發(fā)布時間：2021-06-29 15:54

　　目的：缺血性腦損傷是主要的致死、致殘性疾病，為患者家庭和社會帶來沉重的負擔，但至今尚無有效的治療策略來改善其預后。短暫的、亞致死性缺血預處理能使細胞和組織對隨后發(fā)生的長時間的致死性腦缺血損傷起到保護作用，這一現(xiàn)象被稱為缺血耐受。磷脂酰基醇3-激酶PI3K/Akt信號通路在缺血預處理過程中發(fā)揮神經(jīng)保護作用。Cbl-b屬于Cbl原癌基因家族成員之一。在T細胞中Cbl-b通過泛素化PI3K的P85亞基，負調(diào)控PI3K/Akt信號通路，抑制T細胞的活化。Cbl-b對PI3K/Akt通路的負調(diào)控作用在T細胞、骨瘤細胞、B細胞、肥大細胞等多種細胞中都有發(fā)現(xiàn)。我們研究組先前的研究表明，在大鼠局灶性腦缺血模型中缺血耐受通過抑制Cbl-b、增加磷酸化Akt的表達來抑制細胞凋亡，從而起到神經(jīng)保護作用。在T細胞內(nèi)鈣水平升高并與鈣調(diào)素結(jié)合，從而使鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶（Calcineurin，CaN）活化，活化的CaN使轉(zhuǎn)錄因子NFAT脫磷酸化并轉(zhuǎn)移至核內(nèi)，NFAT作為一種轉(zhuǎn)錄因子調(diào)節(jié)Cbl-b基因的表達。本研究利用PC12細胞系建立氧糖剝奪缺血耐受模型，觀察Ca²⁺/CaN/Cbl-b與PI3... 

【文章來源】：大連醫(yī)科大學遼寧省

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一部分 泛素連接酶 Cbl-b 參與缺血預處理對 PI3K/Akt 通路的調(diào)控
    前言
    材料與方法
        1. 材料
            1.1 細胞株
            1.2 試劑
            1.3 儀器
        2. 實驗方法
            2.1 PC12 細胞培養(yǎng)
            2.2 氧糖剝奪
            2.3 氧糖剝奪預處理
            2.4 MTT 檢測細胞存活率
            2.5 Hoechst 33258 細胞核染色檢測凋亡細胞
            2.6 Real time PCR
            2.7 蛋白質(zhì)免疫印跡（Western blot）
            2.8 統(tǒng)計學處理
    結(jié)果
        1. 預處理防止 OGD 誘導的細胞死亡
        2. Cbl-b 參與 OGD 預處理過程
        3. Cbl-b 對 OGD 預處理的反應(yīng)大于 Akt 的激活
        4. OGD 預處理過程中 Akt 活性調(diào)節(jié) GSK3β磷酸化
        5. Akt 活性在 OGD 預處理過程中調(diào)控細胞的凋亡
    討論
    結(jié)論
    參考文獻
第二部分 Ca~(2+)/CaN 參與缺血預處理對 Cbl-b 的調(diào)控
    前言
    材料與方法
        1. 材料
            1.1 細胞株
            1.2 試劑
        2. 實驗方法
            2.1 PC12 細胞培養(yǎng)
            2.2 氧糖剝奪
            2.3 氧糖剝奪預處理
            2.4 MTT 檢測細胞存活率
            2.5 蛋白質(zhì)免疫印跡（Western Blot）
    結(jié)果
        1. OGD 缺血預處理降低缺血導致 CaN 表達的增加
        2. 不同時間點 CaN 與 Cbl-b 的對應(yīng)表達
        3. A23187 對預處理組 CaN 和 Cbl-b 表達的影響
        4. 鈣離子調(diào)控藥物在缺血過程中對 CaN 和 Cbl-b 表達的影響
    討論
    結(jié)論
    參考文獻
第三部分 Ca~(2+)/CaN/Cbl-b/Akt 在尼莫地平和 MK801 藥物預處理中的作用研究
    前言
    材料和方法
        1. 材料
            1.1 細胞株
            1.2 試劑
        2. 實驗方法
            2.1 PC12 細胞培養(yǎng)
            2.2 氧糖剝奪
            2.3 氧糖剝奪預處理
            2.4 MTT 檢測細胞存活率
            2.5 Hoechst 33258 細胞核染色檢測凋亡細胞
            2.6 蛋白質(zhì)免疫印跡（Western Blot）
    結(jié)果
        1. 尼莫地平或 MK801 預處理抑制 OGD 誘導的細胞死亡
        2. 尼莫地平或 MK801 預處理對 CaN、Cbl-b、PI3K 及 p-GSK3 β表達的影響
        3. 尼莫地平或 M K 801 預處理調(diào)控細胞的凋亡
    討論
    結(jié)論
    參考文獻
綜述
    參考文獻
附錄
攻讀學位期間發(fā)表論文情況
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]caspase-3抑制藥和鈣拮抗藥聯(lián)合應(yīng)用對氧糖剝奪性神經(jīng)元缺血損害的保護作用[J]. 張擁波,董為偉,王得新.  中國現(xiàn)代神經(jīng)疾病雜志. 2007(01)
[2]大鼠心肌缺血預適應(yīng)相關(guān)基因5的克隆與特性分析[J]. 王建設(shè),袁燦,王慷慨,王堯玲,劉梅冬,劉可,肖獻忠.  中國動脈硬化雜志. 2006(03)
[3]環(huán)孢霉素A對老齡大鼠慢性腦灌注不足認知障礙的效用[J]. 劉之榮,李露斯,卞曉紅,范文輝.  中國神經(jīng)精神疾病雜志. 2001(01)



本文編號：3256723