發(fā)布時(shí)間：2017-04-14 05:19

  本文關(guān)鍵詞：AQP9與MCTs在腦缺血后的表達(dá)變化及其在乳酸轉(zhuǎn)運(yùn)中的作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分 急性腦缺血后AQP9與MCTs的表達(dá)變化目的觀察AQP9與MCTs在急性腦缺血后的表達(dá)變化,探討其在腦缺血中的作用。方法成年健康雄性SD (Sprague-Dawley)大鼠隨機(jī)分為缺血組和假手術(shù)對(duì)照組,用改良永久性大腦中動(dòng)脈栓塞法(pMCAO)制作腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ?假手術(shù)對(duì)照組除不插線栓外,其余操作與缺血組相同。每組分別在造模成功后1h、3h、6h、12h、24h取出大鼠腦組織,分別運(yùn)用TTC染色評(píng)估梗塞面積,干濕重法計(jì)算腦組織含水量變化,免疫熒光(Immunofluorence)和免疫印跡(Western Blotting)檢測(cè)各組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)腦組織AQP9和MCTs的表達(dá)變化。結(jié)果與假手術(shù)對(duì)照組相比,腦缺血后,腦梗死面積和腦含水量明顯升高,并隨缺血時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸增加。免疫熒光和免疫印跡結(jié)果顯示,AQP9與MCTs在腦缺血后表達(dá)增加,且隨腦缺血時(shí)間的延長(zhǎng)而增加。MCAO后,AQP9的表達(dá)與腦含水量的變化呈顯著正相關(guān)(P0.05)。結(jié)論腦缺血后,伴隨腦水腫的加重,AQP9表達(dá)上調(diào),提示腦缺血后,AQP9表達(dá)上調(diào)是缺血性腦水腫形成的重要因素；AQP9與MCTs在腦缺血后星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元上的表達(dá)上調(diào),表明二者可能參與了星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元之間的乳酸轉(zhuǎn)運(yùn)。第二部分AQP9與MCTs在星形膠質(zhì)細(xì)胞缺血缺氧后的表達(dá)變化及其作用目的觀察AQP9與MCTs蛋白在星形膠質(zhì)細(xì)胞缺血缺氧后的表達(dá)變化,探討其在缺血缺氧后致細(xì)胞損傷中的意義。方法取出生后2天內(nèi)的SD大鼠大腦皮層培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞,采用GFAP免疫熒光染色對(duì)培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行鑒定。純化的星形膠質(zhì)細(xì)胞,一部分建立缺血缺氧損傷模型并隨機(jī)分為對(duì)照組、缺血缺氧組(干預(yù)時(shí)間為1 h、3 h、6 h)。另一部分加藥處理,隨機(jī)分為正常對(duì)照組、加藥組,加藥組分為：低劑量組(4-CIN:150umol/L),中劑量組(4-CIN:425umol/L)和高劑量組(4-CIN:900umol/L)。采用HE染色觀察各組細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化,LD試劑盒檢測(cè)培養(yǎng)液中乳酸含量,運(yùn)用免疫熒光染色及免疫印跡檢測(cè)各組細(xì)胞中AQP9、MCTs的表達(dá)情況。結(jié)果與對(duì)照組相比,缺血缺氧組細(xì)胞隨著缺血缺氧時(shí)間的延長(zhǎng),細(xì)胞核腫大,且部分細(xì)胞呈凝固性壞死；細(xì)胞培養(yǎng)液中LD含量增高,且與缺氧時(shí)間呈正相關(guān)(P0.05)。免疫熒光染色和免疫印跡結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比,星形膠質(zhì)細(xì)胞缺血缺氧組中AQP9、MCT1、MCT4表達(dá)增加,且隨缺血缺氧時(shí)間的延長(zhǎng)其表達(dá)逐漸增強(qiáng)(P0.05)。與對(duì)照組相比,加藥組細(xì)胞培養(yǎng)液中的LD含量均增高,AQP9表達(dá)上調(diào),而MCT1、4的表達(dá)下調(diào)(P0.05)。結(jié)論缺血缺氧后,星形膠質(zhì)細(xì)胞胞外乳酸濃度與AQP9、MCTs的表達(dá)呈正相關(guān),表明缺血缺氧后星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元損傷可能與細(xì)胞間的乳酸轉(zhuǎn)運(yùn)失調(diào)有關(guān)；而抑制MCTs后,胞外乳酸濃度增加且AQP9的蛋白水平表達(dá)增加,推測(cè)二者可能在星形膠質(zhì)細(xì)胞缺血缺氧后共同參與乳酸的轉(zhuǎn)運(yùn)。第三部分AOP9和MCT1、4在人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87缺血缺氧后的表達(dá)變化目的觀察神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87中MCT1、4與AQP9在缺血缺氧后的表達(dá)變化,探討其在神經(jīng)膠質(zhì)瘤乳酸轉(zhuǎn)運(yùn)中的作用及其臨床意義。方法常規(guī)培養(yǎng)U87細(xì)胞,隨機(jī)分為對(duì)照組和缺血缺氧組,缺血缺氧組干預(yù)1h、3h、6h。 MTT法檢測(cè)細(xì)胞的存活率,應(yīng)用免疫熒光和免疫印跡,檢測(cè)對(duì)照組和缺血缺氧組中AQP9和MCT1、4的表達(dá)變化。結(jié)果與對(duì)照組相比,缺血缺氧組U87細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變,細(xì)胞存活率下降,且與缺血缺氧時(shí)間呈負(fù)相關(guān)(P0.05)。免疫熒光和免疫印跡結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比,缺血缺氧組中AQP9和MCT1、4的表達(dá)均增高,并隨缺血缺氧時(shí)間增長(zhǎng)其表達(dá)逐漸增強(qiáng)(P0.05)。結(jié)論缺血缺氧后,U87細(xì)胞中AQP9和MCT1、4表達(dá)增強(qiáng),提示AQP9可能協(xié)同MCT參與神經(jīng)膠質(zhì)瘤微環(huán)境中乳酸的轉(zhuǎn)運(yùn),并與腫瘤細(xì)胞的增殖、存活相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：水通道蛋白9 單羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 腦缺血 單羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 水通道蛋白9 腦缺血 乳酸 單羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(MCT) 水通道蛋白9(AQP9) 膠質(zhì)瘤 U87 缺血缺氧
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R743.3
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對(duì)照6-7
• 中文摘要7-12
• 英文摘要12-18
• 第一部分 急性腦缺血后AQP9與MCTs的表達(dá)變化18-35
• 前言18
• 1 材料18-22
• 2 方法22-27
• 3 結(jié)果27
• 4 討論27-30
• 參考文獻(xiàn)30-32
• 附圖32-35
• 第二部分 AQP9與MCTs在星形膠質(zhì)細(xì)胞缺血缺氧后的表達(dá)變化及其作用35-51
• 前言35
• 1 材料35-37
• 2 方法37-42
• 3 結(jié)果42-43
• 4 討論43-45
• 參考文獻(xiàn)45-47
• 附圖47-51
• 第三部分 AQP9與MCT1、4在人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87缺血缺氧后的表達(dá)變化51-63
• 前言51
• 1 材料51-52
• 2 方法52-54
• 3 結(jié)果54-55
• 4 討論55-58
• 參考文獻(xiàn)58-61
• 附圖61-63
• 文獻(xiàn)綜述63-70
• 參考文獻(xiàn)67-70
• 致謝70-71
• 攻讀碩士期間發(fā)表的論文71

