本文關(guān)鍵詞：基于MMP-2為靶點(diǎn)的腦膠質(zhì)瘤磁共振分子探針的構(gòu)建及其生物學(xué)檢測，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:神經(jīng)膠質(zhì)瘤是最常見的原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤,具有惡性程度高、易復(fù)發(fā)、預(yù)后差等臨床特點(diǎn)。多年來,診斷檢查一直是膠質(zhì)瘤面臨的重要課題之一,準(zhǔn)確及時(shí)的診斷對(duì)于后期控制病情、提高綜合治療效果有重要意義。研究表明,膠質(zhì)瘤高死亡率的一個(gè)重要原因就在于腫瘤細(xì)胞高度侵襲能力,這也是膠質(zhì)瘤的典型生物學(xué)特性[1]。其侵襲過程同其他顱外腫瘤一樣,經(jīng)歷了粘附、降解、移動(dòng)三個(gè)步驟,即瘤細(xì)胞粘附到細(xì)胞外基質(zhì)(Extracellular matrix,ECM),并分泌蛋白酶將局部基質(zhì)降解,然后伸出偽足向被降解的區(qū)域運(yùn)動(dòng)�；|(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)既是降解細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)成分的重要酶類,在腫瘤的侵襲過程中起重要作用[2]。有研究指出膠質(zhì)瘤的級(jí)別即惡性程度與其中MMP-2表達(dá)強(qiáng)度有關(guān),惡性程度越高,免疫組化結(jié)果顯示MMP-2陽性表達(dá)強(qiáng)度也隨之增高[3]。磁共振成像因其優(yōu)越的軟組織分辨率和對(duì)比度,一直是腦膠質(zhì)瘤診斷和治療首選的成像技術(shù)。而可作為磁共振成像對(duì)比劑的超小超順磁性氧化鐵顆粒(Utrasmall Superparamagnetic Iron Oxide,USPIO)具有較常規(guī)MRI造影劑更高的敏感性及飽和磁性,弛豫率是同樣條件下常規(guī)MRI造影劑的7-10倍[4],且直徑不到20nm,可以避免被內(nèi)皮網(wǎng)狀系統(tǒng)(RES)吞噬。通過對(duì)其表面進(jìn)行修飾,可用于帶有特定分子的細(xì)胞組織顯像[5],它能夠降低MRI T2的信號(hào)強(qiáng)度[6,7],且USPIO的毒副作用較低,在進(jìn)入人體血漿鐵池后可被降解,繼而被細(xì)胞所代謝[8-11]。本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)利用基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)的多克隆抗體Ab-MMP-2與超小超順磁性氧化鐵顆粒(Utrasmall Superparamagnetic Iron Oxide,USPIO)偶聯(lián),形成一種具有特異性靶向功能的分子影像探針Ab-MMP-2-USPIO,并對(duì)該分子探針的免疫活性、細(xì)胞毒性以及與大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞的特異性結(jié)合能力等進(jìn)行體外檢測,探討其在腦膠質(zhì)瘤的磁共振成像(Magnetic resonance imaging,MRI)分子影像學(xué)診斷中應(yīng)用的可行性及有效性,為腦膠質(zhì)瘤的診斷提供新的思路和方向。方法:第一部分:檢測三種細(xì)胞系中基質(zhì)金屬蛋白酶2的表達(dá)情況分別采用免疫熒光法及蛋白質(zhì)印跡法檢測基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)在大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞系(RA)、大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞系(C6)和人星形膠質(zhì)瘤細(xì)胞系(U87)中的表達(dá)情況;第二部分:利用碳二亞胺(EDC)法將基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)的多克隆抗體Ab-MMP-2與超小超順磁性氧化鐵顆粒(USPIO)偶聯(lián),制備分子影像探針Ab-MMP-2-USPIO;第三部分:檢測合成后分子探針(Ab-MMP-2-USPIO)的生物活性及其與靶細(xì)胞的特異性結(jié)合能力;1采用Western blotting法檢測合成后的Ab-MMP-2-USPIO分子探針的免疫活性;2 MTT比色法檢測不同濃度(0、25、50、75、150、300、600ug/ml)的Ab-MMP-2-USPIO分子探針對(duì)于正常大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞(RA)的細(xì)胞毒性;3 Annexin V-FITC/PI流式細(xì)胞雙染法檢測濃度為75 ug/ml的Ab-MMP-2-USPIO分子探針對(duì)于正常大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞(RA)以及大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞(C6)的致凋亡作用;4運(yùn)用普魯士藍(lán)染色法檢測濃度為75 ug/ml的Ab-MMP-2-USPIO分子探針與大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞(C6)中MMP-2蛋白的特異性結(jié)合能力。