發(fā)布時間：2017-05-14 16:11

  本文關(guān)鍵詞：注射用丹參多酚酸對急性局灶性腦梗死小鼠血腦屏障的保護作用及機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:腦卒中是導(dǎo)致人類致殘和致死的主要病因之一,其中以急性腦梗死最為常見。腦水腫是導(dǎo)致急性腦梗死后機體死亡的首因。大量血管內(nèi)物質(zhì)透過破壞的血腦屏障涌入腦實質(zhì),腦容量的急速膨脹導(dǎo)致了機體的死亡。氧化應(yīng)激損傷血腦屏障,形成血管源性水腫的病理機制已被充分證明。急性腦梗死發(fā)生后,腦組織內(nèi)積累大量的活性氧自由基,不僅直接攻擊血腦屏障膜結(jié)構(gòu),還觸發(fā)由細胞膜上的離子通道失活的相關(guān)級聯(lián)反應(yīng),導(dǎo)致血管的通透性增加,加重腦水腫。減輕腦水腫的治療策略有利于降低急性腦梗死的死亡率和致殘率。因此,開發(fā)保護血腦屏障的藥物有望成為急性腦梗死的有效策略。我們前期研究發(fā)現(xiàn),抗氧化藥物白藜蘆醇、雙環(huán)醇和丹皮酚等可以改善腦梗死后血腦屏障的通透性。注射用丹參多酚酸(salvianolic acids,SAs)是從傳統(tǒng)中藥丹參中提取的多種丹酚酸的水溶性混合物,具有對抗心肌缺血損傷的作用,廣泛應(yīng)用于治療心肌缺血性疾病。其主要由丹酚酸B(salvianolic acid B,SAB)、丹酚酸D、丹酚酸E、迷迭香酸、紫草酸組成,各單體表現(xiàn)出以較強抗氧化作用為特點的多方面藥理作用。其中SAB已在動物實驗中證實有明確的腦保護作用。本實驗復(fù)制小鼠永久性大腦中動脈栓塞模型(permanent middle cerebr alanery occlusion,p MCAO),應(yīng)用SAs及陽性對照SAB進行干預(yù),評價腦梗死后血腦屏障滲透性、神經(jīng)功能、腦梗死體積、腦水腫,旨在證實其腦保護作用并探討其可能機制。方法:采用成年健康雄性CD-1小鼠,應(yīng)用改良的Longa線栓法制作小鼠p MCAO模型。實驗一探究SAs的血腦屏障保護作用。72只小鼠隨機分為四組(每組18只):Sham組,p MACO組,SAs組(p MACO+SAs 15mg/kg),SAB組(p MACO+SAB 10mg/kg)。藥物干預(yù)組在大腦中動脈栓塞后即刻給予藥物腹腔注射,相應(yīng)的p MCAO組與Sham組給予等體積的生理鹽水。其中每組6只于藥物干預(yù)后即刻給予尾靜脈注射2%伊文斯蘭溶液(4ml/kg),24小時后心臟灌注生理鹽水,留取腦組織進行伊文斯蘭滲透量測定。每組其余12只于術(shù)后24小時進行腦保護作用檢測:包括神經(jīng)功能評分,腦水含量測定以及TTC染色法測定梗死體積。實驗二進行SAs血腦屏障保護機制的探索。每組6只同時進行SOD活性和MDA含量檢測,評定SAs抗氧化能力。每組3只蛋白免疫印跡法測定claudin-5,occludin,MMP-9和AQP-4蛋白表達量。結(jié)果:1注射用丹參多酚酸能改善神經(jīng)功能缺損。術(shù)后24小時對Sham組、p MCAO組、SAs組、SAB組小鼠進行神經(jīng)功能評分,用Mann Whitney U檢驗做統(tǒng)計分析。除Sham組外梗死各組小鼠均出現(xiàn)評分各異的左側(cè)肢體偏癱,神經(jīng)功能評分明顯升高。藥物干預(yù)的SAs和SAB兩組神經(jīng)功能評分明顯低于p MCAO組,且具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。SAs和SAB兩組比較神經(jīng)功能缺損無明顯差別。提示SAs能改善急性局灶性腦梗死小鼠的神經(jīng)功能缺失,其效果與SAB相當(dāng)。2注射用丹參多酚酸能減輕腦水腫。Sham組梗死側(cè)腦組織水含量為79.67%±1.89%。p MCAO組小鼠梗死側(cè)腦組織含水量明顯升高至84.42%±2.87%(P0.05)。給予藥物干預(yù)后,SAs組和SAB組梗死側(cè)腦組織含水量降至82.49%±2.89%,81.81%±1.68%,與p MCAO組相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。SAs和SAB兩組比較梗死側(cè)腦組織水含量差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。提示SAs能減少急性局灶性腦梗死小鼠腦水含量,其效果與SAB相當(dāng)。3注射用丹參多酚酸能降低腦梗死體積。在p MCAO組出現(xiàn)蒼白色梗死區(qū)域。與p MCAO組相比,SAs組和SAB組病變側(cè)梗死體積明顯減小,且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p MCAO vs.SAs,SAB:54.67%±3.14%vs.42.88%±2.75%,37.88%±1.29%,P0.05),而SAs組和SAB組患側(cè)梗死體積差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。提示SAs能降低急性局灶性腦梗死小鼠腦梗死體積,其效果與SAB相當(dāng)。4注射用丹參多酚酸能改善血腦屏障的通透性。在p MCAO術(shù)后24 h,通過測量腦中伊文斯蘭的漏出量,來評價血腦屏障的通透性。藍色區(qū)域表示伊文斯蘭漏出,指示血腦屏障通透性增加。p MCAO組病變側(cè)腦組織血腦屏障通透性明顯增加(P0.05 vs.Sham組)。SAs組和SAB組病變側(cè)腦組織伊文斯蘭透過量均明顯低于p MCAO(P0.05)。SAs組和SAB組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義。提示SAs能降低急性局灶性腦梗死小鼠血腦屏障通透性,其效果與SAB相當(dāng)。5注射用丹參多酚酸能增加機體抗氧化能力。本實驗中與Sham組相比,p MCAO組24 h后小鼠梗死側(cè)腦組織勻漿中總SOD和CU-Zn SOD的活性均明顯下降,而SAs組與SAB組可明顯提高兩種SOD活性,減低MDA的含量,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。而SAs組與SAB組之間并無明顯差異,說明SAs可以清除急性局灶性腦梗死后自由基的腦損傷,提高機體抗氧化損傷的能力,從而發(fā)揮腦保護作用,其保護作用與SAB相當(dāng)。6注射用丹參多酚酸對claudin-5,occludin,MMP-9,AQP-4蛋白表達量的影響。Western blot檢測結(jié)果顯示:腦梗死后24小時claudin-5和occludin蛋白表達降低,而MMP-9和AQP-4蛋白表達升高。藥物干預(yù)后claudin-5和occludin蛋白表達升高,MMP-9和AQP-4蛋白表達降低,SAs組與p MCAO組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。而SAs組與SAB組,差異無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論:我們研究發(fā)現(xiàn),注射用丹參多酚酸具有腦保護作用,能降低腦梗死小鼠神經(jīng)功能缺損,減輕腦水腫,減小腦梗死體積。進一步研究發(fā)現(xiàn),注射用丹參多酚酸能夠減輕梗死后血腦屏障的通透性,下調(diào)腦組織MMP-9和AQP-4的表達量,上調(diào)claudin-5和occludin表達量,同時提高SOD活性并降低MDA含量。保護作用與陽性對照物SAB相當(dāng)。我們推斷,注射用丹參多酚酸可以通過提高機體抗氧化能力,保護了血腦屏障,減輕腦水腫,進而保護梗死后腦組織。注射用丹參多酚酸有望成為治療急性腦梗死的有效藥物。
【關(guān)鍵詞】：注射用丹參多酚酸 腦梗死 血腦屏障 SOD MDA MMP-9 AQP-4
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R743.3
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文縮寫11-12
• 前言12-13
• 材料與方法13-25
• 結(jié)果25-27
• 附圖27-30
• 討論30-33
• 結(jié)論33
• 參考文獻33-38
• 綜述38-50
• 參考文獻45-50
• 致謝50-51
• 個人簡歷51

