目的:小膠質(zhì)細(xì)胞的過度活化所引起的神經(jīng)炎癥反應(yīng)在缺血性腦卒中、阿爾茨海默病、帕金森氏病、多發(fā)性硬化等神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)病過程中發(fā)揮著重要作用。為了給此類疾病提供更好的治療方案,南京醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院藥物化學(xué)系設(shè)計并合成了一系列新型化合物,它們均由一個疏水環(huán)A和一個帶有羧基基團(tuán)的疏水環(huán)B構(gòu)成主要結(jié)構(gòu)。現(xiàn)已證實,該系列代表化合物ZL006在體內(nèi)外實驗中均有顯著的神經(jīng)保護(hù)作用。然而,這些化合物在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中是否具有抗炎作用尚不清楚。4-（（5-溴-3-氯-2-羥苯基）氨）-2-羥基苯甲酸（簡稱LX007）,是ZL006系列化合物中的一種。在本研究中,我們探究LX007能否減輕小膠質(zhì)細(xì)胞激活所介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)及其可能的機制。方法:本研究中,我們采用脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）刺激小鼠原代小膠質(zhì)細(xì)胞的炎癥模型探究LX007的抗炎作用。運用實時定量PCR（real-time PCR,rt-PCR）、蛋白印跡（western blot,WB）及酶聯(lián)免疫吸附測定（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）等方法檢測促炎介質(zhì)的表達(dá)水平。同時,我們... 

【文章來源】：南京醫(yī)科大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２：?ＬＸ００７對原代小膠質(zhì)細(xì)胞活力的影響

用ＬＸ００７Ｃ１０，２０和３０?ｎＭ）預(yù)處理原代小膠質(zhì)細(xì)胞１小時，再以ＬＰＳ（０．１?ｆｉｇ／ｍｌ）??孵育２４小時后使用ＥＬＩＳＡ試劑盒檢測ＰＧＥ２的含量。ＬＰＳ刺激導(dǎo)致了?ＰＧＥ２的??顯著增加，而ＬＸ００７能夠減少ＰＧＥ２的產(chǎn)生（圖４Ａ）。由于ＰＧＥ２是由ＣＯＸ－２??產(chǎn)生的，我們進(jìn)一步探宄了原代小膠質(zhì)細(xì)胞中ＬＸ００７對ＬＰＳ刺激后ＣＯＸ－２表??達(dá)的影響。研究結(jié)果顯示，ＬＸ００７明顯的抑制了?ＣＯＸ－２的ｍＲＮＡ?（圖４Ｂ）與??蛋白水平的表達(dá)（圖４Ｃ－Ｄ）。因此，ＬＸ００７可通過抑制ＣＯＸ－２的表達(dá)降低ＰＧＥ２??的產(chǎn)生。??第２２頁??

中ＩＬ－ｌｐ、ＩＬ－６、ＴＮＦ－ａ的ｍＲＮＡ表達(dá)水平，結(jié)果表明，ＬＰＳ?（０．１?ｎｇ／ｍｌ）刺激??６小時后，這些促炎因子表達(dá)量顯著增加，加入不同濃度ＬＸ００７（?１０，?２０和３０?ｐＭ）??處理組的促炎因子的ｍＲＮＡ水平明顯降低（圖５Ａ－Ｃ）。隨后，我們運用蛋白??印跡技術(shù)檢測ＩＬ－１［３、ＩＬ－６、ＴＮＦ－ａ蛋白水平的表達(dá)情況，結(jié)果表明，在ＬＰＳ?（０．１??ｐｇ／ｍｌ）朿丨Ｊ激２４小時后的原代小膠質(zhì)細(xì)胞中ＩＬ－１（３、ＩＬ－６、ＴＮＦ－ａ表達(dá)明顯升高，??ＬＸ００７可明顯降低促炎因子的表達(dá)，并呈劑量依賴性（圖５Ｄ－Ｇ）。因此，在原??代小膠質(zhì)細(xì)胞中，ＬＸ００７對ＬＰＳ誘導(dǎo)的炎癥因子的表達(dá)有潛在的抑制作用。??Ｗ?ｉｉ－?Ｈ?Ｉ＊．．．．?Ｈ?｜（？??Ｐ：Ｌｉｌｉｉ?ｐ：Ｌ１ｍ??＋?＊＊?令令今?ＬＸ？０７?〇〇〇?屮辦?０?爺屮?ＬＸＯＯＴ?（＾１）?口?＾?辦奪＋?ＵＯＯ？?〇Ｍ）??ＬＰＳ?ＬＷ?（ｌＯＯｎｇ／ｍｌ）?｛ｌＯＯｎ＾ｎｒｒｉ）??Ｄ?Ｅｃ?Ｇｇ??ｔＰ￥?（ｉＱｔｅ＞ａｆｍｒ）?Ｉ?Ｊ?Ｉ??Ｕ（００７（ｐＭ）?Ｃｏｎ?３０?＂〇一＂＇１０￣￣２０￣￣Ｍ＊?ｇ?１５１?｜?，－Ｓ＊｜?｜?１－５＇??隊．，霣「—?一灣?一?一｜?８？?＾?＾?｜｜?“?ｆ?｜?？？??ｆｃｌａＪＩｌｉ??５?ＬＭ?（１００＾０?ＬＰＳ｛１ＣＯ？＾／ｍｌ）?！?一??圖５：?ＬＸ００７抑制ＬＰＳ處理小膠質(zhì)細(xì)胞的ＩＬ－ｌｐ、ＩＬ－６和ＴＮＦ－ａ表達(dá)水平。（Ａ－Ｃ）??不同濃度的ＬＸ００７?（１０


本文編號：3213820