發(fā)布時(shí)間：2017-05-14 02:05

  本文關(guān)鍵詞：氧化應(yīng)激與抗氧化應(yīng)激在BDE-153致大鼠神經(jīng)細(xì)胞損傷中的作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:研究氧化應(yīng)激與抗氧化應(yīng)激在BDE-153致大鼠神經(jīng)細(xì)胞損傷中的作用,為探討B(tài)DE-153神經(jīng)毒性機(jī)制提供科學(xué)依據(jù)。方法:第一部分:(1)體內(nèi)實(shí)驗(yàn):按窩別和體重將出生第10天的雄性SD大鼠仔鼠隨機(jī)分為溶劑對照組(橄欖油),1、5和10 mg/kg BDE-153染毒組,每組10只,按照10 ml/kg的染毒劑量經(jīng)腹腔注射染毒一次。染毒2月后,在光鏡和電鏡下觀察神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)學(xué)和超微結(jié)構(gòu)的改變;用TUNEL染色法和流式細(xì)胞術(shù)檢測大鼠神經(jīng)細(xì)胞凋亡率;用LDH試劑盒檢測乳酸脫氫酶活力。(2)體外實(shí)驗(yàn):原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元經(jīng)細(xì)胞純度鑒定符合實(shí)驗(yàn)所需要的要求后,隨機(jī)分為空白對照組,DMSO溶劑對照組,10、20和40μmol/L BDE-153染毒組,染毒48 h。用倒置顯微鏡觀察原代神經(jīng)元的形態(tài)學(xué)改變;用CCK-8法檢測神經(jīng)細(xì)胞活力的變化和比色法檢測LDH漏出率的改變;用Hoechst 33258染色法,AO/EB雙染法以及流式細(xì)胞術(shù)檢測神經(jīng)細(xì)胞凋亡率。第二部分:體內(nèi)動物處理和體外細(xì)胞培養(yǎng)同第一部分,染毒后分別用流式細(xì)胞術(shù)檢測神經(jīng)細(xì)胞ROS的含量;用試劑盒檢測神經(jīng)細(xì)胞MDA、NO以及NOS含量;用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法、免疫熒光法、Western Blot以及ELISA法檢測神經(jīng)細(xì)胞n NOS1的含量。第三部分:體內(nèi)動物處理和體外細(xì)胞培養(yǎng)同第一部分,染毒后分別用試劑盒檢測神經(jīng)細(xì)胞SOD活力和GSH含量;用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法、免疫熒光法、Western Blot以及ELISA法檢測神經(jīng)細(xì)胞Prx1和Prx2基因和蛋白表達(dá)的改變。結(jié)果:第一部分:(1)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)光鏡觀察顯示,對照組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞排列均勻、整齊;隨著BDE-153染毒濃度的增加,細(xì)胞排列紊亂,細(xì)胞數(shù)目減少,核膜斷裂或消失。電鏡觀察顯示,對照組海馬神經(jīng)元形態(tài)正常,而染毒組神經(jīng)細(xì)胞逐漸發(fā)生細(xì)胞核縮小、染色質(zhì)濃縮等現(xiàn)象。隨著染毒劑量的增加,神經(jīng)細(xì)胞LDH漏出率和大鼠海馬區(qū)陽性細(xì)胞數(shù)均逐漸增多,10 mg/kg BDE-153染毒組TUNEL陽性細(xì)胞率和IHS評分顯著升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。神經(jīng)細(xì)胞凋亡率也隨著染毒劑量的增加而增加。(2)體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,BDE-153染毒后,神經(jīng)細(xì)胞的活力逐漸下降,LDH漏出率逐漸增多。神經(jīng)元形態(tài)學(xué)也發(fā)生神經(jīng)細(xì)胞數(shù)目減少、軸突和樹突的數(shù)量減少、長度縮短等變化。Hoechst 33258染、AO/EB雙染色以及流式細(xì)胞儀檢測表明隨著BDE-153染毒濃度的加大,神經(jīng)細(xì)胞凋亡凋亡率呈上升趨勢,中劑量組和高劑量組細(xì)胞凋亡率明顯高于空白對照組,差異具有顯著性(P0.05)。第二部分:(1)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,隨著BDE-153染毒劑量的增加,大鼠大腦皮質(zhì)中MDA和ROS的含量逐漸增加;與溶劑對照組比較,低、中和高劑量組的MDA含量顯著增加,呈明顯的劑量-反應(yīng)關(guān)系,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);10 mg/kg BDE-153染毒組的ROS含量顯著高于1 mg/kg BDE-153染毒組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。隨著染毒劑量的增加,與對照組比較,低、中和高劑量組t NOS的水平明顯高于對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);10 mg/kg BDE-153染毒組NO的水平顯著高于對照組和1 mg/kg BDE-153染毒組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);大鼠海馬組織中n NOS1的基因和蛋白表達(dá)水平逐漸增加,中、高劑量組n NOS1的基因和蛋白表達(dá)量顯著升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);海馬組織中n NOS1陽性細(xì)胞數(shù)的百分率和IHS評分均逐漸增加。(2)體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與對照組相比,低、中和高劑量染毒組MDA含量顯著增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。隨著染毒劑量的增加,神經(jīng)細(xì)胞中NO、n NOS的活力逐漸增加。與對照組相比,中劑量組和高劑量組NO的水平顯著升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);DMSO溶劑對照組、低、中和高劑量組中n NOS1的活力均顯著升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);細(xì)胞內(nèi)ROS的含量逐漸增加,與空白對照組相比,DMSO組、低、中和高劑量組細(xì)胞內(nèi)ROS含量顯著升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。第三部分:(1)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,隨著BDE-153染毒劑量的增加,大鼠大腦皮質(zhì)中SOD和GSH的含量逐漸下降;與對照組相比,低、中和高劑量組大鼠腦皮質(zhì)含量逐漸降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。