本文關(guān)鍵詞：腦缺血預(yù)處理誘導(dǎo)腦缺血耐受過(guò)程中NF-κB P50、NF-κB P65以及PPARγ蛋白的表達(dá)變化，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:以往大量的實(shí)驗(yàn)證明,預(yù)先給予輕微的、短時(shí)的、不至于對(duì)錐體神經(jīng)元造成損傷的腦缺血預(yù)處理(cerebral ischemic preconditioning,CIP),可以減少缺血-再灌注損傷,產(chǎn)生腦缺血耐受(brain ischemictolerance,BIT)。腦缺血預(yù)處理對(duì)機(jī)體的保護(hù)作用實(shí)際上是通過(guò)啟動(dòng)機(jī)體內(nèi)源性保護(hù)機(jī)制實(shí)現(xiàn)的。此理論自從1990年被日本著名科學(xué)家Kitagawa提出后,全世界許多科學(xué)家進(jìn)行了大量的動(dòng)物實(shí)驗(yàn),證明了此觀點(diǎn)的正確性。核轉(zhuǎn)錄因子-κB(Nuclear factor kappa B,NF-κB)是一種細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子,NF-κB信號(hào)通路屬于受調(diào)蛋白水解酶依賴的受體信號(hào)傳導(dǎo)通路,其與腫瘤的發(fā)生、生長(zhǎng)、分化、凋亡、感染以及轉(zhuǎn)移密切相關(guān);此外,NF-κB在靜息狀態(tài)下與IκB在細(xì)胞的胞漿中形成復(fù)合體,當(dāng)某些因素刺激細(xì)胞時(shí),可使IκB發(fā)生磷酸化并與NF-κB發(fā)生解離,從而使NF-κB激活,被激活的NF-κB參與到基因轉(zhuǎn)錄過(guò)程中。NF-κB有許多亞型,而P50和P65就是其中最重要的兩個(gè),它們?cè)趨f(xié)調(diào)免疫功能以及抗感染方面有著重要的作用。但在腦缺血預(yù)處理誘導(dǎo)腦缺血耐受過(guò)程中不同時(shí)間段如何變化目前尚不清楚。過(guò)氧化物酶增殖物激活受體(peroxisome prolifer atoractivatedreceptors,PPAR)是一類可被配體激活的核轉(zhuǎn)錄因子超家族成員,其對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化、凋亡等具有重要調(diào)節(jié)作用。PPAR包括3種亞型,即PPARα、PPARβ、PPARγ。其中PPARγ被激活后可以產(chǎn)生多種生物學(xué)效應(yīng),可以很好的保護(hù)腦組織對(duì)抗機(jī)體的缺血性打擊,而且在許多臨床疾病中如:肝硬化、動(dòng)脈粥樣硬化、高血壓以及高血脂等具有很好的緩解效果�；谝陨戏治�,本實(shí)驗(yàn)旨在觀察腦缺血預(yù)處理誘導(dǎo)腦缺血耐受過(guò)程中在海馬CA1區(qū)NF-κB P50和P65以及PPARγ蛋白表達(dá)的變化,從而為臨床上腦缺血疾病的預(yù)防和治療提供相應(yīng)的理論依據(jù)。方法:采用四血管閉塞全腦缺血模型,選用健康雄性Wistar大鼠(280-300g)102只,隨機(jī)分為以下六組:(1)control組(n=3):不進(jìn)行任何處理。(2)sham組(n=3):暴露雙側(cè)椎動(dòng)脈,暴露雙側(cè)頸總動(dòng)脈,但均不阻斷其血流。(3)凝閉椎動(dòng)脈(vertebral artery occlusion,VAO)組(n=24):永久性凝閉雙側(cè)椎動(dòng)脈,48 h后暴露雙側(cè)頸總動(dòng)脈,不阻斷血流。(4)CIP組(n=24):永久性凝閉椎動(dòng)脈,48 h后夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈3min后恢復(fù)血流再灌注。(5)損傷性缺血(ischemic insult,II)組(n=24):永久性凝閉椎動(dòng)脈,48 h后夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈8 min后恢復(fù)血流再灌注。(6)CIP+II組(n=24):永久性凝閉椎動(dòng)脈,48 h后先夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈3 min,然后恢復(fù)血流再灌注48 h后,再夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈8 min后恢復(fù)血流再灌注。