本研究旨在觀察腦缺血再灌注時claudin-5和occludin表達變化及明膠酶（MMP-2和-9）對其影響，并探討其可能的作用機制。首先，通過大鼠大腦中動脈閉塞（2h）再灌注模型，選取腦缺血再灌注后的4個再灌注時間點進行研究，即再灌注15min，再灌注3h，再灌注6h，再灌注22h。對大鼠缺血側(cè)紋狀體組織，通過伊文思藍染料滲出，量化血腦屏障的通透性；通過Western blot測定claudin-5，occludin蛋白的表達變化；通過透射電子顯微鏡觀察神經(jīng)血管單元/緊密連接的形態(tài)結(jié)構(gòu)；通過原位酶譜法，在大鼠腦冠狀切片圖上，勾畫與這4個再灌注時間點相關(guān)的MMPs活化的解剖學(xué)分布；并使用TTC染色法，在腦組織切片上同線粒體能量代謝障礙的區(qū)域相對比。其次，在上述研究的基礎(chǔ)上，進一步選取再灌注3h和再灌注24h這兩個再灌注時間點進行研究。通過伊文思藍染料，測定缺血側(cè)，非缺血側(cè)紋狀體組織血腦屏障通透性；通過明膠酶譜法，確定MMPs的活性來源；通過實時定量PCR，Western blot測定claudin-5，occludin在缺血側(cè)，非缺血側(cè)mRNA變化及其蛋白水平；由于緊密連接蛋白和星形膠... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：134 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
內(nèi)容提要
中文摘要
Abstract
第1章 前言
第2章 綜述
    2.1 MMPs 與缺血性腦卒中
        2.1.1 MMPs 概況
        2.1.2 MMPs 多相作用
        2.1.3 生物標志物 MMPs
        2.1.4 靶向 MMPs
    2.2 NVU/TJ 與缺血性腦卒中
        2.2.1 NVU 功能解剖
        2.2.2 ECs 結(jié)合部
        2.2.3 TJ 調(diào)控途徑
第3章 實驗方法
    3.1 實驗動物與模型制備
        3.1.1 實驗動物來源
        3.1.2 大鼠 MCAO 模型的制備
        3.1.3 動物分組及藥物干預(yù)
        3.1.4 腦組織取材
    3.2 伊文思藍 BBB 通透性測定
        3.2.1 主要儀器與試劑
        3.2.2 操作方法與步驟
    3.3 Western blot
        3.3.1 主要儀器與試劑
        3.3.2 操作方法與步驟
    3.4 透射電鏡
        3.4.1 主要儀器與試劑
        3.4.2 操作方法與步驟
    3.5 熒光原位明膠酶譜
        3.5.1 實驗原理
        3.5.2 主要儀器與試劑
        3.5.3 操作方法與步驟
    3.6 TTC 染色法
        3.6.1 實驗原理
        3.6.2 主要儀器與試劑
        3.6.3 操作方法與步驟
    3.7 明膠酶譜法
        3.7.1 主要儀器與試劑
        3.7.2 操作方法與步驟
    3.8 實時定量 PCR
        3.8.1 主要儀器與試劑
        3.8.2 操作方法與步驟
        3.8.3 實驗結(jié)果
    3.9 免疫熒光雙染
        3.9.1 主要儀器與試劑
        3.9.2 操作方法與步驟
    3.10 統(tǒng)計分析
第4章 結(jié)果
    4.1 BBB，TJPs，MMPs 變化
        4.1.1 BBB 通透性變化
        4.1.2 claudin-5 蛋白表達變化
        4.1.3 occludin 蛋白表達變化
        4.1.4 NVU/TJ 超微形態(tài)結(jié)構(gòu)
        4.1.5 腦梗死體積演變
        4.1.6 MMPs 活化分布
    4.2 MMPs 與 BBB 通透性
        4.2.1 MMPs 與 EB 滲出
        4.2.2 MMP-2，MMP-9 活性變化
        4.2.3 MMP-2，MMP-9 mRNA 表達變化
    4.3 MMPs 抑制劑對 TJPs 影響
        4.3.1 MMPs 抑制劑對 BBB 通透性影響
        4.3.2 claudin-5，occludin mRNA 表達變化
        4.3.3 MMPs 抑制劑對 claudin-5 蛋白降解影響
        4.3.4 MMPs 抑制劑對 occludin 蛋白降解影響
    4.4 免疫熒光雙重染色
        4.4.1 再灌注早期免疫熒光雙重染色
        4.4.2 再灌注晚期免疫熒光雙重染色
第5章 討論
    5.1 TJPs 表達變化與 MMPs 活化相關(guān)
        5.1.1 BBB 通透性變化
        5.1.2 TJPs 與 BBB 通透性
        5.1.3 MMPs 與 BBB 通透性
    5.2 MMP-2 與 TJ 屏障損傷啟動相關(guān)
        5.2.1 MMP-2 表達及作用
        5.2.2 MMP-2 活化特性
        5.2.3 MMP-2 細胞來源
        5.2.4 其他因素對 MMPs 影響
    5.3 MMPs 抑制劑抑制 TJPs 降解
        5.3.1 MMPs 抑制劑降低 BBB 通透性
        5.3.2 claudin-5，occludin 不同變化
        5.3.3 MMPs 抑制劑使用可行性
    5.4 MMP-9 參與延遲階段 TJ 屏障破壞
    5.5 MMPs 影響 TJPs 機制探討
第6章 結(jié)論
參考文獻
作者簡介及在讀期間所取得的科研成果
致謝



本文編號：3520706