隨著染毒劑量的增加,抗氧化物酶Prx1和Prx2基因和蛋白表達(dá)水平逐漸降低。與對照組相比,低、中和高劑量組海馬Prx1基因和蛋白表達(dá)量均顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01或P0.05);5和10 mg/kg BDE-153染毒組Prx2 m RNA表達(dá)量顯著低于對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);(2)體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與對照組相比,各染毒組的SOD的活力和GSH的含量均顯著降低,并與BDE-153染毒劑量呈明顯的劑量-反應(yīng)關(guān)系。神經(jīng)細(xì)胞中抗氧化物酶Prx1和Prx2基因和蛋白的表達(dá)量隨著BDE-153染毒劑量的增加逐漸降低;低、中和高劑量組細(xì)胞中Prx1和Prx2基因和蛋白表達(dá)均顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:(1)BDE-153能引起神經(jīng)細(xì)胞的損傷,表現(xiàn)為神經(jīng)細(xì)胞的活力降低,乳酸脫氫酶漏出率增多和細(xì)胞凋亡率增加。(2)氧化應(yīng)激水平的增加和抗氧化應(yīng)激水平的降低,可能是BDE-153損傷神經(jīng)細(xì)胞的主要機(jī)制。
【關(guān)鍵詞】：多溴聯(lián)苯醚 神經(jīng)毒性 細(xì)胞凋亡 氧化應(yīng)激 抗氧化應(yīng)激
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R741
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 常用縮寫詞中英文對照表13-15
• 前言15-17
• 第一部分BDE-153 致大鼠神經(jīng)細(xì)胞損傷的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究17-38
• 1 材料與方法17-22
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動物17
• 1.2 主要試劑與儀器17-18
• 1.3 實(shí)驗(yàn)動物分組及染毒18-19
• 1.4 實(shí)驗(yàn)方法19-21
• 1.5 數(shù)據(jù)分析21-22
• 2 結(jié)果22-34
• 2.1 BDE-153 致大鼠神經(jīng)細(xì)胞損傷的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究22-26
• 2.2 BDE-153 致體外原代培養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞損傷的實(shí)驗(yàn)研究26-34
• 3 討論34-37
• 3.1 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)34-35
• 3.2 體外實(shí)驗(yàn)35-37
• 4 結(jié)論37-38
• 第二部分 氧化應(yīng)激在BDE-153 所致大鼠神經(jīng)細(xì)胞損傷中的作用38-51
• 1 材料與方法38-43
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動物分組及染毒38
• 1.2 試劑與儀器38-39
• 1.3 實(shí)驗(yàn)方法39-42
• 1.4 數(shù)據(jù)分析42-43
• 2 結(jié)果43-48
• 2.1 氧化應(yīng)激在BDE-153 所致大鼠神經(jīng)細(xì)胞損傷的體內(nèi)研究43-46
• 2.2 氧化應(yīng)激在BDE-153 所致體外原代培養(yǎng)神經(jīng)元損傷的實(shí)驗(yàn)研究46-48
• 3 討論48-50
• 3.1 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)48
• 3.2 體外實(shí)驗(yàn)48-50
• 4 結(jié)論50-51
• 第三部分 抗氧化應(yīng)激在BDE-153 所致大鼠神經(jīng)細(xì)胞損傷中的作用51-63
• 1 材料與方法51-54
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動物分組及染毒51
• 1.2 試劑與儀器51
• 1.3 實(shí)驗(yàn)方法51-53
• 1.4 數(shù)據(jù)分析53-54
• 2 結(jié)果54-61
• 2.1 抗氧化應(yīng)激在BDE-153 所致大鼠神經(jīng)細(xì)胞損傷的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究54-55
• 2.2 抗氧化應(yīng)激在BDE-153 所致體外原代培養(yǎng)神經(jīng)元損傷的實(shí)驗(yàn)研究55-61
• 3 討論61-62
• 3.1 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)61
• 3.2 體外實(shí)驗(yàn)61-62
• 4 結(jié)論62-63
• 參考文獻(xiàn)63-68
• 綜述68-74
• 綜述參考文獻(xiàn)72-74
• 附錄74-75
• 致謝75-76
• 在學(xué)期間承擔(dān)/參與的科研課題與研究成果76-77
• 個人簡歷77

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 吳英;余艷紅;陳敦金;蔣惠萍;;母源性BDE-209暴露對仔鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響及劑量效應(yīng)關(guān)系[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2008年06期

2 湯艷;李華;陳潤;彭長燕;陳卉;;十溴聯(lián)苯醚對大鼠學(xué)習(xí)記憶及海馬神經(jīng)元影響[J];中國公共衛(wèi)生;2011年06期

3 屈偉月;王德超;盛國英;陳敦金;畢新慧;傅家謨;;嬰兒臍帶血和母親血中多溴聯(lián)苯醚的研究[J];中國環(huán)境科學(xué);2007年02期

4 張浪;賴永長;汪海濤;王日康;孟茜;鄭文華;;蘆丁對神經(jīng)細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用[J];中藥材;2014年04期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 蔣惠萍;母源性BDE-209暴露對仔鼠海馬神經(jīng)發(fā)育相關(guān)蛋白、氧化應(yīng)激及細(xì)胞凋亡的影響[D];南方醫(yī)科大學(xué);2008年

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本文編號：364078