本文關(guān)鍵詞：Maspin在膠質(zhì)瘤中表達沉默的機制及功能研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分Maspin在膠質(zhì)瘤中表達沉默的機制研究目的:Maspin是絲氨酸蛋白酶抑制劑超家族中的一員,在腫瘤中調(diào)控細胞侵襲、轉(zhuǎn)移及腫瘤血管生成等,與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切,但其在膠質(zhì)瘤中沉默的機制研究尚少。本實驗主要探索maspin在膠質(zhì)瘤中表達沉默的可能機制。方法:采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)及蛋白質(zhì)印跡(Western Blot)兩種方法檢測膠質(zhì)瘤細胞株U87、U251和U343細胞中maspin基因的m RNA和蛋白表達情況;EMBOSS Cpgplot用于分析maspin基因啟動子區(qū)是否存在Cp G島;使用去甲基化藥物5-Aza-DC處理U87和U251細胞后,運用RT-PCR檢測藥物干預(yù)后maspin基因的m RNA表達情況;甲基化特異性PCR(Methylation-Specific PCR,MSP)檢測U87和U251細胞中maspin基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài);亞硫酸鹽測序檢測U87和U251細胞,確定maspin基因啟動子區(qū)甲基化Cp G位點。結(jié)果:在膠質(zhì)瘤細胞株U87、U251和U343細胞中maspin基因表達沉默;EMBOSS Cpgplot顯示maspin基因啟動子區(qū)存在1個Cp G島;使用5-Aza-DC干預(yù)后maspin基因恢復(fù)轉(zhuǎn)錄;進一步使用MSP檢測發(fā)現(xiàn)U87和U251細胞啟動子區(qū)處于甲基化狀態(tài);亞硫酸鹽測序結(jié)果顯示測序PCR產(chǎn)物中預(yù)期Cp G甲基化位點均發(fā)生甲基化。結(jié)論:在膠質(zhì)瘤中,maspin的表達抑制與其啟動子Cp G島甲基化相關(guān);5-Aza-DC能恢復(fù)maspin在膠質(zhì)瘤細系U87和U251細胞中的轉(zhuǎn)錄。第二部分Maspin對膠質(zhì)瘤細胞株U87作用的體外實驗?zāi)康?上一部分中已經(jīng)證明maspin在膠質(zhì)瘤中表達沉默與其啟動子甲基化相關(guān)。同時maspin在大多數(shù)腫瘤中具有抑制腫瘤細胞侵襲與轉(zhuǎn)移、凋亡以及腫瘤血管的形成等功能,然而maspin在膠質(zhì)瘤中的功能未見報道。在本部分,通過在人膠質(zhì)瘤細胞株U87細胞中構(gòu)建穩(wěn)定過表達maspin基因的細胞株,在體外實驗中觀察maspin對U87細胞的生物學(xué)影響。方法:使用攜帶空病毒載體和攜帶maspin基因的慢病毒載體轉(zhuǎn)染膠質(zhì)瘤細胞株U87,篩選獲得穩(wěn)定表達靶基因的膠質(zhì)瘤細胞U87-NC和U87-maspin細胞,應(yīng)用RT-PCR和Western Blot檢測maspin的轉(zhuǎn)染效果;利用Transwell小室及預(yù)鋪Matrigel基質(zhì)膠的Transwell小室檢測maspin對U87細胞遷移、侵襲能力的影響;運用流式細胞儀技術(shù)分析maspin對U87細胞周期的影響;CCK-8方法檢測maspin對U87細胞增殖的影響。結(jié)果:成功構(gòu)建過表達maspin基因細胞株U87-maspin,RT-PCR和Western Blot均顯示轉(zhuǎn)染過表達maspin慢病毒載體后有效的改變了U87細胞內(nèi)maspin的轉(zhuǎn)錄、表達水平;Maspin過表達后,U87細胞增殖能力減弱,細胞周期停滯于S期,但U87細胞的遷移和侵襲無明顯影響。結(jié)論:Maspin能顯著抑制U87細胞增殖,使U87細胞停滯在S期,表明maspin在膠質(zhì)瘤中可能具有抑癌基因特性。
【關(guān)鍵詞】：Maspin CpG島 啟動子甲基化 Maspin 增殖 細胞周期
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R739.41
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 序言9-14
• 參考文獻11-14
• 第一部分 MASPIN在膠質(zhì)瘤中表達沉默的機制研究14-32
• 引言14
• 材料和方法14-25
• 結(jié)果25-28
• 討論28-30
• 參考文獻30-32
• 第二部分 MASPIN對膠質(zhì)瘤細胞株U87 作用體外實驗32-45
• 引言32
• 材料和方法32-37
• 結(jié)果37-40
• 討論40-42
• 參考文獻42-45
• 結(jié)論45-46
• 綜述 MASPIN基因在腫瘤中的研究進展46-56
• 1．MASPIN基因結(jié)構(gòu)和定位46-47
• 2．MASPIN與腫瘤抑制47-48
• 3．MASPIN的表達與腫瘤的臨床預(yù)后48-51
• 結(jié)語51
• 參考文獻51-56
• 研究生期間發(fā)表文章及相關(guān)科研成果56-57
• 中英文縮寫詞表57-58
• 致謝58-59

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本文編號：304325