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MiR210和Stat3全腦缺血大鼠腦組織的表達(dá)通過(guò)HIF-1α通路對(duì)神經(jīng)元凋亡的影響

發(fā)布時(shí)間:2017-05-06 13:02

  本文關(guān)鍵詞:MiR210和Stat3全腦缺血大鼠腦組織的表達(dá)通過(guò)HIF-1α通路對(duì)神經(jīng)元凋亡的影響,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。


【摘要】:背景與目的 臨床上,心臟驟停、嚴(yán)重感染、中毒、休克、麻醉、外科手術(shù)中的低血壓狀況、全面性癲癇發(fā)作等多種危急癥均可造成的急性腦組織血流中斷或低灌流狀態(tài),引起全腦能量及氧流量供應(yīng)不足。腦組織代謝旺盛,能量供應(yīng)主要來(lái)源于糖的有氧代謝,因此腦組織對(duì)缺血缺氧非常敏感。腦組織血流供應(yīng)中斷超過(guò)5分鐘,神經(jīng)細(xì)胞即可出現(xiàn)不可逆性損傷。腦缺血發(fā)生后腦組織氧供應(yīng)不足及能量供給缺乏引起大量的信號(hào)通路被激活,參與調(diào)控神經(jīng)細(xì)胞的損傷。本實(shí)驗(yàn)旨在研究全腦缺血再灌注損傷大鼠海馬信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3(Stat3)及大腦皮層MicroRN A210(MiR210)的表達(dá)變化,探討MicroRNA210(MiR210)及Stat3對(duì)全腦缺血大鼠腦組織神經(jīng)元凋亡的影響與缺氧誘導(dǎo)因子(HIF-1α)之間的相關(guān)性及調(diào)節(jié)機(jī)制。方法采用改良的Pulsinelli四血管阻斷法制備大鼠全腦缺血再灌注模型,共用SD大鼠90只,其中66只建模成功(建模成功率約73%)。90只250-280g健康成年雄性SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(Sham組,n=6)、全腦缺血組(GI組,n=30)、 Stattic+全腦缺血組(Stattic+GI組,n=30),根據(jù)再灌注時(shí)間的不同將GI組和Stattic+GI組均隨機(jī)分為6h組、12h組、24h組、72h組、120h組5個(gè)亞組,每組6只大鼠,分別于再灌注后6h、12h、24h、72h、120h斷頭取腦。假手術(shù)組大鼠電凝雙側(cè)椎動(dòng)脈,分離但不結(jié)扎頸動(dòng)脈,并于術(shù)后立即斷頭取腦。Stattic+GI組大鼠術(shù)后立即給予Stattic溶劑(溶入0.2% DMSO中)腹腔注射10mL/kg)以后每隔24h在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)給藥。假手術(shù)組及GI組給予相同體積的0.2% DMSO腹腔注射。使用免疫印跡法檢測(cè)大鼠海馬Stat3、p-Stat3及HIF-1α蛋白的表達(dá),實(shí)時(shí)定量PCR法檢測(cè)大鼠大腦皮層MiR210、Stat3mRNA、VEGF mRNA、 Caspase3mRNA及HIF-la mRNA的表達(dá)變化。結(jié)果 1.免疫印跡檢測(cè)結(jié)果①與假手術(shù)組(Sham組)相比,GI組大鼠海馬Stat3蛋白于缺血再灌注后6h表達(dá)開始增加(p0.05),并于術(shù)后24h表達(dá)達(dá)到峰值(p0.01); p-Stat3蛋白水平顯著增加(p0.05),于缺血再灌注術(shù)后6h即達(dá)到表達(dá)高峰(P0.01)。②與GI組相比,Stattic+GI組大鼠海馬Stat3蛋白表達(dá)水平變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05); P-Stat3蛋白表達(dá)水平明顯下降(P0.05)。③與假手術(shù)組(Sham組)相比,GI組大鼠海馬HIF-la蛋白于缺血再灌注后6h表達(dá)開始增加(P0.05,),并于術(shù)后24h表達(dá)達(dá)到峰值(p0.01)。④與GI組相比,Stattic+全腦缺血組大鼠海馬HIF-la蛋白表達(dá)水平明顯下降(p0.05),在24h時(shí)表達(dá)水平顯著下降(P0.01)。2.實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)結(jié)果①與假手術(shù)組(Sham組)相比,GI組大鼠大腦皮層MiR210及Stat3mRNA表達(dá)水平明顯增加(P0.05),并于術(shù)后24h表達(dá)達(dá)到峰值(P0.01)。②與假手術(shù)組(Sham組)相比,GI組大鼠大腦皮層HIF-1αmRNA、VEGF mRNA及Capase3 mRNA表達(dá)水平明顯增加(P0.05)。③與GI組相比,Stattic+GI組大鼠大腦皮層HIF-la mRNA表達(dá)水平從術(shù)后12h開始明顯下降(P0.05),在12h、24h及72h時(shí)表達(dá)水平顯著下降(P0.01);VEGF mRNA在12h、24h、72h及120h時(shí)表達(dá)水平明顯下降(P0.05);Capase3 mRNA在12h、24h及72h時(shí)表達(dá)水平明顯下降(P0.05)。結(jié)論1.全腦缺血再灌注損傷后大鼠海馬Stat3蛋白水平及皮層MiR210表達(dá)水平增加。2.全腦缺血后MiR210與HIF-1α之間可能存在某種調(diào)節(jié)機(jī)制。3.全腦缺血導(dǎo)致的嚴(yán)重缺血引起Stat3蛋白活性增加,導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞凋亡基因Caspase3表達(dá)增加,這可能與VEGF高表達(dá)引起血管通透性增加所導(dǎo)致的腦水腫有關(guān),而這一機(jī)制可能是通過(guò)HIF-1α通路引起的。
【關(guān)鍵詞】:全腦缺血 MicroRNA210 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3 缺氧誘導(dǎo)因子-1α 凋亡
【學(xué)位授予單位】:山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2015
【分類號(hào)】:R743
【目錄】:
  • 中文摘要6-8
  • 英文摘要8-11
  • 符號(hào)及英文說(shuō)明11-12
  • 前言12-15
  • 材料與方法15-33
  • 結(jié)果33-35
  • 討論35-43
  • 結(jié)論43-44
  • 附表及附圖44-51
  • 參考文獻(xiàn)51-56
  • 致謝56-57
  • 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄57-58
  • 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表58

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