本文關(guān)鍵詞：Maspin在膠質(zhì)瘤中表達(dá)沉默的機(jī)制及功能研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分Maspin在膠質(zhì)瘤中表達(dá)沉默的機(jī)制研究目的:Maspin是絲氨酸蛋白酶抑制劑超家族中的一員,在腫瘤中調(diào)控細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移及腫瘤血管生成等,與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切,但其在膠質(zhì)瘤中沉默的機(jī)制研究尚少。本實(shí)驗(yàn)主要探索maspin在膠質(zhì)瘤中表達(dá)沉默的可能機(jī)制。方法:采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)及蛋白質(zhì)印跡(Western Blot)兩種方法檢測(cè)膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U87、U251和U343細(xì)胞中maspin基因的m RNA和蛋白表達(dá)情況;EMBOSS Cpgplot用于分析maspin基因啟動(dòng)子區(qū)是否存在Cp G島;使用去甲基化藥物5-Aza-DC處理U87和U251細(xì)胞后,運(yùn)用RT-PCR檢測(cè)藥物干預(yù)后maspin基因的m RNA表達(dá)情況;甲基化特異性PCR(Methylation-Specific PCR,MSP)檢測(cè)U87和U251細(xì)胞中maspin基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài);亞硫酸鹽測(cè)序檢測(cè)U87和U251細(xì)胞,確定maspin基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化Cp G位點(diǎn)。結(jié)果:在膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U87、U251和U343細(xì)胞中maspin基因表達(dá)沉默;EMBOSS Cpgplot顯示maspin基因啟動(dòng)子區(qū)存在1個(gè)Cp G島;使用5-Aza-DC干預(yù)后maspin基因恢復(fù)轉(zhuǎn)錄;進(jìn)一步使用MSP檢測(cè)發(fā)現(xiàn)U87和U251細(xì)胞啟動(dòng)子區(qū)處于甲基化狀態(tài);亞硫酸鹽測(cè)序結(jié)果顯示測(cè)序PCR產(chǎn)物中預(yù)期Cp G甲基化位點(diǎn)均發(fā)生甲基化。結(jié)論:在膠質(zhì)瘤中,maspin的表達(dá)抑制與其啟動(dòng)子Cp G島甲基化相關(guān);5-Aza-DC能恢復(fù)maspin在膠質(zhì)瘤細(xì)系U87和U251細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄。第二部分Maspin對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U87作用的體外實(shí)驗(yàn)?zāi)康?上一部分中已經(jīng)證明maspin在膠質(zhì)瘤中表達(dá)沉默與其啟動(dòng)子甲基化相關(guān)。同時(shí)maspin在大多數(shù)腫瘤中具有抑制腫瘤細(xì)胞侵襲與轉(zhuǎn)移、凋亡以及腫瘤血管的形成等功能,然而maspin在膠質(zhì)瘤中的功能未見(jiàn)報(bào)道。在本部分,通過(guò)在人膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U87細(xì)胞中構(gòu)建穩(wěn)定過(guò)表達(dá)maspin基因的細(xì)胞株,在體外實(shí)驗(yàn)中觀察maspin對(duì)U87細(xì)胞的生物學(xué)影響。方法:使用攜帶空病毒載體和攜帶maspin基因的慢病毒載體轉(zhuǎn)染膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U87,篩選獲得穩(wěn)定表達(dá)靶基因的膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87-NC和U87-maspin細(xì)胞,應(yīng)用RT-PCR和Western Blot檢測(cè)maspin的轉(zhuǎn)染效果;利用Transwell小室及預(yù)鋪Matrigel基質(zhì)膠的Transwell小室檢測(cè)maspin對(duì)U87細(xì)胞遷移、侵襲能力的影響;運(yùn)用流式細(xì)胞儀技術(shù)分析maspin對(duì)U87細(xì)胞周期的影響;CCK-8方法檢測(cè)maspin對(duì)U87細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果:成功構(gòu)建過(guò)表達(dá)maspin基因細(xì)胞株U87-maspin,RT-PCR和Western Blot均顯示轉(zhuǎn)染過(guò)表達(dá)maspin慢病毒載體后有效的改變了U87細(xì)胞內(nèi)maspin的轉(zhuǎn)錄、表達(dá)水平;Maspin過(guò)表達(dá)后,U87細(xì)胞增殖能力減弱,細(xì)胞周期停滯于S期,但U87細(xì)胞的遷移和侵襲無(wú)明顯影響。結(jié)論:Maspin能顯著抑制U87細(xì)胞增殖,使U87細(xì)胞停滯在S期,表明maspin在膠質(zhì)瘤中可能具有抑癌基因特性。
【關(guān)鍵詞】：Maspin CpG島 啟動(dòng)子甲基化 Maspin 增殖 細(xì)胞周期
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R739.41
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 序言9-14
• 參考文獻(xiàn)11-14
• 第一部分 MASPIN在膠質(zhì)瘤中表達(dá)沉默的機(jī)制研究14-32
• 引言14
• 材料和方法14-25
• 結(jié)果25-28
• 討論28-30
• 參考文獻(xiàn)30-32
• 第二部分 MASPIN對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U87 作用體外實(shí)驗(yàn)32-45
• 引言32
• 材料和方法32-37
• 結(jié)果37-40
• 討論40-42
• 參考文獻(xiàn)42-45
• 結(jié)論45-46
• 綜述 MASPIN基因在腫瘤中的研究進(jìn)展46-56
• 1．MASPIN基因結(jié)構(gòu)和定位46-47
• 2．MASPIN與腫瘤抑制47-48
• 3．MASPIN的表達(dá)與腫瘤的臨床預(yù)后48-51
• 結(jié)語(yǔ)51
• 參考文獻(xiàn)51-56
• 研究生期間發(fā)表文章及相關(guān)科研成果56-57
• 中英文縮寫(xiě)詞表57-58
• 致謝58-59

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本文編號(hào)：304325