化改變抑制膠質(zhì)母細(xì)胞瘤遷徙和侵襲，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:采用人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株U87和U251,研究毛蕊異黃酮(calycosin)抑制人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤遷徙和侵襲的作用及分子機(jī)制。方法:1、不同濃度calycosin處理U87和U251細(xì)胞24h,MTT檢測calycosin對U87和U251生長增殖的影響。2、100、200μM calycosin分別處理U87和U251細(xì)胞24h,transwell遷徙侵襲實(shí)驗(yàn)檢測calycosin對U87和U251遷徙和侵襲的影響;real-time PCR、western blot檢測與遷徙侵襲相關(guān)分子及TGF-β表達(dá)。3、轉(zhuǎn)染TGF-β質(zhì)粒到U87細(xì)胞,calycosin處理24h,transwell遷徙侵襲實(shí)驗(yàn)及western blot檢測TGF-β轉(zhuǎn)染能否逆轉(zhuǎn)calycosin對U87細(xì)胞遷徙侵襲的影響;4、肩胛下注射U87細(xì)胞制作裸鼠皮下膠質(zhì)瘤模型,觀察尾靜脈注射calycosin對裸鼠的影響,每兩天給裸鼠稱重測量皮下腫瘤的大小,western blot檢測瘤塊中vimentin、N-cadherin、snail等分子表達(dá)。結(jié)果:1、100μM、200μM calycosin處理U87、U251細(xì)胞24h,MTT檢測對U87和U251活力影響很小(P0.05)。2、100μM、200μM calycosin處理膠質(zhì)母細(xì)胞瘤Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測,發(fā)現(xiàn)100μM、200μM的calycosin作用24h可以抑制U87和U251遷移和侵襲的能力,且抑制作用具有濃度劑量依賴(P0.05)。3、100μM、200μM calycosin作用U87、U251 24h對vimentin、N-cadherin、snail、MMP2、MMP9及TGF-β的表達(dá)有抑制作用,并存在濃度劑量依賴關(guān)系。4、轉(zhuǎn)染TGF-β質(zhì)粒后,能逆轉(zhuǎn)calycosin的抗遷徙侵襲作用,并逆轉(zhuǎn)calycosin引起的vimentin、N-cadherin等間質(zhì)相關(guān)分子及MMP2、MMP9的蛋白表達(dá)變化(P0.05)。5、在體內(nèi)裸鼠實(shí)驗(yàn)中,皮下腫瘤的大小實(shí)驗(yàn)組小于對照組,皮下腫瘤中TGF-β的表達(dá)實(shí)驗(yàn)組低于對照組,皮下腫瘤中vimentin、N-cadherin等分子的表達(dá)實(shí)驗(yàn)組低于對照組(P0.05)。結(jié)論:1、calycosin在體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)均能抑制膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的遷徙侵襲。2、calycosin通過調(diào)控TGF-β1的表達(dá)影響膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化及MMP2、MMP9表達(dá)從而抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷徙和侵襲。
【關(guān)鍵詞】：毛蕊異黃酮 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化 遷徙 侵襲
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R739.4
【目錄】：

• 摘要3-5
• abstract5-9
• 中英文縮略詞表9-10
• 第1章 引言10-12
• 第2章 實(shí)驗(yàn)材料12-15
• 2.1 U87和U251細(xì)胞12
• 2.2 免疫缺陷裸鼠12
• 2.3 主要設(shè)備儀器12
• 2.4 主要試劑耗材12-13
• 2.5 主要試劑配法13-15
• 2.5.1 完全培養(yǎng)基13
• 2.5.2 6.5×磷酸鹽緩沖液（PBS）13-14
• 2.5.3 12.5×電泳緩沖液14
• 2.5.4 calycosin配制14
• 2.5.5 結(jié)晶紫染色溶液：14
• 2.5.6 6.5×轉(zhuǎn)膜緩沖液14-15
• 第3章 實(shí)驗(yàn)方法15-23
• 3.1 U87和U251培養(yǎng)15
• 3.1.1 細(xì)胞培養(yǎng)和傳代15
• 3.1.2 細(xì)胞復(fù)蘇及凍存15
• 3.2 MTT實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞生長增殖能力15-16
• 3.3 Transwell實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞遷移16
• 3.4 Transwell實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞侵襲16-17
• 3.5 RNA提取及real-time pcr17-19
• 3.5.1 RNA的提取及濃度測定17
• 3.5.2 基因的反轉(zhuǎn)錄17-18
• 3.5.3 Q-PCR測定基因表達(dá)18-19
• 3.6 轉(zhuǎn)染用質(zhì)粒的準(zhǔn)備19
• 3.7 細(xì)胞轉(zhuǎn)染19-20
• 3.8 Western Blotting20-21
• 3.8.1 提取蛋白20
• 3.8.2 SDS－PAGE電泳20-21
• 3.9 裸鼠皮下腫瘤模型建立21
• 3.10 Western Blot檢測裸鼠皮下瘤塊中侵襲相關(guān)分子的蛋白表達(dá)21-22
• 3.11數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理22-23
• 第4章 結(jié)果23-36
• 4.1 calycosin對人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤U87和U251細(xì)胞增殖生長的影響23-24
• 4.2 transwell遷徙實(shí)驗(yàn)檢測calycosin對人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤遷徙的影響24-25
• 4.3 transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測calycosin對人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤侵襲的影響25-26
• 4.4 calycosin對U87和U251間質(zhì)相關(guān)分子及基質(zhì)金屬蛋白酶的基因及蛋白表達(dá)有抑制作用26-29
• 4.5 calycosin對U87和U251細(xì)胞TGF-β表達(dá)有抑制作用29-30
• 4.6 轉(zhuǎn)染TGF-β1 質(zhì)粒后能逆轉(zhuǎn)calycosin引起的間質(zhì)相關(guān)分子及基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá)變化并逆轉(zhuǎn)calycosin引起的現(xiàn)象30-33
• 4.7 在裸鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中calycosin能抑制U87細(xì)胞的遷徙和侵襲33-36
• 第5章 討論36-39
• 第6章 結(jié)論39-40
• 致謝40-41
• 參考文獻(xiàn)41-43
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果43-44
• 綜述44-50
• 參考文獻(xiàn)48-50

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本文編號：367228