結(jié)果:1免疫熒光法結(jié)果顯示MMP-2蛋白在大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞(RA)內(nèi)沒有特異性熒光表達(dá),但在大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞(C6)和人星形膠質(zhì)瘤細(xì)胞(U87)的胞質(zhì)內(nèi)呈高表達(dá)狀態(tài);Western blotting結(jié)果可見大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞(C6)和人星形膠質(zhì)瘤細(xì)胞(U87)組均出現(xiàn)條帶,證實(shí)了兩種細(xì)胞中MMP-2蛋白的表達(dá),但正常大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞(RA)組未檢測出MMP-2蛋白表達(dá)。2在對(duì)合成的分子探針Ab-MMP-2-USPIO的檢測中:Western blotting結(jié)果顯示Ab-MMP-2-USPIO與MMP-2蛋白有著較高的結(jié)合度,與該抗原的多克隆抗體Ab-MMP-2相似;MTT比色法結(jié)果顯示Ab-MMP-2-USPIO的細(xì)胞毒性低,超過150ug/ml的劑量培養(yǎng)72h才出現(xiàn)明顯的細(xì)胞毒性,后續(xù)實(shí)驗(yàn)中所采用的濃度(75ug/ml)對(duì)于正常大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞無明顯毒性,處于安全水平;Annexin V-FITC/PI流式細(xì)胞雙染法檢測結(jié)果顯示濃度為75ug/ml的Ab-MMP-2-USPIO與正常大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞(RA)以及大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞(C6)共培養(yǎng)48h和72h均不會(huì)致明顯的細(xì)胞凋亡;普魯士藍(lán)染色的結(jié)果顯示,相對(duì)正常大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞(RA),大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞(C6)細(xì)胞能夠大量攝取Ab-MMP-2-USPIO。結(jié)論:體外實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明,MMP-2蛋白在正常大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞(RA)中不表達(dá),在膠質(zhì)瘤細(xì)胞系C6和U87細(xì)胞中高表達(dá),且人工合成的Ab-MMP-2-USPIO分子探針對(duì)細(xì)胞的毒性較小,致凋亡效果不明顯,同時(shí)與大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞(C6)有著較高的特異性結(jié)合能力。為進(jìn)一步的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)奠定了基礎(chǔ),有望成為提高腦膠質(zhì)瘤MRI診斷準(zhǔn)確性的新型靶向納米核磁共振造影劑。
【關(guān)鍵詞】：膠質(zhì)瘤 磁共振成像 超小超順磁性氧化鐵顆粒 基質(zhì)金屬蛋白酶-2 分子探針 細(xì)胞毒性
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R739.4
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文縮寫11-13
• 前言13-14
• 材料與方法14-25
• 結(jié)果25-27
• 附圖27-31
• 討論31-33
• 結(jié)論33
• 參考文獻(xiàn)33-38
• 綜述 神經(jīng)膠質(zhì)瘤的分子影像學(xué)研究進(jìn)展38-51
• 參考文獻(xiàn)46-51
• 致謝51-52
• 個(gè)人簡歷52

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

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本文編號(hào)：338389