本文關(guān)鍵詞：AMPK激動劑對神經(jīng)病理性疼痛小鼠治療作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：神經(jīng)病理性疼痛(neuropathic pain,NP)是由神經(jīng)系統(tǒng)損傷所引起的一種極難治療的慢性狀態(tài),其機(jī)制復(fù)雜,常規(guī)鎮(zhèn)痛藥物無明顯療效。其特征主要表現(xiàn)為痛覺超敏、痛覺異常以及自發(fā)性疼痛。脊髓為疼痛傳導(dǎo)的初級中樞,本文主要研究在脊髓水平與神經(jīng)病理性疼痛相關(guān)蛋白的變化,從而提出治療神經(jīng)病理性疼痛的新方法。AMPK(AMP-Activated Protein Kinase)一磷酸腺苷活化蛋白激酶,是調(diào)控能量代謝的重要內(nèi)源性激酶。這是疼痛領(lǐng)域發(fā)現(xiàn)的在藥理學(xué)上唯一一個通過激動劑起作用的激酶。目前認(rèn)為AMPK激動劑可緩解外周神經(jīng)損傷、調(diào)節(jié)切口誘導(dǎo)的疼痛可塑性以及阻斷手術(shù)后慢性疼痛的發(fā)展。目的⑴建立神經(jīng)病理性疼痛小鼠模型,為研究神經(jīng)病理性疼痛提供一個良好的實驗基礎(chǔ)。⑵觀察二甲雙胍以及AICAR這兩種AMPK激動劑對神經(jīng)病理性疼痛小鼠是否有治療作用,從而為使用二甲雙胍治療臨床神經(jīng)病理性疼痛病人提供科學(xué)依據(jù)。⑶觀察經(jīng)AMPK激動劑治療后的神經(jīng)病理性疼痛小鼠脊髓及患側(cè)坐骨神經(jīng)中AMPKα1和AMPKα2與治療前相比有沒有變化,并推測在治療神經(jīng)病理性疼痛小鼠中起主要作用的AMPKα亞型。⑷進(jìn)一步觀察AMPK激動劑治療后小鼠脊髓及患側(cè)坐骨神經(jīng)中P-AMPKα與治療前相比有無變化,以探討AMPK的激活對治療神經(jīng)病理性疼痛小鼠的作用。方法⑴用成年雄性BALB/c小鼠建立SNI神經(jīng)病理性疼痛模型,即結(jié)扎并切斷左側(cè)坐骨神經(jīng)的分支脛神經(jīng)和腓總神經(jīng),保留腓腸神經(jīng)。假手術(shù)組除不結(jié)扎神經(jīng)外,其余同手術(shù)組。于術(shù)前及術(shù)后用von Frey纖毛測定小鼠左足機(jī)械痛閾,推算50%機(jī)械縮足閾值(50%MWT),凡術(shù)后7天50%MWT≥1.0 g,即認(rèn)定建模失敗,排除在實驗之外。⑵腹腔注射二甲雙胍或鞘內(nèi)注射AICAR治療神經(jīng)病理性疼痛小鼠。⑶小鼠心臟灌注后,分別提取L4-L6段脊髓及患側(cè)坐骨神經(jīng)標(biāo)本,提取標(biāo)本中的RNA,用RT-qPCR測不同分組小鼠脊髓及患側(cè)坐骨神經(jīng)中AMPKα1和AMPKα2的mRNA表達(dá)量。⑷小鼠心臟灌注后,取L4-L6段脊髓及患側(cè)坐骨神經(jīng),提取脊髓及坐骨神經(jīng)中的蛋白,用western-blot方法測定蛋白中P-AMPKα和AMPKα蛋白的表達(dá)量在不同分組小鼠中的變化。結(jié)果⑴SNI模型小鼠術(shù)后手術(shù)側(cè)足可見五趾并攏、足輕度外翻并產(chǎn)生自發(fā)性疼痛,存在痛覺過敏。SNI模型小鼠術(shù)后3天,手術(shù)側(cè)足機(jī)械痛閾明顯下降,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),證明神經(jīng)病理性疼痛模型建立成功;至術(shù)后12天,機(jī)械痛閾下降達(dá)到峰值,持續(xù)至術(shù)后21天。⑵用二甲雙胍和AICAR治療后的神經(jīng)病理性疼痛小鼠手術(shù)側(cè)機(jī)械痛閾相比于給藥前明顯升高(p0.05),證明二甲雙胍和AICAR對SNI小鼠產(chǎn)生的痛敏有治療作用。⑶由RT-qPCR檢測得知各組小鼠之間脊髓和患側(cè)坐骨神經(jīng)中AMPKα1和AMPKα2的表達(dá)量變化無統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05),但AMPKα2表達(dá)量多于AMPKα1(p0.05)。⑷由western-blot結(jié)果得知,與正常小鼠相比,SNI模型小鼠脊髓和患側(cè)坐骨神經(jīng)中P-AMPKα無變化;給藥治療后P-AMPKα表達(dá)量明顯上升,且隨著給藥時間的延長,表達(dá)量也呈增長趨勢,而各組小鼠脊髓和患側(cè)坐骨神經(jīng)中總AMPKα均無變化�？赏茰yAMPK激動劑對神經(jīng)病理性疼痛小鼠的治療作用是通過激活A(yù)MPK來實現(xiàn)的。
