目的探討腦缺血預(yù)處理對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的病理生理影響及產(chǎn)生影響的機(jī)制,并利用基因芯片技術(shù)篩選在此過程中腦組織海馬區(qū)差異表達(dá)的微小RNA（microRNA）,對(duì)表達(dá)差異顯著的基因進(jìn)行PCR結(jié)果驗(yàn)證,從基因組學(xué)層面解釋腦缺血預(yù)處理對(duì)缺血再灌注損傷干預(yù)作用機(jī)制。方法本實(shí)驗(yàn)經(jīng)評(píng)估選用雄性SD大鼠作為研究對(duì)象,將大鼠隨機(jī)分為3組,分別為腦缺血再灌注組（I/R組）、缺血預(yù)處理組（CIP組）和假手術(shù)組（Sham組）,每組24只,共72只。I/R組:采用Zea-Longa（改良）法缺血阻塞大鼠右側(cè)大腦中動(dòng)脈,制備大鼠局灶性腦缺血再灌注模型,予以阻斷缺血2h后恢復(fù)灌注1d;CIP組:選用大腦中動(dòng)脈二次線栓法制備缺血預(yù)處理模型,線栓予以短暫阻斷大鼠右側(cè)大腦中動(dòng)脈10min,再灌注1d后,再次阻斷血流,缺血2h,復(fù)灌1d;Sham組:空白對(duì)照組不予特殊處理,僅分離SD大鼠頸總動(dòng)脈,不栓塞。術(shù)后大鼠清醒后,按照Zea-Longa評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)各組SD大鼠進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分;選取符合入組標(biāo)準(zhǔn)及評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)的SD大鼠,各組選取缺血復(fù)灌1d的8只SD大鼠,麻醉后手術(shù)取腦,并置入腦模具制備腦切片,采用TTC（2,3... 

【文章來源】： 陳靜君 華北理工大學(xué)

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

大鼠編碼順序及位置

利插入線栓；（4）注意盡量避免損傷在頸內(nèi)頸外分叉下的交感神經(jīng)節(jié)；（5）血管入顱骨時(shí)有一個(gè)狹窄或角度，插入線栓時(shí)要手法輕柔并且遇阻力即停止，忌用力過猛損傷血管，避免插入過深刺破大腦中動(dòng)脈；（6）線栓勿在血管內(nèi)反復(fù)進(jìn)退，否則易造成蛛網(wǎng)膜下腔出血，導(dǎo)致造模成功的假象；（7）插入線栓速度盡量快，避免時(shí)間長了血管內(nèi)血栓形成，調(diào)整尼龍線栓插入深度時(shí)，要以毫米為單位進(jìn)行調(diào)整，避免損傷血管；（8）注意術(shù)后保暖，每日注射慶大霉素針予以抗感染治療，保障實(shí)驗(yàn)大鼠的存活率。3）入組標(biāo)準(zhǔn)及評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)各組大鼠缺血再灌注 2h 手術(shù)清醒后，采用雙盲法參照 Longa 6 級(jí)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分：無神經(jīng)功能缺損癥狀為 0 分；提尾時(shí)左前肢不能伸直為 1 分；向左側(cè)轉(zhuǎn)圈、追尾現(xiàn)象為 2 分；打滾、向左側(cè)傾倒為 3 分；出現(xiàn)意識(shí)障礙或肢體偏癱無法行走為 4 分；未蘇醒或死亡為 5 分；評(píng)分值 1~3 分者入組，造模過程中大鼠出血過多、3h 未能蘇醒、線栓插入過深導(dǎo)致蛛網(wǎng)膜下腔出血、Longa 評(píng)分 0 分、5 分等均剔除，如圖 2。

圖 3 對(duì)照組 SD 大鼠腦組織圖例Fig. 3 examples of brain tissue of SD rats in control group因芯片篩選差異表達(dá)的 microRNAs microRNAs 測(cè)序等實(shí)驗(yàn)具體操作由上海生物工程有限公司協(xié)助完組織總RNA提取和質(zhì)檢機(jī)選取Sham組、I/R組及CIP組各8個(gè)樣本組織標(biāo)本（冰凍腦海馬樣本的總RNA我們采用Trizol法，并采用甲醛變性凝膠電泳（其完整性，其過程主要包括：組織勻漿（液氮中將海馬組織研磨應(yīng)用試劑為Trizol 試劑（Invitrogen公司）、RNA分離（主要應(yīng)、氯仿，離心轉(zhuǎn)速設(shè)定為12000 r/min，提取上清液）、RNA沉淀異丙醇液（北京博奧生物公司），離心轉(zhuǎn)速設(shè)定為12000 r/min要應(yīng)用試劑為預(yù)冷的75％乙醇，離心轉(zhuǎn)速7500 r/min離心5 min，、RNA溶解（去除上清液，在55℃~60℃的溫箱中孵育，提取總

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號(hào)：3112493