發(fā)布時間：2017-05-14 02:08

  本文關鍵詞：UT-B基因敲除小鼠腦中精氨酸酶Ⅰ的表達變化及炎癥反應的發(fā)生，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：研究尿素通道蛋白B (Urea transporter B,UT-B)基因敲除小鼠腦中精氨酸酶I (Arginase I,Arg I)的表達變化和炎癥反應的發(fā)生及可能的機制。方法：1.體內(nèi)實驗采用免疫組織化學法觀察野生型小鼠腦中精氨酸酶Ⅰ的分布情況；免疫熒光法觀察野生型小鼠和UT-B基因敲除小鼠腦組織中精氨酸酶Ⅰ與神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細胞共表達特點；蛋白免疫印跡(Western blot)法檢測UT-B基因敲除小鼠和野生型小鼠腦中Arg I、誘導型一氧化氮合成酶(Inducible nitric oxide synthase,iNOS)和腫瘤壞死因子a (Tumor necrosis factor a, TNF-a)蛋白的表達變化。2.體外實驗模擬UT-B基因敲除小鼠腦中尿素堆積,利用高濃度(25 mmol/L)尿素刺激人腦微血管內(nèi)皮細胞(human brain microvascular endothelial cells, HBMECs),免疫熒光法觀察細胞內(nèi)TNF-α和iNOS的表達；Western blot檢測高濃度尿素刺激細胞3、6、12和24h后,炎癥因子iNOS、TNF-α環(huán)氧合酶-2 (Cycloxygenase-2, COX-2)和相關信號通路核轉(zhuǎn)錄因子蛋白(nuclear factor kappa B, NF-κB/p65)、p-p65、腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)、p-AMPK的蛋白表達水平變化；酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)和化學法進一步檢測高濃度尿素在不同時間刺激人腦微血管內(nèi)皮細胞后TNF-a和NO的含量。結(jié)果：1.精氨酸酶Ⅰ在小鼠腦組織中分布廣泛,包括大腦皮質(zhì)(分子層除外)、海馬(主要表達在CA1、CA3亞區(qū)及齒狀回)、丘腦(核團)、腦干神經(jīng)核團、小腦(核團及皮質(zhì)的顆粒細胞層和梨狀細胞層)、第三腦室和脈絡叢等。ArgI陽性表達產(chǎn)物主要在神經(jīng)元的胞體和樹突,少量表達在神經(jīng)膠質(zhì)細胞。2.與野生型小鼠相比,UT-B基因敲除小鼠腦組織中標記神經(jīng)元的NeuN陽性熒光強度明顯減弱。3.與野生型小鼠相比,UT-B基因敲除小鼠海馬中ArgI蛋白表達水平下降(P0.05),而iNOS和TNF-α蛋白表達水平明顯升高(P0.01)。4.高濃度(25 mmol/L)尿素刺激人腦微血管內(nèi)皮細胞不同時間后,細胞中TNF-α、COX-2、p-p65和p-AMPK蛋白表達水平在3和6h明顯高于對照組(P0.05); iNOS蛋白表達水平在24 h內(nèi)則持續(xù)增高(P0.05)；NO含量在3h明顯增多(P0.05)。結(jié)論：1.野生型小鼠腦組織中精氨酸酶Ⅰ分布廣泛,且主要表達在神經(jīng)元上,少量表達在神經(jīng)膠質(zhì)細胞。2.UT-B基因敲除小鼠與野生型小鼠比較,腦組織中神經(jīng)元數(shù)目明顯減少,且精氨酸酶Ⅰ含量隨神經(jīng)元數(shù)目減少而減少。除此之外,UT-B基因敲除小鼠腦組織中相關炎癥因子iNOS和TNF-α蛋白表達水平增高,提示UT-B基因敲除小鼠腦中可能有炎癥反應的發(fā)生。3.高濃度(25mmol/L)的尿素能誘導人腦微血管內(nèi)皮細胞產(chǎn)生炎癥因子,NF-κB/p65和AMPK信號通路可能參與到了該炎癥反應過程,而且后者可能影響細胞的能量代謝。除此之外,細胞中NO含量的改變可能影響人腦微血管內(nèi)皮細胞的正常功能。
【關鍵詞】：尿素通道蛋白B 精氨酸酶Ⅰ 尿素 人腦微血管內(nèi)皮細胞 炎癥因子
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R741
【目錄】：

• 英文縮略語名詞對照5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-14
• 第一部分 UT-B基因敲除小鼠腦中精氨酸酶Ⅰ的表達變化14-23
• 1、材料與方法14-19
• 2、結(jié)果19-20
• 3、討論20-23
• 第二部分 高濃度尿素誘導人腦微血管內(nèi)皮細胞產(chǎn)生炎癥因子23-32
• 1、材料與方法23-27
• 2、結(jié)果27-29
• 3、討論29-32
• 全文總結(jié)32-33
• 參考文獻33-37
• 附插圖37-42
• 文獻綜述42-52
• 參考文獻47-52
• 致謝52-53
• 攻讀碩士期間發(fā)表的論文53

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本文編號：364101