發(fā)布時(shí)間：2017-05-07 06:13

  本文關(guān)鍵詞：環(huán)孢菌素A通過結(jié)合CypD抑制mPTP開放對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性腦出血的作用及其機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：環(huán)孢菌素A(CsA)通過結(jié)合親環(huán)蛋白D(CYPD)抑制線粒體膜通透性轉(zhuǎn)換孔(mPTP)開放,維持線粒體內(nèi)穩(wěn)態(tài)和阻止凋亡誘導(dǎo)因子釋放,從而抑制細(xì)胞的壞死和凋亡,改善神經(jīng)功能評(píng)分。本研究旨在探討環(huán)孢菌素A對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性腦出血的凋亡和壞死信號(hào)通路的影響。方法：1.實(shí)驗(yàn)分組：240只雄性SD大鼠(280g-330g)隨機(jī)分為Sham組(n=48)、ICH組(n=48)、ICH+Vehicle(n=48)、ICH+CsA5mg組(n=48)、 ICH+ CsAlOmg組(n=48)五個(gè)組。2.模型制作及藥物處理：大鼠腦出血模型是右側(cè)基底節(jié)區(qū)注射O.1ml自體全血(坐標(biāo)：囟門前0.2毫米,旁3.5毫米和腹側(cè)深5.5毫米)。藥物處理組是術(shù)后15min經(jīng)尾靜脈注射給藥,后每天一次。3.神經(jīng)功能評(píng)分：采用華婭教授評(píng)分法進(jìn)行評(píng)分,分值越高代表神經(jīng)功能損害越輕,反之,損傷越重。4.腦水含量檢測(cè)及腦水腫觀察：腦出血后24h用干濕重法檢測(cè)腦水含量。腦出血后24h用MRI檢測(cè)腦水腫情況。5.血腦屏障檢測(cè)：腦出血后24h用伊文思藍(lán)法檢測(cè)血腦屏障通透性。6.細(xì)胞凋亡檢測(cè)：腦出血后72h用TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡。7.細(xì)胞壞死檢測(cè)：腦出血后72h用PI法檢測(cè)細(xì)胞壞死。8.免疫熒光檢測(cè)：腦出血后72h用免疫熒光檢測(cè)CypD、AIF及核AIF蛋白變化情況。9.免疫印記檢測(cè)：腦出血后24h用免疫印記法檢測(cè)CypD、AIF及核AIF蛋白表達(dá)。10.線粒體觀察：腦出血后72h電鏡觀察線粒體形態(tài)變化。11.細(xì)胞形態(tài)觀察：腦出血后7d用MISSL染色和HE染色檢測(cè)細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)。12.統(tǒng)計(jì)分析：采用SSPS17.0軟件,結(jié)果均以x±s表示,采用單因素方差分析,組間比較用Student's檢驗(yàn)分析的方法,P0.05為顯著性標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果：1.腦出血后72h神經(jīng)功能評(píng)分顯著較Sham組差(p0.01), CsA治療組較ICH組(p0.01)、ICH+Vehicle組(p0.01)顯著改善。2.腦出血后24h腦水含量顯著較Sham組增加(p0.01), ICH+CsA5mg組、ICH+ CsA10mg組較ICH組(p0.01)、ICH+Vehicle組(p0.01)顯著降低。腦出血后24h行MRI掃描示腦水腫顯著增強(qiáng),治療組顯著減輕。3.腦出血后24h血腦屏障通透性較Sham組顯著破壞(p0.01),ICH+CsAlOmg組較ICH組、ICH+CsA5mg組顯著改善(p0.01)。4.腦出血后72h凋亡細(xì)胞數(shù)較Sham組顯著增加(p0.01), ICH+ CsA10mg組較ICH組、ICH+CsA5mg組凋亡細(xì)胞數(shù)顯著減少(p0.01), ICH+CsA5mg組較ICH+ CsAlOmg組凋亡細(xì)胞數(shù)顯著增多(p0.01)。5.腦出血后72h壞死細(xì)胞數(shù)顯著較Sham組多(p0.01),ICH+ CsAlOmg組較ICH組(p0.01)、ICH+CsA5mg組(p0.01)壞死細(xì)胞數(shù)顯著減少,ICH+CsA5mg組較ICH+ CsAlOmg組壞死細(xì)胞數(shù)顯著增多(p0.01)。6.腦出血后24h用免疫印記法檢測(cè)CypD、AIF及核AIF蛋白表達(dá)較Sham組顯著增加(p0.01), ICH+ CsAlOmg組較ICH組(p0.01)、ICH+CsA5mg組(p0.01)顯著降低。7.腦出血后72h線粒體水腫明顯,ICH+CsA5mg組、ICH+CsAlOmg組線粒體水腫好轉(zhuǎn)。8.腦出血后7d細(xì)胞衰減明顯,ICH+CsA5mg組、ICH+ CsA10mg組細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變且細(xì)胞數(shù)目未見顯著衰減。結(jié)論：在ICH模型中,CsA能夠降低腦水含量和減輕早期腦水腫,改善早期血腦屏障通透性。CsA能夠結(jié)合CypD,抑制AIF釋放和核轉(zhuǎn)位,阻止mPTP開放,保護(hù)線粒體內(nèi)穩(wěn)態(tài),抑制細(xì)胞凋亡和壞死,改善EBI,提高神經(jīng)功能評(píng)分。
【關(guān)鍵詞】：環(huán)孢菌素A 腦出血 線粒體膜通透性 凋亡 壞死
【學(xué)位授予單位】：四川醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R743.34

  本文關(guān)鍵詞：環(huán)孢菌素A通過結(jié)合CypD抑制mPTP開放對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性腦出血的作用及其機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：349329