本文關鍵詞：神經(jīng)降壓素NTS及其受體NTSR1對膠質(zhì)瘤細胞增殖的影響及其分子機制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：惡性膠質(zhì)瘤是具有高度侵襲性和致死性的顱內(nèi)原發(fā)性腫瘤,約占成人顱內(nèi)原發(fā)惡性腫瘤的80%。盡管近年來綜合治療策略(聯(lián)合手術、放療和化療)在臨床中的廣泛運用并取得了一定效果,但多形性膠質(zhì)母細胞瘤(glioblastoma multiforme,GBM)患者的中位生存期仍然少于15個月。惡性增殖是膠質(zhì)瘤細胞的生物學特點之一,導膠質(zhì)瘤細胞惡性增殖的重要原因是腫瘤細胞基因組的不穩(wěn)定和功能基因組的異常表達。因此,深入探討膠質(zhì)細胞增殖和腫瘤生長的分子機制將有助于解釋其惡性增殖現(xiàn)象。神經(jīng)降壓素(neurotensin,NTS)是由13個氨基酸殘基組成的直鏈多肽,作為神經(jīng)遞質(zhì)和激素樣神經(jīng)肽廣泛分布并作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)和消化系統(tǒng)。研究發(fā)現(xiàn),神經(jīng)降壓素和高親和力受體1(neurotensin receptor 1,NTSR1)在多種腫瘤的病理進程中發(fā)揮了重要作用。因此,NTS/NTSR1有望成為腫瘤治療的潛在靶點,但目前尚無文獻報道NTS/NTSR1在惡性膠質(zhì)瘤中的生物學效應及其分子機制。微小RNA(micro RNAs,mi RNAs)是一類內(nèi)源性、短鏈、高度保守的非編碼RNA。mi RNAs和相應蛋白形成RNA誘導的沉默復合物(RNA-induced silencing complex,RISC),RISC作用于靶點mRNA的3端非轉(zhuǎn)錄區(qū),以轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)方式抑制靶點mRNA翻譯成蛋白質(zhì)或降解該mRNA。生物信息學分析發(fā)現(xiàn)人體約有30%-60%基因的表達受到微小RNA的調(diào)控,其中包括眾多細胞周期調(diào)控因子。本研究采用體外和體內(nèi)實驗觀察NTS/NTSR1、mi RNAs和c-Myc對膠質(zhì)瘤細胞增殖、細胞周期和移植瘤生長的影響;采用miRNAs芯片、熒光定量PCR和染色質(zhì)免疫共沉淀(Ch IP)實驗論證NTS/NTSR1如何調(diào)控miRNAs的表達;采用熒光素酶報告基因和正反論證法觀察mi RNAs和CDKs之間的關聯(lián);采用western blot、熒光定量PCR和正反論證法探討NTS/NTSR1如何調(diào)控CDK4的表達。旨在探討NTS/NTSR1在膠質(zhì)瘤細胞增殖中的生物學作用及其分子機制,為研究控制膠質(zhì)瘤生長和改善患者預后提供實驗依據(jù)和新的治療靶點。主要結果:1.NTS/NTSR1促進膠質(zhì)瘤細胞增殖、G1/S期進展和皮下移植瘤生長NTS在體外具有促進膠質(zhì)瘤細胞增殖和G1/S期進展的能力,而使用NTSR1的特異性拮抗劑SR48692或si NTSR1可以顯著逆轉(zhuǎn)NTS對細胞增殖和細胞周期進展的促進作用;沉默膠質(zhì)瘤細胞NTSR1的表達可以顯著抑制皮下移植瘤的生長;NTS/NTSR1對膠質(zhì)瘤細胞增殖的影響主要通過調(diào)控G1/S期進展而不是通過影響細胞凋亡;NTS/NTSR1對G1/S期進展的促進作用主要通過在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)CDK6的表達,在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)節(jié)CDK4表達來實現(xiàn)。2.NTS/NTSR1通過c-Myc/mi R-29b-1和miR-129-3p調(diào)節(jié)CDK6蛋白的表達NTS/NTSR1抑制膠質(zhì)瘤細胞中mi R-29b-1和miR-129-3p的表達,這兩個mi RNAs均可以作用于CDK6 mRNA的3端非轉(zhuǎn)錄區(qū)并抑制CDK6蛋白的表達;NTS/NTSR1通過促進轉(zhuǎn)錄因子c-Myc的表達繼而作用于mi R-29b-1的啟動子并抑制其表達。3.NTS/NTSR1通過轉(zhuǎn)錄因子c-Myc在轉(zhuǎn)錄水平促進CDK4的表達NTS促進膠質(zhì)瘤細胞中轉(zhuǎn)錄因子c-Myc的表達,該過程需要NTSR1的參與;轉(zhuǎn)錄因子c-Myc通過和CDK4的啟動子結合繼而促進CDK4的轉(zhuǎn)錄表達。4.mi R-29b-1、mi R-129-3p和轉(zhuǎn)錄因子c-Myc影響膠質(zhì)瘤細胞增殖、G1/S期進展、顱內(nèi)原位移植瘤生長和荷瘤裸鼠生存時間mi R-29b-1和miR-129-3p抑制膠質(zhì)瘤細胞增殖和G1/S期進展;在U87-NTSR1-SH細胞中干擾miR-29b-1和miR-129-3p的功能可以恢復顱內(nèi)原位移植瘤的生長;在U87-NTSR1-SH細胞中過表達c-Myc或干擾mi RNAs的功能均可以促進膠質(zhì)瘤細胞增殖和G1/S期進展,兩者聯(lián)合運用具有協(xié)同促進作用。綜上所述,NTS/NTSR1可以在體外促進膠質(zhì)瘤細胞增殖和G1/S期進展,在體內(nèi)促進腫瘤組織的生長,而沉默NTSR1可以逆轉(zhuǎn)上述現(xiàn)象;NTS/NTSR1通過抑制mi R-29b-1和mi R-129-3p表達繼而解除這兩個mi RNAs對CDK6蛋白表達的抑制作用;NTS/NTSR1通過促進c-Myc表達一方面抑制miR-29b-1的表達,另一方面促進CDK4的轉(zhuǎn)錄;NTS/NTSR促進膠質(zhì)瘤細胞增殖、G1/S期進展和腫瘤生長需要miRNA/CDKs軸和c-Myc/CDKs軸的參與。
【關鍵詞】：膠質(zhì)母細胞瘤 神經(jīng)降壓素 微小RNA 細胞周期
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R739.41
【目錄】：