【關(guān)鍵詞】：神經(jīng)病理性疼痛 AMPK 二甲雙胍 AICAR
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R741
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-15
• 第一章 緒論15-21
• 1.1 疼痛概述15-17
• 1.1.1 疼痛的定義15
• 1.1.2 疼痛產(chǎn)生的解剖生理基礎(chǔ)15-16
• 1.1.3 疼痛的分類16-17
• 1.2 神經(jīng)病理性疼痛概述17-18
• 1.2.1 神經(jīng)病理性疼痛的定義17
• 1.2.2 神經(jīng)病理性疼痛的分類17-18
• 1.2.3 神經(jīng)病理性疼痛的產(chǎn)生機(jī)制18
• 1.2.4 神經(jīng)病理性疼痛現(xiàn)階段主要的治療方法18
• 1.3 AMPK的概述18-19
• 1.4 研究內(nèi)容和技術(shù)路線19-21
• 1.4.1 研究內(nèi)容19
• 1.4.2 技術(shù)路線19-21
• 第二章 建立小鼠神經(jīng)病理性疼痛模型21-31
• 2.1 實驗材料21-22
• 2.1.1 實驗試劑21
• 2.1.2 實驗儀器設(shè)備21-22
• 2.1.3 實驗所用動物22
• 2.1.4 實驗所用溶液配制22
• 2.2 實驗方法22-26
• 2.2.1 SNI神經(jīng)病理性疼痛模型制備步驟22-24
• 2.2.2 小鼠模型制備后行為學(xué)觀察24
• 2.2.3 行為學(xué)測試方式24-25
• 2.2.4 50%縮足閾值的計算25
• 2.2.5 排除標(biāo)準(zhǔn)25-26
• 2.3 統(tǒng)計方法26
• 2.4 結(jié)果26-29
• 2.4.1 小鼠術(shù)后觀察26-27
• 2.4.2 機(jī)械痛閾測量結(jié)果27-29
• 2.5 討論29-31
• 第三章 AMPK激動劑對NP小鼠的治療作用31-39
• 3.1 實驗材料31-32
• 3.1.1 實驗試劑31
• 3.1.2 實驗儀器設(shè)備31
• 3.1.3 實驗所用動物31
• 3.1.4 實驗所用溶液配制31-32
• 3.2 實驗方法32-33
• 3.2.1 治療方法32
• 3.2.2 治療后觀察及測試方法32-33
• 3.2.3 排除標(biāo)準(zhǔn)33
• 3.3 統(tǒng)計方法33
• 3.4 實驗結(jié)果33-37
• 3.4.1 小鼠給藥后觀察33-34
• 3.4.2 機(jī)械痛閾測試結(jié)果34-37
• 3.5 討論37-39
• 第四章 AMPK激動劑治療NP小鼠作用機(jī)制的研究39-53
• 4.1 實驗材料39-42
• 4.1.1 實驗試劑39-40
• 4.1.2 實驗儀器40-41
• 4.1.3 實驗對象41
• 4.1.4 實驗所用試劑配制41-42
• 4.2 實驗方法42-44
• 4.2.1 實驗分組42
• 4.2.2 標(biāo)本收集42
• 4.2.3 RT-qPCR檢測AMPK的表達(dá)42-43
• 4.2.4 Western-blot檢測脊髓和神經(jīng)中AMPK和P-AMPK的表達(dá)43-44
• 4.3 統(tǒng)計方法44
• 4.4 實驗結(jié)果44-51
• 4.5 討論51-53
• 第五章 總結(jié)53-55
• 5.1 主要結(jié)論53
• 5.2 主要創(chuàng)新點53-54
• 5.3 不足和展望54-55
• 參考文獻(xiàn)55-61
• 綜述61-71
• 參考文獻(xiàn)66-71
• 致謝71-72
• 碩士期間發(fā)表文章72-73
• 附錄73-75

【相似文獻(xiàn)】

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