除control組和sham組之外,其余4組都選取8個(gè)時(shí)間點(diǎn),分別是假手術(shù)處理后或末次缺血后的0 min、15 min、30 min、1 h、3 h、6 h、2 d、7 d(每個(gè)時(shí)間點(diǎn)n=3)。在規(guī)定的時(shí)間點(diǎn),斷頭取大鼠的腦組織,通過(guò)應(yīng)用硫堇染色觀察大鼠海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)元的存活情況;通過(guò)免疫組織化學(xué)技術(shù)(immunohistochemistry)觀察NF-κB P50、P65、PPARγ蛋白在大鼠海馬CA1區(qū)的表達(dá)程度以及變化趨勢(shì)。結(jié)果:1神經(jīng)病理學(xué)評(píng)價(jià)通過(guò)對(duì)大鼠腦片進(jìn)行硫堇染色可以觀察到,control組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元排列致密有序、整齊、2-3層,細(xì)胞形態(tài)完整,胞核清晰可見(jiàn),核仁飽滿。與control組對(duì)比,Sham組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元形態(tài)無(wú)顯著變化,ND無(wú)顯著差異(P0.05)。VAO組與sham組對(duì)比,各個(gè)時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞形態(tài)無(wú)顯著變化,ND無(wú)顯著差異(P0.05)。CIP組各時(shí)間點(diǎn)CA1區(qū)的神經(jīng)元均未見(jiàn)顯著損傷,與VAO組各相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)相比,細(xì)胞形態(tài)無(wú)顯著變化,ND無(wú)顯著差異(P0.05)。II組6 h之內(nèi)CA1區(qū)的神經(jīng)元未見(jiàn)顯著損傷;2 d時(shí)可見(jiàn)部分細(xì)胞萎縮、變性、壞死,核仁萎縮,細(xì)胞排列開(kāi)始變得不規(guī)則;7d時(shí)可見(jiàn)大量細(xì)胞變性壞死,正常的神經(jīng)元幾乎不可見(jiàn)。與VAO組相比,2 d和7 d時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞形態(tài)有顯著變化,ND顯著降低(P0.05)。CIP+II組即刻時(shí)間點(diǎn)、6 h時(shí)間點(diǎn)、2 d時(shí)間點(diǎn)CA1區(qū)神經(jīng)元均無(wú)顯著受損;在7 d時(shí)間點(diǎn)有個(gè)別細(xì)胞丟失壞死,細(xì)胞排列較為規(guī)則。與II組對(duì)比,7 d時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞數(shù)量顯著增多,核仁清晰,細(xì)胞排列規(guī)則,具有顯著差異(P0.05)2在腦缺血預(yù)處理誘導(dǎo)腦缺血耐受過(guò)程中,大鼠海馬CA1區(qū)NF-κBP50蛋白表達(dá)的對(duì)比以及變化趨勢(shì)Control組、sham組以及VAO組,可見(jiàn)NF-κB P50蛋白在胞核內(nèi)幾乎不表達(dá),但胞漿內(nèi)有一定數(shù)量的表達(dá)。Sham組與control組相對(duì)比,蛋白表達(dá)量無(wú)顯著差異(P0.05);VAO組與Sham組相對(duì)比,各個(gè)時(shí)間點(diǎn)蛋白表達(dá)量亦無(wú)顯著變化(P0.05)。CIP組即刻時(shí)間點(diǎn)NF-κB P50蛋白在胞核內(nèi)幾乎不表達(dá),但在胞漿內(nèi)有一定表達(dá)量。從30 min起,NF-κB P50蛋白逐漸在胞核內(nèi)開(kāi)始有所表達(dá),積分光密度也顯著增加(P0.05);從1 h開(kāi)始,胞核內(nèi)NF-κB P50的表達(dá)更加顯著,到了6 h時(shí),蛋白表達(dá)在胞核內(nèi)達(dá)到頂峰(P0.05)。2d時(shí),胞核內(nèi)NF-κB P50蛋白表達(dá)量顯著減少,積分光密度也顯著下降,幾乎達(dá)到了VAO組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的水平(P0.05)。此水平一直持續(xù)至7 d時(shí)間點(diǎn)。II組即刻時(shí)間點(diǎn)NF-κB P50在胞核內(nèi)幾乎不表達(dá),但在胞漿內(nèi)有一定表達(dá)量。