發(fā)布時間：2017-05-15 03:01

  本文關鍵詞：膠質瘤uPA基因啟動子甲基化及其表達的臨床意義，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的通過甲基化特異性多聚酶鏈反應法(Methylation special-PCR,MSP)和免疫組織化學染色半定量法((Immunohistochemistry, IHC))測定膠質瘤中尿激酶型纖維酶原激活劑(Urokinase type plasminogen activator, uPA)基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)和蛋白表達情況。運用統(tǒng)計學方法分析uPA啟動子甲基化狀態(tài)及其蛋白表達分別與性別、年齡情況和腫瘤病理學分級的關系,并分析uPA啟動子甲基化與uPA蛋白表達二者之間的相關性。探討uPA基因啟動子甲基化在膠質瘤發(fā)生發(fā)展中所產生的的作用以及uPA蛋白表達與膠質瘤病理級別的的關系。探究DNA甲基化在惡性腫瘤細胞中的表觀遺傳學作用機制并為個體化治療提供指導。方法取自2013年1月-2014年8月間蘭州大學第二醫(yī)院神經外科經手術切除后的膠質瘤組織標本54例。采用WHO(2007年)分類和分級標準,運用甲基化特異性多聚酶鏈反應法檢測uPA基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài),計算不同級別膠質瘤中發(fā)生甲基化、部分甲基化和未甲基化的比率。運用鏈霉素抗生物-過氧化物酶(SP法)進行免疫組織化學染色,細胞漿中出現為棕紅色顆粒為uPA蛋白陽性表達。在光學顯微鏡下觀察陽性細胞染色深淺并對視野內的陽性細胞數計數,計算得出陽性細胞數占細胞總數的百分比,結果計分標準采用免疫反應積分法。通過SPSS13.0軟件分析uPA基因啟動子甲基化、uPA蛋白表達分別與臨床資料和病理資料的相關性。結果54例膠質瘤組織標本中uPA基因啟動子在Ⅱ級、Ⅲ級和Ⅳ級膠質瘤中的甲基化率分別是72.2、38.9和16.7%,病理級別組間的差別具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。其甲基化情況在患者性別、年齡和病理類型(組織分型)各組組間均無統(tǒng)計學差異(P0.05)；uPA蛋白在Ⅱ級、Ⅲ級和Ⅳ級膠質瘤中的陽性表達率分別是72.2、77.8和94.4%,病理級別組間的差別具有統(tǒng)計學意義(P0.05),其表達情況在患者性別、年齡和病理類型(組織分型)各組組間均無統(tǒng)計學差異(P0.05)。該試驗表明了uPA基因啟動子區(qū)的甲基化率是隨膠質瘤的病理分級的增高而降低。uPA蛋白的表達水平是隨膠質瘤的病理分級的增高而增高。在Ⅳ級膠質瘤中uPA基因啟動子區(qū)的甲基化和uPA蛋白表達呈負相關(rs=0.233,P=0.029)。結論1.uPA基因啟動子區(qū)甲基化情況與膠質瘤病理分級呈負相關,特別見于Ⅳ級的膠質母細胞瘤中。該啟動子甲基化和膠質瘤的生長和侵襲有關。2.低程度的甲基化可能激活uPA蛋白或促進uPA蛋白的表達。3.uPA蛋白表達水平與膠質瘤病理分級呈正相關,與膠質瘤的惡性增值有關。4.膠質瘤中uPA基因啟動子甲基化導致uPA蛋白低表達。在Ⅳ級膠質瘤中uPA基因啟動子甲基化狀態(tài)與uPA蛋白表達二者之間呈負相關。
【關鍵詞】：膠質瘤 尿激酶型纖維酶原激活劑 DNA甲基化
【學位授予單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R739.4
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 前言9-12
• 材料與實驗方法12-21
• 2.1 主要儀器與試劑12-13
• 2.1.1 主要儀器12
• 2.1.2 主要試劑12
• 2.1.3 其他常用試劑及設備12-13
• 2.1.4 常用試劑配制13
• 2.1.5 PCR甲基化引物及免疫組化抗體13
• 2.2 實驗研究對象及資料13-14
• 2.2.1 研究對象13
• 2.2.2 臨床資料13-14
• 2.3 實驗方法及步驟14-20
• 2.3.1 技術路線圖14
• 2.3.2 甲基化實驗步驟14-19
• 2.3.3 甲基化結果判定19
• 2.3.4 免疫組化實驗步驟19-20
• 2.3.5 免疫組化結果判定20
• 2.4 統(tǒng)計學處理20-21
• 結果21-28
• 3.1 膠質瘤組織DNA中uPA基因啟動子的甲基化21-24
• 3.1.1 uPA基因啟動子甲基化與膠質瘤患者性別、年齡的關系21-22
• 3.1.2 uPA基因啟動子甲基化與膠質瘤病理學特征的關系22-24
• 3.2 膠質瘤組織DNA中uPA蛋白的表達24-27
• 3.2.1 uPA蛋白的表達與膠質瘤患者性別、年齡的關系24-25
• 3.2.2 uPA蛋白表達與膠質瘤病理學特征的關系25-27
• 3.3 膠質瘤中uPA基因啟動子甲基化和uPA蛋白表達的相關性27-28
• 討論28-33
• 4.1 uPA的甲基化位點28
• 4.2 uPA基因啟動子甲基化與膠質瘤28-29
• 4.3 uPA基因啟動子部分甲基化、未甲基化和膠質瘤29-30
• 4.4 uPA蛋白表達與膠質瘤30-31
• 4.5 uPA基因啟動子甲基化對uPA蛋白表達的影響31-33
• 研究展望33-34
• 結論34-35
• 參考文獻35-38
• 綜述38-46
• 參考文獻43-46
• 附錄46-49
• 在科研期間的成果49-50
• 致謝50

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前1條

1 張壯;李寧毅;陳萬濤;尚偉;;口腔鱗癌中MMP-1、MMP-2、uPA的表達與腫瘤侵襲和轉移的關系[J];實用口腔醫(yī)學雜志;2006年04期

  本文關鍵詞：膠質瘤uPA基因啟動子甲基化及其表達的臨床意義，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：366712