[目的]復制體內(nèi)新生大鼠缺血缺氧性腦損傷（HIBD）模型與體外脂多糖（LPS）誘導的BV-2小膠質(zhì)細胞激活模型,研究血管緊張素系統(tǒng)（ACE、AT1、AT2）、NADPH氧化酶2（NOX2）和沉默信息調(diào)節(jié)蛋白3（SirT3）在HIBD大鼠胼胝體區(qū)及LPS激活的小膠質(zhì)細胞中的表達以及天麻素干預對AngⅡ-NOX2/SirT3信號通路的影響,從細胞、分子和蛋白層面探討天麻素對激活小膠質(zhì)細胞的抑制作用及信號機制。[方法]將新生1d的SD大鼠頸總動脈結(jié)扎后放入缺氧箱（8%02,92%N2）2h,復制HIBD模型,新生大鼠隨機分為對照組、HIBD組和HIBD+天麻素干預組（100 mg/kg）。將體外培養(yǎng)的BV-2小膠質(zhì)細胞隨機分為對照組、LPS（1mg/L）組、不同濃度的天麻素（50 mg/L和100 mg/L）+LPS處理組,LPS+阿齊沙坦（10 μM）組和天麻素（50 mg/L）+LPS+阿齊沙坦共同處理組和陽性對照組。采用MTS法檢測天麻素對BV-2小膠質(zhì)細胞活力的影響。采用免疫熒光雙標染色、蛋白質(zhì)印跡分析（Western Blot）方法檢測體內(nèi)、外激活的小膠質(zhì)細胞中血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（A... 

【文章來源】：昆明醫(yī)科大學云南省

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２．?ＢＶ－２小膠質(zhì)細胞活力檢測：０－１?ｍｇ／ｍｌ濃度的天麻素，培養(yǎng)４?ｈ未見明顯的??亡

表５各組ＢＶ－２小膠質(zhì)細胞ｉＮＯＳ和ＴＮＦ－ａ光密度值變化（Ｚ?土?ｓ?）??Ｔａｂｌｅ?５?Ｔｈｅ?ｏｐｔｉｃａｌ?ｄｅｎｓｉｔｙ?ｏｆ?ｉＮＯＳ?ａｎｄ?ＴＮＦ－ａ?ｉｎ?ｅａｃｈ?ｇｒｏｕｐ?ｏｆ?ＢＶ－２?ｍｉｃｒｏｇｌｉａ??（Ｊ?±?■？）??組別?ｉＮＯＳ?ＴＮＦ－ａ??正常對照組?０．０５±０．０９?０．０１±０．０１??ＬＰＳ?組?０．９Ｕ０．０５＊?０．７６士０．０４＊??５０ｍｇ／Ｌ?天麻素組?０．６７±０．０６＃?０．５３士０．１０＃??ｌＯＯｍｇ／Ｌ?天麻素組?０．６５±０．０３＃?０．５６±０．０７＃??＊表示與正常對照組相比較有明顯差異，；？＜０．０５；?＃表示與ＬＰＳ組比較有明顯差??異，／？＜０．０５〇??＊Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ?ｃｏｍｐａｒｅｄ?ｗｉｔｈ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏｕｐ，／？＜０．０５；?＃Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ??ｃｏｍｐａｒｅｄ?ｗｉｔｈ?ＬＰＳ?ｇｒｏｕｐ，／？＜０．０５．??

實驗通過Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ與免疫熒光雙標染色共同檢測了正常對照組、ＬＰＳ組??與５０ｍｇ／Ｌ和１００ｍｇ／Ｌ兩個天麻素干預組的ＢＶ－２小膠質(zhì)細胞中ＡＣＥ、Ａ１與??ＮＯＸ２蛋白的表達水平（見表６，圖４、圖５、圖６）。免疫焚光雙標染色結(jié)果顯??示：在正常對照組中，小膠質(zhì)細胞（綠色）與ＡＣＥ、ＡＴ＾?ＮＯＸ２?（紅色）僅有??少量共表達；ＬＰＳ組的小膠質(zhì)細胞（綠色）與ＡＣＥ、ＡＴ＾?ＮＯＸ２?（紅色）共表??達較對照組明顯增強；在５〇１？§＾和１００ｍｇ／Ｌ兩個天麻素干預組，ＡＣＥ、ＡＴＶ??ＮＯＸ２?（紅色）熒光強度較ＬＰＳ組減弱，與小膠質(zhì)細胞（綠色）的共表達減少，??兩個天麻素組之間無明顯差異。Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ結(jié)果顯示：與正常對照組相比，ＬＰＳ??組中ＡＣＥ、八＾和ＮＯＸ２的ＯＤ值明顯增加（ｐ＜０．０５），而在兩個天麻素干預??組，ＡＣＥ、ＡＴ！和ＮＯＸ２的ＯＤ值相較于ＬＰＳ組有顯著的降低（／？＜０．０５）。兩??個天麻素干預組間無明顯差異。??表６各組ＢＶ－２小膠質(zhì)細胞ＡＣＥ、ＡＴ！和ＮＯＸ２光密度值變化（Ｚ?±?ｓ?）??Ｔａｂｌｅ?６?Ｔｈｅ?ｏｐｔｉｃａｌ?ｄｅｎｓｉｔｙ?ｏｆ?ＡＣＥ


本文編號：3112328