發(fā)布時間：2021-10-08 09:30

　　目的本課題通過探討使用慢病毒過表達P2X4基因（LV-P2rx4）對6-羥基多巴（6-OHDA）誘導的帕金森病（Parkinson’s disease,PD）模型大鼠腦黑質(zhì)中多巴胺能神經(jīng)元數(shù)量以及白介素-1β（Interleukin-1β,IL-1β）和腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）蛋白表達水平的影響,來研究ATP-P2X4信號軸與炎性因子IL-1β和神經(jīng)保護因子BDNF在PD發(fā)病過程中的作用。方法采用體質(zhì)量200～250 g的健康Wistar雄性大鼠,隨機分為6組,每組20只。經(jīng)立體定向定位左側(cè)黑質(zhì),A.對照（Control）組:注入含0.02%抗壞血酸的生理鹽水,B.PD模型（6-OHDA）組:注入6-羥基多巴（6-OHDA）,C.目的基因陰性對照（RNA-P2X4）組:注入攜帶過表達P2X4基因的慢病毒,D.空載病毒陰性對照組（P2X4-NC）組:注入空載陰性病毒;E.目的基因陰性對照+PD模型（RNA-P2X4+6-OHDA）組:先注入攜帶過表達P2X4基因的慢病毒1周后再注射6-OHDA;F.空載病毒陰性對照... 

【文章來源】：青島大學山東省

【文章頁數(shù)】：46 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

慢病毒在黑質(zhì)TH陽性多巴胺

實驗結(jié)果11實驗結(jié)果1.免疫熒光染色檢測結(jié)果1.1免疫熒光染色檢測慢病毒表達免疫熒光染色結(jié)果顯示攜帶過表達P2X4基因的慢病毒在大鼠黑質(zhì)TH陽性多巴胺能神經(jīng)元中表達穩(wěn)定（圖1），可進行后續(xù)實驗。圖1慢病毒在黑質(zhì)TH陽性多巴胺能神經(jīng)元中的表達情況（×400）注：1.酪氨酸羥化酶(TH)在大鼠黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元中的表達；2.攜帶過表達P2X4基因的慢病毒在大鼠黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元中的表達；3.攜帶過表達P2X4基因的慢病毒在TH陽性多巴胺能神經(jīng)元中的表達。Notes:1.ExpressionofTHindopaminergicneuronsinsubstantianigaofrats.2.ExpressionoflentiviruscarryingoverexpressedP2X4geneinratsubstantianigadopaminergicneurons.3.ExpressionoflentiviruscarryingoverexpressedP2X4geneinTHpsitivedopaminergicneuronsofratsubstantianiga.1.2免疫熒光染色檢測TH陽性多巴胺能神經(jīng)元計數(shù)本實驗結(jié)果顯示（表2，圖2、3）：①與對照組相比，6-OHDA組和P2X4-NC+6-OHDA組大鼠腦黑質(zhì)中TH陽性多巴胺能神經(jīng)元數(shù)量有所減少，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05,F=3.79)。②與6-OHDA組和P2X4-NC+6-OHDA組相比，RNA-P2X4+6-OHDA組大鼠腦黑質(zhì)中TH陽性多巴胺能神經(jīng)元數(shù)量減少顯著，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.001,F=8.96)。③與對照組相比，RNA-P2X4組和P2X4-NC組大鼠腦黑質(zhì)中TH陽性多巴胺能神經(jīng)元數(shù)量變化不明顯，差異不具有統(tǒng)計學意義（P>0.05）。

青島大學碩士學位論文12圖2各組大鼠腦內(nèi)黑質(zhì)中TH陽性多巴胺能神經(jīng)元數(shù)量（×100）Fig2ThenumberofTHpositivedopaminergicneuronsindifferentgroups（×100）注：A=對照組；B=PD模型組；C=目的基因陰性對照組；D=空載病毒陰性對照組；E=目的基因陰性對照+PD模型組；F=空載病毒陰性對照+PD模型組。Notes:A=Controlgroup;B=6-OHDAgroup;C=RNA-P2X4group;D=P2X4-NCgroup;E=RNA-P2X4+6-OHDAgroup;F=P2X4-NC+6-OHDAgroup.Comparedtothecontrolgroup.

【參考文獻】：
期刊論文
[1]帕金森病患者認知功能障礙與血清BDNF及TrkB水平的關系研究[J]. 張立群,劉崴,王鈺.  中國實用神經(jīng)疾病雜志. 2019(21)
[2]帕金森病患者血尿酸水平與認知功能、炎性因子及神經(jīng)細胞因子的相關性[J]. 彭雪梅,鄧婧,李琴,蔡敏.  疑難病雜志. 2019(02)
[3]沉默P2X4R基因?qū)2X4/NLRP3炎性小體通路介導的BV2小膠質(zhì)細胞中腫瘤壞死因子α表達的影響[J]. 許文帥,薛莉,蔡敏,謝安木.  中國臨床神經(jīng)科學. 2019(01)
[4]白介素-1β的分泌及其影響因素[J]. 袁維卓,劉麗蘭,張睿迪,王健宇,孫雪純,李媛媛,劉良晨,關寶生.  牡丹江醫(yī)學院學報. 2018(06)
[5]腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子對左旋多巴誘發(fā)的帕金森病異動癥大鼠行為的影響及其作用機制[J]. 甄體麗,趙君焱,舒海洋,黃譯腺,包仕堯,劉春風,羅蔚鋒.  臨床神經(jīng)病學雜志. 2017(01)
[6]嘌呤P2受體的免疫調(diào)節(jié)功能[J]. 周金鳳,覃朝燕,賴煒明,杜昌升.  中國細胞生物學學報. 2015(08)
[7]Functional interactions between steroid hormones and neurotrophin BDNF[J]. Tadahiro Numakawa,Daisaku Yokomaku,Misty Richards,Hiroaki Hori,Naoki Adachi,Hiroshi Kunugi.  World Journal of Biological Chemistry. 2010(05)



本文編號：3423892