目的探討解偶聯(lián)蛋白2減緩高糖加重缺氧導(dǎo)致的神經(jīng)元損傷的作用,初步闡明其與線粒體分裂/融合的關(guān)系。方法本實(shí)驗(yàn)利用高糖聯(lián)合缺氧和高乳酸模擬在體糖尿病/高血糖合并腦缺血損傷狀態(tài)。為驗(yàn)證糖尿病/高血糖狀態(tài)缺氧對HT22細(xì)胞的損傷作用和對ROS產(chǎn)生的影響,將體外培養(yǎng)海馬神經(jīng)細(xì)胞（HT22）分為:（1）對照組;（2）高糖組:30、40、50和60m M葡萄糖干預(yù)HT22細(xì)胞;干預(yù)24h后,分別缺氧0h和缺氧4h后復(fù)氧0、6、12和18h。（3）正常血糖缺氧組:HT22細(xì)胞;正常培養(yǎng)后,分別缺氧0h和缺氧4h后復(fù)氧0、6、12和18h。（4）高糖缺氧組:30、40、50和60m M葡萄糖干預(yù)HT22細(xì)胞;干預(yù)24h后,分別缺氧0h和缺氧4h后復(fù)氧0、6、12和18h。（5）高乳酸組:2.5、5、7.5和10m M乳酸干預(yù)HT22細(xì)胞24h。倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變;DCFH-DA探針檢測ROS生成情況;為探討UCP2對高糖狀態(tài)缺氧神經(jīng)元損傷的減緩作用,及與ROS生成,線粒體分裂/融合關(guān)系,利用UCP2轉(zhuǎn)染的海馬神經(jīng)元細(xì)胞（UCP2）和相應(yīng)空載體轉(zhuǎn)染的海馬神經(jīng)元細(xì)胞（HT-NC）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。分為以下... 

【文章來源】：寧夏醫(yī)科大學(xué)寧夏回族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

高糖對HT22細(xì)胞損傷作用(×100)

圖 2：高糖對 HT22 細(xì)胞 Cleaved Caspase-3 表達(dá)的影響。 con:對照組；30mM、40m和 60mM 分別為不同糖濃度干預(yù)組。*:與對照組比較 P<0.05. HT22 細(xì)胞 ROS 生成的影響預(yù) HT22 細(xì)胞 24h 后采用 DCFH-DA 法檢測 ROS，結(jié)果顯示(見生 ROS(圖 3A); 50mM 高糖干預(yù) HT22 細(xì)胞，有少量 ROS 生成，3B); 60mM 高糖干預(yù) HT22 細(xì)胞，ROS 較 50mM 組明顯增加(圖 3 HT22 細(xì)胞的損傷作用及 ROS 生成的影響對 HT22 細(xì)胞形態(tài)及活性率的影響，對照組 HT22 細(xì)胞生長良好，呈長梭形，鋪路石樣排一，細(xì)胞大4A)；2.5mM 高乳酸組 HT22 細(xì)胞數(shù)量略有減少，少數(shù)細(xì)胞形狀不T22 細(xì)胞數(shù)量明顯減少，形狀不規(guī)則，細(xì)胞大小不一，胞漿減少

圖 4：高乳酸對 HT22 細(xì)胞損傷作用(×100)。 A:對照組；B:5mM 高乳酸組；C:10mM 高乳酸組；D:高乳酸對 活性率的影響(con:對照組；2.5mM、5mM、7.5mM 和 10mM 分別為不同乳酸濃度干預(yù)組)。*:與對照組比較 P< 高乳酸對 HT22 細(xì)胞 Cleaved Caspase-3 表達(dá)的影響高乳酸干預(yù) 24h 后提取組織蛋白，進(jìn)行 Western-blotting 分析。如圖 5，在不同度干預(yù) HT22 細(xì)胞，隨著乳酸濃度的增加，線粒體依賴的凋亡執(zhí)行因子 Clespase-3 的表達(dá)逐漸增加(P<0.05)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]2型糖尿病高血糖與炎癥兩者聯(lián)合對血管病變的影響[J]. 唐振媚,林芳,黃群英,蔣東培,邱建剛,曾燕,龐振瑤.  中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào). 2014(03)
[2]艾灸對腦缺血再灌注損傷模型大鼠大腦皮質(zhì)NF-κB p65蛋白表達(dá)的影響[J]. 肖愛嬌,羅小泉.  中華中醫(yī)藥雜志. 2013(12)
[3]小膠質(zhì)細(xì)胞對成年哺乳動(dòng)物神經(jīng)發(fā)生的調(diào)節(jié)作用[J]. 劉志強(qiáng),張均田,唐民科.  生理科學(xué)進(jìn)展. 2011(01)
[4]糖尿病小鼠海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞GFAP表達(dá)的變化[J]. 楊力,趙培園,戰(zhàn)雅,李玲,于建云,郭澤云.  昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2010(06)
[5]高血糖和腦缺血對樹鼩皮層不同區(qū)域VEGF表達(dá)的影響[J]. 陳靜,李樹清.  中國病理生理雜志. 2010(02)
[6]小膠質(zhì)細(xì)胞與腦缺血[J]. 宋玉成,劉永海.  國際腦血管病雜志. 2006(06)
[7]能量代謝基因表達(dá)改變在大鼠卒中發(fā)病學(xué)中的意義[J]. 王先梅,楊麗霞,嚴(yán)睿,祝善俊,齊峰,郭傳明,趙斌,惠汝太.  中國急救醫(yī)學(xué). 2004(08)
[8]星形膠質(zhì)細(xì)胞條件培養(yǎng)液對活性氧所致的神經(jīng)元損傷的防護(hù)作用[J]. 莫永炎,陳瑗,周玫.  細(xì)胞生物學(xué)雜志. 2000(01)

博士論文
[1]缺血再灌注中酸敏感離子通道引起神經(jīng)元損傷機(jī)制及葛根素保護(hù)作用的研究[D]. 顧玲.浙江大學(xué) 2010

碩士論文
[1]糖尿病高血糖通過氧化損傷加重局灶性腦缺血再關(guān)注損傷[D]. 王佳陪.寧夏醫(yī)科大學(xué) 2014



本文編號：3521498