目的探討解偶聯(lián)蛋白2減緩高糖加重缺氧導(dǎo)致的神經(jīng)元損傷的作用,初步闡明其與線(xiàn)粒體分裂/融合的關(guān)系。方法本實(shí)驗(yàn)利用高糖聯(lián)合缺氧和高乳酸模擬在體糖尿病/高血糖合并腦缺血損傷狀態(tài)。為驗(yàn)證糖尿病/高血糖狀態(tài)缺氧對(duì)HT22細(xì)胞的損傷作用和對(duì)ROS產(chǎn)生的影響,將體外培養(yǎng)海馬神經(jīng)細(xì)胞（HT22）分為:（1）對(duì)照組;（2）高糖組:30、40、50和60m M葡萄糖干預(yù)HT22細(xì)胞;干預(yù)24h后,分別缺氧0h和缺氧4h后復(fù)氧0、6、12和18h。（3）正常血糖缺氧組:HT22細(xì)胞;正常培養(yǎng)后,分別缺氧0h和缺氧4h后復(fù)氧0、6、12和18h。（4）高糖缺氧組:30、40、50和60m M葡萄糖干預(yù)HT22細(xì)胞;干預(yù)24h后,分別缺氧0h和缺氧4h后復(fù)氧0、6、12和18h。（5）高乳酸組:2.5、5、7.5和10m M乳酸干預(yù)HT22細(xì)胞24h。倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變;DCFH-DA探針檢測(cè)ROS生成情況;為探討UCP2對(duì)高糖狀態(tài)缺氧神經(jīng)元損傷的減緩作用,及與ROS生成,線(xiàn)粒體分裂/融合關(guān)系,利用UCP2轉(zhuǎn)染的海馬神經(jīng)元細(xì)胞（UCP2）和相應(yīng)空載體轉(zhuǎn)染的海馬神經(jīng)元細(xì)胞（HT-NC）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。分為以下... 

【文章來(lái)源】：寧夏醫(yī)科大學(xué)寧夏回族自治區(qū)

【文章頁(yè)數(shù)】：70 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

高糖對(duì)HT22細(xì)胞損傷作用(×100)

圖 2：高糖對(duì) HT22 細(xì)胞 Cleaved Caspase-3 表達(dá)的影響。 con:對(duì)照組；30mM、40m和 60mM 分別為不同糖濃度干預(yù)組。*:與對(duì)照組比較 P<0.05. HT22 細(xì)胞 ROS 生成的影響預(yù) HT22 細(xì)胞 24h 后采用 DCFH-DA 法檢測(cè) ROS，結(jié)果顯示(見(jiàn)生 ROS(圖 3A); 50mM 高糖干預(yù) HT22 細(xì)胞，有少量 ROS 生成，3B); 60mM 高糖干預(yù) HT22 細(xì)胞，ROS 較 50mM 組明顯增加(圖 3 HT22 細(xì)胞的損傷作用及 ROS 生成的影響對(duì) HT22 細(xì)胞形態(tài)及活性率的影響，對(duì)照組 HT22 細(xì)胞生長(zhǎng)良好，呈長(zhǎng)梭形，鋪路石樣排一，細(xì)胞大4A)；2.5mM 高乳酸組 HT22 細(xì)胞數(shù)量略有減少，少數(shù)細(xì)胞形狀不T22 細(xì)胞數(shù)量明顯減少，形狀不規(guī)則，細(xì)胞大小不一，胞漿減少

圖 4：高乳酸對(duì) HT22 細(xì)胞損傷作用(×100)。 A:對(duì)照組；B:5mM 高乳酸組；C:10mM 高乳酸組；D:高乳酸對(duì) 活性率的影響(con:對(duì)照組；2.5mM、5mM、7.5mM 和 10mM 分別為不同乳酸濃度干預(yù)組)。*:與對(duì)照組比較 P< 高乳酸對(duì) HT22 細(xì)胞 Cleaved Caspase-3 表達(dá)的影響高乳酸干預(yù) 24h 后提取組織蛋白，進(jìn)行 Western-blotting 分析。如圖 5，在不同度干預(yù) HT22 細(xì)胞，隨著乳酸濃度的增加，線(xiàn)粒體依賴(lài)的凋亡執(zhí)行因子 Clespase-3 的表達(dá)逐漸增加(P<0.05)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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