目的利用GeXP多重基因表達(dá)遺傳分析系統(tǒng),建立一種能夠同時(shí)檢測(cè)腦炎相關(guān)的8種蟲(chóng)媒病毒的多重逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（mRT-PCR）方法,并對(duì)此方法作出初步評(píng)價(jià)。方法以腦炎相關(guān)的8種蟲(chóng)媒病毒為研究對(duì)象,包括版納病毒（Banna virus,BAV）,乙型腦炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）,蜱傳腦炎病毒（Tick-borne encephalitis virus,TBEV）, Tahyna病毒（Tahyna virus,TAHV）,遼寧病毒（Liaoning virus,LNV）,科薩努爾森林病病毒（Kyasanur forest disease virus,KFDV）,辛德畢斯病毒（Sindbis virus,SINV）及云南環(huán)狀病毒（Yunnan orbivirus,YUOV）并加入小鼠腦脊髓炎病毒（Theiler’s Mouse Encephalomyelitis virus, TMEV）做為內(nèi)部對(duì)照。利用GeXP系統(tǒng)建立多重RT-PCR檢測(cè)方法,設(shè)計(jì)各病毒特異引物并進(jìn)行篩選,以病毒分離培養(yǎng)物和陽(yáng)性標(biāo)本來(lái)驗(yàn)證引物及多重反應(yīng)體系的特異性,根據(jù)PCR... 

【文章來(lái)源】：安徽理工大學(xué)安徽省

【文章頁(yè)數(shù)】：62 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
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注釋說(shuō)明清單
引言
1 研究背景
    1.1 GeXP系統(tǒng)的原理及應(yīng)用
    1.2 病毒性腦炎研究進(jìn)展
2 病毒性腦炎GeXP多重檢測(cè)體系的建立
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 病毒來(lái)源
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器耗材
    2.2 緩沖液及細(xì)菌培養(yǎng)基配置
        2.2.1 核酸電泳緩沖液
        2.2.2 細(xì)菌培養(yǎng)基（LB培養(yǎng)基）
    2.3 試驗(yàn)方法
        2.3.1 引物設(shè)計(jì)
        2.3.2 病毒樣品處理
            2.3.2.1 病毒核酸提取前準(zhǔn)備
            2.3.2.2 核酸提取
        2.3.3 單引物特異性驗(yàn)證
        2.3.4 構(gòu)建單克隆質(zhì)粒
            2.3.4.1 PCR產(chǎn)物純化
            2.3.4.2 連接
            2.3.4.3 轉(zhuǎn)化
        2.3.5 質(zhì)粒的提取及線(xiàn)性化
            2.3.5.1 質(zhì)粒提取
            2.3.5.2 提取質(zhì)粒線(xiàn)性化
        2.3.6 參考品的制備
            2.3.6.1 體外轉(zhuǎn)錄RNA的制備
            2.3.6.2 體外轉(zhuǎn)錄后去DNA模板
            2.3.6.3 體外轉(zhuǎn)錄后去鹽類(lèi)及核苷酸
        2.3.7 多重檢測(cè)體系的建立
            2.3.7.1 多重體系特異性驗(yàn)證
            2.3.7.2 多重體系多引物單模板靈敏度分析
            2.3.7.3 多重體系多引物多模板靈敏度分析
        2.3.8 GeXP多重體系驗(yàn)證
    2.4 試驗(yàn)結(jié)果
        2.4.1 引物設(shè)計(jì)
        2.4.2 單引物特異性驗(yàn)證
        2.4.3 質(zhì)粒的提取及線(xiàn)性化
        2.4.4 多重體系特異性驗(yàn)證
        2.4.5 多重體系多引物單模板靈敏度結(jié)果
        2.4.6 多重體系多引物單模板靈敏度結(jié)果
        2.4.7 多重體系驗(yàn)證結(jié)果
3 實(shí)驗(yàn)討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄A
后記或致謝
作者簡(jiǎn)介及讀研期間主要科研成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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