從30 min開(kāi)始,胞核內(nèi)蛋白表達(dá)量有了顯著升高,與VAO組相比,30 min、1 h、3 h、6 h時(shí)間點(diǎn)胞核內(nèi)的蛋白表達(dá)量有了顯著升高,積分光密度也隨之升高,并在6 h時(shí)間點(diǎn)達(dá)到頂峰(P0.05),此時(shí)胞漿內(nèi)與胞核內(nèi)均可見(jiàn)大量蛋白表達(dá)。2 d時(shí)間點(diǎn)NF-κB P50蛋白含量顯著下降,降低至VAO組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)水平(P0.05)。7 d時(shí)間點(diǎn)由于神經(jīng)元大量死亡,NF-κB P50蛋白含量顯著下降,與VAO組相對(duì)比有顯著降低(P0.05)。CIP+II組即刻時(shí)間點(diǎn)NF-κB P50在胞核內(nèi)幾乎不表達(dá),但在胞漿內(nèi)有一定的表達(dá)量。從30 min開(kāi)始,胞核內(nèi)開(kāi)始逐漸出現(xiàn)蛋白表達(dá),積分光密度也開(kāi)始有所上升,但與即刻時(shí)間點(diǎn)相比差異仍不明顯(P0.05);與即刻時(shí)間點(diǎn)相比,1 h、3 h、6 h時(shí)間點(diǎn)胞核內(nèi)蛋白含量有了顯著上升(P0.05)。2 d時(shí)間點(diǎn)胞核內(nèi)表達(dá)量顯著降低,積分光密度也開(kāi)始降低,幾乎達(dá)到了VAO組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的水平。對(duì)比各組6 h時(shí)間點(diǎn)NF-κB P50蛋白的表達(dá)數(shù)量,與VAO組對(duì)比,CIP組、II組此時(shí)間點(diǎn)NF-κB P50蛋白含量均顯著升高(P0.05);與CIP組相比,II組NF-κB P50蛋白含量進(jìn)一步增高(P0.05);與II組相比,CIP+II組蛋白含量顯著下降(P0.05)。對(duì)比各組7 d時(shí)間點(diǎn)NF-κB P50的表達(dá)數(shù)量,與VAO組相對(duì)比,CIP組NF-κB P50蛋白含量無(wú)顯著差異(P0.05),II組顯著下降(P0.05);與II組相比,CIP+II組NF-κB P50蛋白含量顯著上升(P0.05)。3在腦缺血預(yù)處理誘導(dǎo)腦缺血耐受過(guò)程中,大鼠海馬CA1區(qū)NF-κBP65蛋白表達(dá)的對(duì)比以及變化趨勢(shì)Control組、sham組以及OVA組NF-κB P65蛋白在胞核和胞漿中均有一定程度的表達(dá)。CIP組NF-κB P65蛋白表達(dá)在30 min時(shí)間點(diǎn)之前未見(jiàn)顯著變化(P0.05);從1 h時(shí)間點(diǎn)起積分光密度顯著增加,3 h、6 h時(shí)間點(diǎn)進(jìn)一步增高,胞核和胞漿內(nèi)均有大量蛋白表達(dá),并于6 h時(shí)間點(diǎn)達(dá)到頂峰(P0.05);此后的變化趨勢(shì)與NF-κB P50的一致。II組NF-κB P65蛋白表達(dá)在15 min時(shí)間點(diǎn)之前未見(jiàn)顯著變化;從30min時(shí)間點(diǎn)起積分光密度顯著增加,1 h、3 h、6 h時(shí)間點(diǎn)進(jìn)一步增高,胞核和胞漿內(nèi)均有大量蛋白表達(dá),并于6 h時(shí)間點(diǎn)達(dá)到頂峰;2 d時(shí)間點(diǎn),NF-κB P65蛋白表達(dá)顯著減少,尤其以胞核中減少為主,但表達(dá)量仍高于VAO組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)(P0.05);此后的變化趨勢(shì)與NF-κB P50的一致。CIP+II組NF-κB P65蛋白表達(dá)在15 min時(shí)間點(diǎn)之前未見(jiàn)顯著變化;從30 min時(shí)間點(diǎn)起積分光密度顯著增加,1 h、3 h、6 h時(shí)間點(diǎn)進(jìn)一步增高,胞核和胞漿內(nèi)均有大量蛋白表達(dá),并于6 h時(shí)間點(diǎn)達(dá)到頂峰。此后的變化趨勢(shì)與NF-κB P50的一致。對(duì)比各組6 h時(shí)間點(diǎn)NF-κB P65蛋白的表達(dá)數(shù)量,與VAO組對(duì)比,CIP 6 h、II 6 h時(shí)間點(diǎn)蛋白含量有顯著上升(P0.05)。與II 6 h時(shí)間點(diǎn)相比,CIP+II 6 h時(shí)間點(diǎn)蛋白含量有顯著下降(P0.05)。