• 縮略語表5-7
• 英文摘要7-10
• 中文摘要10-12
• 第一章 前言12-18
• 1.1 選題緣由12-13
• 1.2 研究背景13-15
• 1.3 研究意義15
• 1.4 研究內(nèi)容15-16
• 1.5 研究方法16-18
• 第二章 NTS/NTSR1促進膠質(zhì)瘤細胞周期進展，細胞增殖和腫瘤生長18-40
• 2.1 材料和方法18-28
• 2.2 結果28-37
• 2.3 討論37-39
• 2.4 小結39-40
• 第三章 NTS/NTSR1通過miRNA/CDKs和c-Myc/CDKs機制調(diào)控CDK4/6 的表達40-66
• 3.1 材料和方法41-53
• 3.2 結果53-63
• 3.3 討論63-65
• 3.4 小結65-66
• 第四章 NTS/NTSR1-mi RNAs和NTS/NTSR1-Myc共同影響62膠質(zhì)瘤細胞的增殖活力66-82
• 4.1 材料和方法66-74
• 4.2 結果74-80
• 4.3 討論80-81
• 4.4 小結81-82
• 全文總結82-84
• 參考文獻84-93
• 文獻綜述 micro RNAs調(diào)控惡性膠質(zhì)瘤細胞周期的研究進展93-100
• 參考文獻97-100
• 攻讀學位期間的研究成果100-101
• 致謝101

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中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 歐陽慶;神經(jīng)降壓素NTS及其受體NTSR1對膠質(zhì)瘤細胞增殖的影響及其分子機制[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

  本文關鍵詞：神經(jīng)降壓素NTS及其受體NTSR1對膠質(zhì)瘤細胞增殖的影響及其分子機制，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：346531