目的:1.觀察RAGE與補(bǔ)體C3在糖尿病小鼠海馬區(qū)的表達(dá)水平;2.探究高糖通過RAGE調(diào)控補(bǔ)體C3轉(zhuǎn)錄及活化的分子機(jī)制;3.明確RAGE與補(bǔ)體C3對(duì)糖尿病小鼠大腦結(jié)構(gòu)和功能的影響。方法:1.動(dòng)物實(shí)驗(yàn):（1）C57BL/6J小鼠隨機(jī)分為4組:對(duì)照組、糖尿病組、糖尿病+FPS-ZM1組、糖尿病+C3aRA組。糖尿病組給予一次性150mg/kg STZ腹腔注射建立1型糖尿病小鼠模型。建模3個(gè)月后,FPS-ZM1組及C3aRA組糖尿病小鼠分別給予腹腔注射RAGE特異性抑制劑FPS-ZM1（1mg/kg）以及C3aRA（60mg/kg）,每天注射一次,連續(xù)4周。（2）Morris水迷宮檢測(cè)小鼠的空間學(xué)習(xí)與記憶力。（3）免疫熒光雙標(biāo)法觀察星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物GFAP與RAGE,GFAP與補(bǔ)體C3的定位關(guān)系,并分析RAGE與補(bǔ)體C3在星形膠質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)水平;免疫熒光單標(biāo)法檢測(cè)突觸素SYP的表達(dá)水平。（4）Western blot檢測(cè)補(bǔ)體C3、RAGE/p38MAPK/NF-κB信號(hào)分子的表達(dá)以及突觸蛋白的表達(dá)。（5）Nissl以及TUNEL染色分析神經(jīng)元數(shù)量及凋亡情況。2.細(xì)胞實(shí)驗(yàn):（1）原代星形膠... 

【文章來(lái)源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

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RAGE與補(bǔ)體C3在糖尿病小鼠海馬組織表達(dá)水平上調(diào)A．Westernblot檢測(cè)小鼠海馬組織補(bǔ)體C3和RAGE的蛋白表達(dá)

圖 1.2 糖尿病小鼠海馬區(qū)補(bǔ)體 C3 與星形膠質(zhì)細(xì)胞共定位免疫熒光標(biāo)記補(bǔ)體 C3（紅光）與星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物 GFAP（綠光）。標(biāo)尺為 50μm。Fig.1.2 Co-localization of C3 and astrocytes in the diabetic hippocampusCo-localization of C3 (red) and astrocytes marker GFAP(green). Scale bar=50μm.2.2.2 高糖培養(yǎng)的原代星形膠質(zhì)細(xì)胞合成分泌補(bǔ)體 C3 的水平我們通過體外提取原代小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞，用 Western blot 以及 ELISA 法進(jìn)一步明確不同葡萄糖濃度對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞補(bǔ)體 C3 的蛋白合成水平以及分泌水平的影響。我們?cè)O(shè)有 NG，HG 15mM，HG 30mM 組。為排除滲透壓對(duì)細(xì)胞的影響，設(shè)置了滲透壓對(duì)照組：NG+30mM 甘露醇組，HG15mM+15mM 甘露醇組。Westernblot 結(jié)果顯示，HG 組（包括 HG15mM 以及 HG30mM）星形膠質(zhì)細(xì)胞的補(bǔ)體 C3蛋白含量較 NG 組增加，結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05，P<0.001）；NG+30mM甘露醇組與 NG 組比較，HG15mM+15mM 甘露醇組與 HG15mM 組比較，補(bǔ)體C3 蛋白水平均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）（圖 1.3A）。 ELISA 結(jié)果顯示，HG15mM

圖 1.3 高糖培養(yǎng)的原代星形膠質(zhì)細(xì)胞合成分泌補(bǔ)體 C3A．Western blot 檢測(cè)星形膠質(zhì)細(xì)胞補(bǔ)體 C3 的蛋白表達(dá)并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。B．ELISA 檢測(cè)星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌補(bǔ)體 C3 含量。* P<0.05；*** P<0.001；n=3。NG 為對(duì)照組，HG 為高糖組。C．體外細(xì)胞免疫熒光標(biāo)記補(bǔ)體 C3（綠光）與星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物 GFAP（紅光）。標(biāo)尺為50μm。Fig.1.3 Cellular and extracellular C3 protein level in the high glucose induced astrocytes.A, Representative western blot assay of C3 protein expression; B, ELISA assay for astrocytessecreted C3. * P<0.05; ***P<0.001; n=3. C, Immunofluorescence stain for C3 in astrocytes.Scale bar=50μm.3 討論20 世紀(jì)初期，人們開始意識(shí)到糖尿病患者常常伴隨記憶力的下降。1922 年，Mile 和 Root 觀察到糖尿病病人在認(rèn)知水平測(cè)試中表現(xiàn)欠佳[27]。隨后多名學(xué)者描述了糖尿病引起的中樞神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)并發(fā)癥：由 Nielsen 等人在尸檢過程中觀察


本文編號(hào)：3342894