對(duì)比各組7 d時(shí)間點(diǎn)NF-κB P65蛋白的表達(dá)數(shù)量,與VAO組對(duì)比,CIP 7 d時(shí)間點(diǎn)蛋白含量無(wú)明顯差異(P0.05),II 7 d時(shí)間點(diǎn)顯著下降(P0.05)。與II 6 h時(shí)間點(diǎn)相比,CIP+II 6 h時(shí)間點(diǎn)蛋白含量有顯著上升(P0.05)。4在腦缺血預(yù)處理誘導(dǎo)腦缺血耐受過(guò)程中,大鼠海馬CA1區(qū)PPARγ蛋白表達(dá)的對(duì)比以及變化趨勢(shì)Control組、sham組以及VAO組可見(jiàn)PPARγ蛋白在胞核和胞漿內(nèi)均有一定程度的表達(dá)。CIP組PPARγ蛋白表達(dá)在15 min時(shí)間點(diǎn)之前未見(jiàn)顯著變化(P0.05);從30 min時(shí)間點(diǎn)起積分光密度顯著增加,1 h、3 h時(shí)間點(diǎn)進(jìn)一步增高,胞核和胞漿內(nèi)均有大量蛋白表達(dá),并于3 h時(shí)間點(diǎn)達(dá)到頂峰(P0.05)。在6h、2 d、7 d時(shí)間點(diǎn)時(shí),胞核內(nèi)PPARγ蛋白表達(dá)量顯著下降,幾乎達(dá)到了VAO組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的水平。II組PPARγ蛋白表達(dá)在15 min時(shí)間點(diǎn)之前未見(jiàn)顯著變化(P0.05);從30min時(shí)間點(diǎn)起積分光密度顯著增加,1 h、3 h、6 h時(shí)間點(diǎn)進(jìn)一步增高,胞核和胞漿內(nèi)均有大量蛋白表達(dá),并于6 h時(shí)間點(diǎn)達(dá)到頂峰(P0.05)。2d、7 d時(shí)間點(diǎn)由于神經(jīng)元大量死亡,所以PPARγ蛋白含量顯著下降,與VAO組相對(duì)比有顯著下降(P0.05)。CIP+II組PPARγ蛋白表達(dá)在1 h時(shí)間點(diǎn)之前未見(jiàn)顯著變化(P0.05);從3 h時(shí)間點(diǎn)起PPARγ蛋白表達(dá)顯著增加,6 h時(shí)間點(diǎn)進(jìn)一步增高,胞核和胞漿內(nèi)均有大量蛋白表達(dá),并達(dá)到峰值(P0.05)。此后的變化趨勢(shì)與P50的一致。對(duì)比各組6 h時(shí)間點(diǎn)PPARγ蛋白的表達(dá)數(shù)量,與VAO組對(duì)比,CIP組此時(shí)間點(diǎn)PPARγ蛋白含量無(wú)顯著差異(P0.05),II組此時(shí)間點(diǎn)PPARγ蛋白含量有顯著增高(P0.05);與CIP組相比,II組PPARγ蛋白含量顯著增高(P0.05);與II組相比,CIP+II組蛋白含量顯著下降(P0.05)。對(duì)比各組7 d時(shí)間點(diǎn)PPARγ蛋白的表達(dá)數(shù)量,與VAO組相對(duì)比,CIP組PPARγ蛋白含量無(wú)顯著差異(P0.05),II組顯著下降(P0.05);與II組相比,CIP+II組PPARγ蛋白含量顯著上升(P0.05)。結(jié)論:1腦缺血預(yù)處理適度上調(diào)NF-κB P50、NF-κB P65以及PPARγ蛋白的表達(dá),而且以胞核內(nèi)表達(dá)增高為主。2嚴(yán)重的缺血打擊,過(guò)度上調(diào)NF-κB P50、NF-κB P65以及PPARγ蛋白的表達(dá),也以胞核內(nèi)表達(dá)增高為主。3缺血預(yù)處理可以有效阻止其后的嚴(yán)重的缺血打擊所導(dǎo)致的NF-κBP50、NF-κB P65以及PPARγ蛋白的過(guò)度上調(diào)。
【關(guān)鍵詞】：腦缺血耐受 腦缺血預(yù)處理 NF-κB P50 NF-κB P65 PPARγ 硫堇四血管閉塞法 免疫組織化學(xué)
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R743.3
【目錄】：

• 中文摘要4-10
• 英文摘要10-18
• 英文縮寫18-19
• 前言19-20
• 材料與方法20-27
• 結(jié)果27-33
• 附圖33-48
• 討論48-51
• 結(jié)論51-52
• 參考文獻(xiàn)52-55
• 綜述 腦缺血耐受的誘導(dǎo)及其進(jìn)展研究55-64
• 參考文獻(xiàn)59-64
• 致謝64-65
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷65

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本文編號(hào)：367197