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王訓(xùn)翠;朱國旗;李慶林;;丹酚酸B對缺糖誘導(dǎo)的PC12細胞凋亡的保護作用[J];安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2011年04期

2 李艷;張端蓮;王蘭;蔡麗華;吳慧芬;王燕舞;桂志祥;梨莉;談新提;;Sal B對肝癌細胞株HepG2的促凋亡作用[J];中國組織化學(xué)與細胞化學(xué)雜志;2012年01期

3 ;Effects of Salvia miltiorrhiza on intestinal microflora in rats with ischemia/reperfusion liver injury[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2005年02期

4 XU Yan-hong;YANG Xin;WEI Jian-he;ZHANG Xing-li;ZHANG Zheng;GAO Zhi-hui;SUI Chun;;Cloning and Expression Analysis on 3-Hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A Reductase from Aquilaria sinensis[J];Chinese Herbal Medicines;2013年03期

5 湛月娥;徐江平;;丹酚酸B藥理作用的研究進展[J];華南國防醫(yī)學(xué)雜志;2007年02期

6 ;Effects of salvianolic acid B on proliferation, neurite outgrowth and differentiation of neural stem cells derived from the cerebral cortex of embryonic mice[J];Science China(Life Sciences);2010年06期

7 劉世靜;蔣玉鳳;王璽玫;劉智勤;蔡大勇;王文榮;黃啟福;;丹酚酸B對腦缺血再灌注小鼠內(nèi)皮細胞分泌的影響[J];北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報;2008年07期

8 張曉麗;葉志斌;;丹參在防治老年糖尿病腎病中的價值[J];老年醫(yī)學(xué)與保健;2008年05期

9 石少明;李澤慧;田書林;唐民科;;丹酚酸B對腦缺血再灌注損傷大鼠紋狀體氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)的影響[J];北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報;2012年08期

10 盛沖霄;黎紅華;;丹參多酚對動脈粥樣硬化大鼠血清CyPA、8-iso-PGF2α水平的影響[J];湖北中醫(yī)雜志;2015年04期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 劉紅云;丹參生長模擬模型及活性成分積累的調(diào)控研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2011年

2 郭永學(xué);丹酚酸B的降解機理及純化工藝研究[D];大連理工大學(xué);2007年

3 韓蓓蓓;丹參多酚酸鹽對缺血再灌注心肌血流及冠脈近端血流保護作用的實驗研究[D];上海交通大學(xué);2008年

4 姜恩平;蒺藜皂苷對腦缺血再灌注損傷的保護作用及其機制的研究[D];吉林大學(xué);2010年

5 孫連慶;波動性高糖對氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的雪旺細胞凋亡通路的影響及干預(yù)研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學(xué)院;2012年

6 姚剛;丹酚酸B對腎小管上皮細胞轉(zhuǎn)分化防治作用的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2012年

7 周麗娜;兩類天然活性產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化與降解研究[D];沈陽藥科大學(xué);2012年

8 荀，

本文編號：365627