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 周仁蘭,謝鵬;大鼠腦缺血后~1H磁共振波譜分析的實(shí)驗(yàn)研究[J];重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2005年02期

2 何小華,羅易寧,李文鑫;γ-氨基丁酸和腦缺血[J];卒中與神經(jīng)疾病;2003年06期

3 喻斌,沈祥春,方泰惠,張松;腦缺血的分子生物學(xué)研究及中藥的保護(hù)作用[J];中藥新藥與臨床藥理;2004年03期

4 李光偉,苗宏志,金莉,賈彥;細(xì)胞骨架與腦缺血[J];齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2004年09期

5 薛慎伍,張建中,李云峰,張兆巖,王雪青;腦缺血大鼠受累腦區(qū)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β_1陽性表達(dá)的意義[J];中國老年學(xué)雜志;2005年08期

6 任秀君;馬惠芳;王曉寧;洪銀珠;施昱丞;圖婭;;電針對(duì)高血脂合并腦缺血大鼠血脂及神經(jīng)生長(zhǎng)因子影響的實(shí)驗(yàn)研究[J];針刺研究;2007年01期

7 張穎;李樹清;陳靜;;樹銯腦缺血后海馬線粒體應(yīng)激與神經(jīng)元損傷機(jī)制研究[J];中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志;2007年02期

8 李艷偉;趙晉英;李琳;;腦缺血對(duì)大鼠皮層、海馬鐵含量及膜鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1的影響[J];山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2007年06期

9 李樂軍;田金洲;尹軍祥;時(shí)晶;張六通;陳玉靜;任映;宋崇順;楊金鐸;;不同腦缺血誘發(fā)血瘀證表征模型的研究[J];北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2007年12期

10 劉文君;向紹杰;杜佳林;李顯華;張宏;賈冬;;清空分散片對(duì)腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ捅Ｗo(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[J];遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2010年04期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 莫國煥;曾祥發(fā);;胰島素樣生長(zhǎng)因子-1與腦缺血[A];泛中醫(yī)論壇·思考中醫(yī)2006——經(jīng)典中醫(yī)的特色和優(yōu)勢(shì)論文集[C];2006年

2 萬海同;;腦缺血研究進(jìn)展[A];浙江省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)神經(jīng)內(nèi)科專業(yè)委員會(huì)第六次學(xué)術(shù)年會(huì)暨國家級(jí)繼續(xù)教育學(xué)習(xí)班資料匯編[C];2008年

3 邱永明;張寧;楊修;章衛(wèi)橋;繆亦峰;;誘導(dǎo)不同血壓對(duì)大鼠永久性腦缺血后神經(jīng)保護(hù)研究[A];中國醫(yī)師協(xié)會(huì)神經(jīng)外科醫(yī)師分會(huì)第四屆全國代表大會(huì)論文匯編[C];2009年

4 王曄;鄧宇斌;李燕;葉偉標(biāo);葉美紅;;綠色熒光蛋白標(biāo)記的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在腦缺血大鼠體內(nèi)遷移的實(shí)驗(yàn)研究[A];2008年中國病理生理學(xué)會(huì)第十一屆腫瘤和第十二屆免疫專業(yè)委員會(huì)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2008年

5 徐艷峰;朱華;劉穎;肖沖;馬春梅;秦川;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療食蟹猴腦缺血的組織病理學(xué)研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)病理學(xué)分會(huì)第十六次學(xué)術(shù)研討會(huì)、中國病理生理學(xué)會(huì)動(dòng)物病理生理專業(yè)委員會(huì)第十五次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2009年

6 孫麗華;王玲;張高小;潘國聘;張艷麗;白云龍;呂延杰;楊寶峰;;腦缺血致心律失常離子通道機(jī)制的研究[A];第九屆全國心血管藥理學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2007年

7 張川蕘;李樹清;;后適應(yīng)對(duì)樹

本文編號(hào)：305302