本文關(guān)鍵詞：小膠質(zhì)細(xì)胞在EAE小鼠模型中的保護(hù)作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:本研究利用EAE小鼠模型探討小膠質(zhì)細(xì)胞的神經(jīng)保護(hù)作用。方法:1.本研究用髓鞘少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白35-55(MOG35-55)免疫C57BL/6小鼠誘導(dǎo)EAE模型,按照隨機(jī)分組的原則將72只小鼠分為正常對(duì)照組、EAE模型組、Tuftsin干預(yù)組三組;免疫后第1天用微量注射泵在EAE小鼠皮下緩慢注射500μM Tuftsin對(duì)小鼠進(jìn)行干預(yù)治療,正常對(duì)照組與EAE模型組用微量注射泵皮下注射生理鹽水。從免疫后第1天開(kāi)始采用國(guó)際公認(rèn)的神經(jīng)功能評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)各組小鼠進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分。2.分別在免疫后第7天、14天、21天及28天處死各組小鼠并取其腦和脊髓組織,行組織病理學(xué)LFB染色及MBP免疫組織化學(xué)染色,觀察并比較各組實(shí)驗(yàn)小鼠組織病理學(xué)改變的差異;通過(guò)RT-PCR方法檢測(cè)TNF-α、TGF-β、IL-10的含量;Western blot方法測(cè)定iba-1蛋白的含量。結(jié)果:1.各組小鼠神經(jīng)功能的變化:正常對(duì)照組小鼠均未發(fā)現(xiàn)神經(jīng)功能障礙;EAE模型組和Tuftsin干預(yù)組在免疫后第9天相繼發(fā)病,免疫后21天達(dá)到發(fā)病高峰期,EAE組較Tuftsin干預(yù)組小鼠臨床癥狀明顯嚴(yán)重;EAE模型組的平均神經(jīng)功能評(píng)分明顯高于Tuftsin干預(yù)組。2.各組實(shí)驗(yàn)小鼠脊髓組織病理改變:正常對(duì)照組在各時(shí)間點(diǎn)組織學(xué)染色結(jié)果顯示脊髓組織結(jié)構(gòu)均完整,髓鞘呈藍(lán)色,MBP陽(yáng)性為棕褐色,無(wú)髓鞘的脫失。EAE組小鼠在初始發(fā)病期可見(jiàn)到白質(zhì)區(qū)結(jié)構(gòu)疏松,髓鞘染色較淡,髓鞘斷裂、不連續(xù);在發(fā)病高峰期髓鞘脫失嚴(yán)重;在恢復(fù)期,可見(jiàn)少量髓鞘再生;而Tuftsin干預(yù)組小鼠脊髓組織髓鞘脫失程度低于EAE模型組。3.同一時(shí)間不同實(shí)驗(yàn)組各細(xì)胞因子的比較發(fā)現(xiàn):在免疫后第14天、21天、28天EAE模型組的IL-10和TGF-b的表達(dá)量低于Tuftsin干預(yù)組,而TNF-a的表達(dá)量卻高于Tuftsin干預(yù)組。比較同一實(shí)驗(yàn)組在不同時(shí)間點(diǎn)各細(xì)胞因子的變化:EAE模型組和Tuftsin干預(yù)組TNF-a、IL-10和TGF-b均隨著病程的發(fā)展表達(dá)量持續(xù)升高,EAE模型組TNF-a的表達(dá)量明顯高于Tuftsin干預(yù)組,而IL-10和TGF-b 的表達(dá)卻明顯低于Tuftsin干預(yù)組。4.實(shí)驗(yàn)小鼠在各時(shí)間點(diǎn)腦組織iba-1蛋白表達(dá)的變化:對(duì)照組有少量iba-1蛋白的表達(dá),在各時(shí)期無(wú)明顯變化。發(fā)病前期,EAE模型組和Tuftsin干預(yù)組iba-1蛋白的表達(dá)與正常對(duì)照組無(wú)差異。初始發(fā)病期,EAE模型組和Tuftsin干預(yù)組iba-1蛋白的表達(dá)亦顯著升高,但Tuftsin干預(yù)組iba-1蛋白的表達(dá)量高于EAE模型組。直至免疫后第21天及28天,EAE模型組和Tuftsin干預(yù)組iba-1蛋白的表達(dá)量持續(xù)顯著升高,且兩組相比Tuftsin干預(yù)組明顯高于EAE模型組。結(jié)論:1.Tuftsin干預(yù)組小鼠發(fā)病率低,起病時(shí)間延長(zhǎng),神經(jīng)功能損害嚴(yán)重程度輕,且恢復(fù)較快。2.Tuftsin干預(yù)組小鼠脊髓組織的髓鞘脫失程度輕。3.Tuftsin干預(yù)組小鼠腦組織中的促炎因子水平低,抗炎因子水平高。4.Tufusin能夠促進(jìn)小膠質(zhì)細(xì)胞的激活及吞噬活性。5.小膠質(zhì)細(xì)胞在Tuftsin的刺激基礎(chǔ)上激活,能夠從促炎性表型M1轉(zhuǎn)化為抗炎性表型M2,從而發(fā)揮抗炎性作用,在EAE中發(fā)揮保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：多發(fā)性硬化 實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎 小膠質(zhì)細(xì)胞 促吞噬肽 保護(hù)作用
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R-332;R744.51
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語(yǔ)/符號(hào)說(shuō)明10-11
• 前言11-13
• 研究現(xiàn)狀、成果11-12
• 研究目的、方法12-13
• 1 材料和方法13-21
• 1.1 主要材料和試劑13-14
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物13
• 1.1.2 制備EAE模型所需抗原及試劑13
• 1.1.3 主要試劑及來(lái)源13
• 1.1.4 主要儀器及來(lái)源13-14
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法14-20
• 1.2.1 動(dòng)物模型制備14
• 1.2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物神經(jīng)功能評(píng)分14-15
• 1.2.3 組織病理學(xué)染色15-17
• 1.2.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-PCR）17-19
• 1.2.5 Western blot檢測(cè)19-20
• 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理20-21
• 2 結(jié)果21-32
• 2.1 各組實(shí)驗(yàn)小鼠發(fā)病情況21-24
• 2.1.1 發(fā)病率的比較22
• 2.1.2 平均潛伏期（起病時(shí)間）的比較22
• 2.1.3 平均神經(jīng)功能評(píng)分比較22-24
• 2.2 各組實(shí)驗(yàn)小鼠脊髓組織病理學(xué)結(jié)果24-29
• 2.3 各組實(shí)驗(yàn)小鼠在不同時(shí)期各細(xì)胞因子表達(dá)量的比較29-31
• 2.4 Tuftsin對(duì)EAE模型中小膠質(zhì)細(xì)胞的影響31-32
• 3 討論32-44
• 3.1 多發(fā)性硬化和EAE模型的建立32-33
• 3.2 小膠質(zhì)細(xì)胞的特點(diǎn)及在中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘疾病中的作用33-44
• 3.2.1 小膠質(zhì)細(xì)胞的來(lái)源及形態(tài)33-34
• 3.2.2 小膠質(zhì)細(xì)胞的激活34-35
• 3.2.3 小膠質(zhì)細(xì)胞的分化35-36
• 3.2.4 小膠質(zhì)細(xì)胞的功能36-44
• 4 結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-53
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明53-54
• 綜述 小膠質(zhì)細(xì)胞在多發(fā)性硬化中的保護(hù)作用54-65
• 綜述參考文獻(xiàn)59-65
• 致謝65-66
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷66

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