目的本課題通過探討使用慢病毒過表達(dá)P2X4基因（LV-P2rx4）對(duì)6-羥基多巴（6-OHDA）誘導(dǎo)的帕金森�。≒arkinson’s disease,PD）模型大鼠腦黑質(zhì)中多巴胺能神經(jīng)元數(shù)量以及白介素-1β（Interleukin-1β,IL-1β）和腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）蛋白表達(dá)水平的影響,來(lái)研究ATP-P2X4信號(hào)軸與炎性因子IL-1β和神經(jīng)保護(hù)因子BDNF在PD發(fā)病過程中的作用。方法采用體質(zhì)量200～250 g的健康Wistar雄性大鼠,隨機(jī)分為6組,每組20只。經(jīng)立體定向定位左側(cè)黑質(zhì),A.對(duì)照（Control）組:注入含0.02%抗壞血酸的生理鹽水,B.PD模型（6-OHDA）組:注入6-羥基多巴（6-OHDA）,C.目的基因陰性對(duì)照（RNA-P2X4）組:注入攜帶過表達(dá)P2X4基因的慢病毒,D.空載病毒陰性對(duì)照組（P2X4-NC）組:注入空載陰性病毒;E.目的基因陰性對(duì)照+PD模型（RNA-P2X4+6-OHDA）組:先注入攜帶過表達(dá)P2X4基因的慢病毒1周后再注射6-OHDA;F.空載病毒陰性對(duì)照... 

【文章來(lái)源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：46 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

慢病毒在黑質(zhì)TH陽(yáng)性多巴胺

實(shí)驗(yàn)結(jié)果11實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.免疫熒光染色檢測(cè)結(jié)果1.1免疫熒光染色檢測(cè)慢病毒表達(dá)免疫熒光染色結(jié)果顯示攜帶過表達(dá)P2X4基因的慢病毒在大鼠黑質(zhì)TH陽(yáng)性多巴胺能神經(jīng)元中表達(dá)穩(wěn)定（圖1），可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。圖1慢病毒在黑質(zhì)TH陽(yáng)性多巴胺能神經(jīng)元中的表達(dá)情況（×400）注：1.酪氨酸羥化酶(TH)在大鼠黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元中的表達(dá)；2.攜帶過表達(dá)P2X4基因的慢病毒在大鼠黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元中的表達(dá)；3.攜帶過表達(dá)P2X4基因的慢病毒在TH陽(yáng)性多巴胺能神經(jīng)元中的表達(dá)。Notes:1.ExpressionofTHindopaminergicneuronsinsubstantianigaofrats.2.ExpressionoflentiviruscarryingoverexpressedP2X4geneinratsubstantianigadopaminergicneurons.3.ExpressionoflentiviruscarryingoverexpressedP2X4geneinTHpsitivedopaminergicneuronsofratsubstantianiga.1.2免疫熒光染色檢測(cè)TH陽(yáng)性多巴胺能神經(jīng)元計(jì)數(shù)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示（表2，圖2、3）：①與對(duì)照組相比，6-OHDA組和P2X4-NC+6-OHDA組大鼠腦黑質(zhì)中TH陽(yáng)性多巴胺能神經(jīng)元數(shù)量有所減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,F=3.79)。②與6-OHDA組和P2X4-NC+6-OHDA組相比，RNA-P2X4+6-OHDA組大鼠腦黑質(zhì)中TH陽(yáng)性多巴胺能神經(jīng)元數(shù)量減少顯著，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001,F=8.96)。③與對(duì)照組相比，RNA-P2X4組和P2X4-NC組大鼠腦黑質(zhì)中TH陽(yáng)性多巴胺能神經(jīng)元數(shù)量變化不明顯，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

青島大學(xué)碩士學(xué)位論文12圖2各組大鼠腦內(nèi)黑質(zhì)中TH陽(yáng)性多巴胺能神經(jīng)元數(shù)量（×100）Fig2ThenumberofTHpositivedopaminergicneuronsindifferentgroups（×100）注：A=對(duì)照組；B=PD模型組；C=目的基因陰性對(duì)照組；D=空載病毒陰性對(duì)照組；E=目的基因陰性對(duì)照+PD模型組；F=空載病毒陰性對(duì)照+PD模型組。Notes:A=Controlgroup;B=6-OHDAgroup;C=RNA-P2X4group;D=P2X4-NCgroup;E=RNA-P2X4+6-OHDAgroup;F=P2X4-NC+6-OHDAgroup.Comparedtothecontrolgroup.

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]帕金森病患者認(rèn)知功能障礙與血清BDNF及TrkB水平的關(guān)系研究[J]. 張立群,劉崴,王鈺.  中國(guó)實(shí)用神經(jīng)疾病雜志. 2019(21)
[2]帕金森病患者血尿酸水平與認(rèn)知功能、炎性因子及神經(jīng)細(xì)胞因子的相關(guān)性[J]. 彭雪梅,鄧婧,李琴,蔡敏.  疑難病雜志. 2019(02)
[3]沉默P2X4R基因?qū)2X4/NLRP3炎性小體通路介導(dǎo)的BV2小膠質(zhì)細(xì)胞中腫瘤壞死因子α表達(dá)的影響[J]. 許文帥,薛莉,蔡敏,謝安木.  中國(guó)臨床神經(jīng)科學(xué). 2019(01)
[4]白介素-1β的分泌及其影響因素[J]. 袁維卓,劉麗蘭,張睿迪,王健宇,孫雪純,李媛媛,劉良晨,關(guān)寶生.  牡丹江醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2018(06)
[5]腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子對(duì)左旋多巴誘發(fā)的帕金森病異動(dòng)癥大鼠行為的影響及其作用機(jī)制[J]. 甄體麗,趙君焱,舒海洋,黃譯腺,包仕堯,劉春風(fēng),羅蔚鋒.  臨床神經(jīng)病學(xué)雜志. 2017(01)
[6]嘌呤P2受體的免疫調(diào)節(jié)功能[J]. 周金鳳,覃朝燕,賴煒明,杜昌升.  中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào). 2015(08)
[7]Functional interactions between steroid hormones and neurotrophin BDNF[J]. Tadahiro Numakawa,Daisaku Yokomaku,Misty Richards,Hiroaki Hori,Naoki Adachi,Hiroshi Kunugi.  World Journal of Biological Chemistry. 2010(05)



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