自發(fā)性腦出血（Intracerebral hemorrhage, ICH）在我國占急性腦血管病的30%左右,急性期病死率約為30%-40%,是急性腦血管病中最高的,具有高發(fā)病率、高致殘率、高死亡率的特點(diǎn)。血腦屏障（Blood-brain barrier, BBB）損傷是腦出血后水腫形成的重要機(jī)制之一,而腦水腫是腦出血患者病情惡化和死亡的重要原因,控制腦水腫降低顱內(nèi)壓是腦出血治療的重點(diǎn)之一。Zhang等人研究發(fā)現(xiàn)外源性神經(jīng)元性絲氨酸蛋白酶抑制劑（Neuroserpin, NSP）能夠減少腦缺血后腦血管通透性的增加從而減少BBB損傷。目前國內(nèi)外關(guān)于NSP在缺血性卒中及癲癇等疾病中的神經(jīng)保護(hù)作用已有諸多研究,但罕有腦出血中NSP作用的相關(guān)研究,我們希望通過實(shí)驗(yàn)探討NSP在腦出血中對BBB的影響,尋找腦出血臨床治療的新策略。本課題首先通過免疫熒光、Western blot觀察比較腦出血小鼠在干預(yù)后24h/48h/72h不同時間點(diǎn)血腫周邊腦組織NSP蛋白較空白對照及假手術(shù)組表達(dá)變化情況,并分析其隨時間變化趨勢；然后通過神經(jīng)功能缺損評分、干濕重法測定腦組織含水量、伊文思藍(lán)（Evans blue, ... 

【文章來源】：復(fù)旦大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：87 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

血腦屏障結(jié)構(gòu)圖；B:緊密連接結(jié)構(gòu)圖

圖1-1腦出血模型制備及腦組織標(biāo)本注：A:腦出血建模；B:紋狀體骨面定位；C:紋狀體定位示意圖；D:假手術(shù)模型腦組織標(biāo)本冠狀切面；E:腦出血模型腦組織標(biāo)本冠狀切面；F:腦出血模型標(biāo)本側(cè)面觀3.實(shí)驗(yàn)分組

圖1-5 Western blot轉(zhuǎn)膜夾板安裝示意圖春紅染色：PVDF膜從轉(zhuǎn)膜儀中取出后右上角減角做標(biāo)記，置于麗中，約5分鐘后顯色。用轉(zhuǎn)膜液洗凈后照相。再用1*TBST洗3次，直至脫色。閉：PVDF膜置于5%脫脂牛奶中，搖床七緩慢搖動，室溫封閉Ih。入兔源性NSP —抗(ab33077，1:250)和小鼠源性p-tubulin —抗(KC5704°(：_育過夜。TBST洗3次，每次lOmin。加入HRP標(biāo)記的山羊抗兔二抗(CW010山羊抗小鼠一-抗(CW0102，1:10000),室溫孵育Ih。_育后TBST洗10 min。學(xué)發(fā)光法(ECL)顯影：ECL發(fā)光試劑盒中A、B液等體積混合制備（現(xiàn)用現(xiàn)配），均滴加在洗潘好的PVDF膜正面，立即放入暗盒中象掃描及積分光密度值測定：免疫印跡的圖譜由數(shù)碼相機(jī)拍照，

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]The Effects of Electromagnetic Pulse on the Protein Levels of Tight Junction Associated-Proteins in the Cerebral Cortex,Hippocampus,Heart,Lung,and Testis of Rats[J]. QIU LianBo 1,CHEN Chen 1,DING GuiRong 2,ZHOU Yan 2,and ZHANG MengYao 3 1.Department of Blood Transfusion,Xijing Hospital,Fourth Military Medical University,Xi’an 710032,Shannxi,China 2.Department of Radiation Medicine,Faculty of Preventive Medicine,Fourth Military Medical University,Xi’an 710032,Shannxi,China 3.Department of Chemistry,School of Pharmacy,Fourth Military Medical University,Xi’an 710032,Shannxi,China.  Biomedical and Environmental Sciences. 2011(04)
[2]神經(jīng)源性絲氨酸蛋白酶抑制劑在大鼠小膠質(zhì)細(xì)胞缺氧/復(fù)氧模型上的作用[J]. 楊雪蓮,董強(qiáng),劉玲,王亮.  復(fù)旦學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2011(03)
[3]神經(jīng)源性絲氨酸蛋白酶抑制劑在神經(jīng)元缺氧復(fù)氧損傷中的保護(hù)作用[J]. 楊雪蓮,董強(qiáng),王亮,任惠民.  中國臨床神經(jīng)科學(xué). 2008(06)
[4]《中國腦血管病防治指南》摘要(四)[J]. 饒明俐.  中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志. 2006(02)



本文編號：3277757