本文關鍵詞：FIP200在ATRA誘導NSCs自噬、分化和凋亡過程中表達的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:本課題通過采用從小到大不同濃度ATRA誘導培養(yǎng)小鼠NCSs,研究在此條件下細胞發(fā)生自噬、分化和凋亡過程當中FIP200蛋白和它的相互作用蛋白的表達水平改變,來初步證實維甲酸是通過影響FIP200的蛋白表達水平來對神經(jīng)干細胞不同生物過程進行調(diào)控的,同時研究自噬分別與分化和凋亡的關系,從而為進一步揭示維甲酸對神經(jīng)系統(tǒng)疾病的影響提供依據(jù)。方法:從孕14.5天C57BL/6J小鼠胎鼠中分離得到大腦組織進行提取細胞為NSCs,通過光學顯微鏡下觀察及分化后的免疫熒光染色鑒定。第三代神經(jīng)干細胞分別加入不同濃度大小的ATRA(0、0.1、0.5、1、5、10、15、20μM)誘導培養(yǎng)24h,吖啶橙(AO染色)計數(shù)自噬發(fā)生率,為檢測LC3-Ⅱ,用RT-PCR法和蛋白質(zhì)印跡法檢測FIP200和p53基因蛋白的表達水平,研究維甲酸對神經(jīng)干細胞FIP200和自噬水平變化的作用。加入較低濃度的ATRA(0、0.1、0.5、1、5μM)誘導7天,運用細胞免疫熒光法及蛋白質(zhì)印跡法檢測各組分化率,加入自噬抑制劑LY294002后,檢測1μM ATRA誘導NSCs的分化率變化,研究ATRA誘導NSCs分化與自噬的關系;以及蛋白質(zhì)印跡法檢測RB1表達水平。加入較高濃度的ATRA(5、10、15、20、40μM)誘導培養(yǎng)24h,運用流式細胞術檢測神經(jīng)干細胞的凋亡率,再次運用RT-PCR法和蛋白質(zhì)印跡法技術檢測此5組FIP200蛋白的表達水平,加入自噬抑制劑后比較凋亡率的變化,研究ATRA誘導NSCs凋亡與自噬的關系。結(jié)果:(1)胎鼠大腦組織中可以提取出NSCs,鏡下觀察呈圓球狀生長,細胞分化熒光鑒定結(jié)果得以再次證實。(2)不同濃度維甲酸誘導神經(jīng)干細胞,FIP200蛋白和自噬水平是先增高后下降的趨勢,P53則相反。(3)低濃度的維甲酸誘導神經(jīng)干細胞分化與FIP200表達成正相關,抑制自噬不能抑制分化,分化與RB1有關。(4)高濃度的維甲酸誘導神經(jīng)干細胞凋亡與FIP200表達成負相關,抑制自噬可以在一定程度上增加凋亡。結(jié)論:FIP200在維甲酸誘導神經(jīng)干細胞過程中起到的是促分化、抗凋亡的作用。
【關鍵詞】：維甲酸 神經(jīng)干細胞 FIP200
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R741
【目錄】：

• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 常用縮寫詞中英文對照表11-12
• 前言12-14
• 第一部分 神經(jīng)干細胞體外培養(yǎng)、分化及鑒定14-22
• 1 實驗材料與方法14-18
• 1.1 實驗材料14-15
• 1.2 動物飼養(yǎng)15
• 1.3 神經(jīng)干細胞的原代培養(yǎng)及傳代15-16
• 1.4 神經(jīng)干細胞的Nestin鑒定16
• 1.5 神經(jīng)干細胞的多向分化鑒定16-18
• 2 結(jié)果18-20
• 2.1 神經(jīng)干細胞培養(yǎng)18
• 2.2 神經(jīng)干細胞及分化鑒定結(jié)果18-20
• 3 討論20-22
• 第二部分 FIP200 在ATRA誘導NSCs自噬過程中表達的研究22-38
• 1 實驗材料與方法22-31
• 1.1 實驗材料22-23
• 1.2 AO染色檢測自噬酸性囊泡23-24
• 1.3 RT-PCR檢測神經(jīng)干細胞LC3-Ⅱ、FIP200 的mRNA表達水平24-27
• 1.4 蛋白質(zhì)印跡法檢測神經(jīng)干細胞LC3-Ⅱ、FIP200、P53 的蛋白表達水平27-30
• 1.5 統(tǒng)計方法30-31
• 2 結(jié)果31-35
• 2.1 FIP200 在維甲酸誘導神經(jīng)干細胞表達的研究31-32
• 2.2 不同濃度維甲酸誘導神經(jīng)干細胞及發(fā)生自噬32-35
• 3 討論35-38
• 第三部分 低濃度ATRA誘導NSCs分化與FIP200 表達呈正相關，抑制自噬不能抑制分化，分化與RB1 相關38-47
• 1 實驗材料與方法38-42
• 1.1 實驗材料38-39
• 1.2 細胞免疫熒光檢測神經(jīng)干細胞向神經(jīng)元的分化率39-40
• 1.3 蛋白質(zhì)印跡法檢測神經(jīng)干細胞向星形膠質(zhì)細胞的分化率40
• 1.4 加入自噬抑制劑檢測神經(jīng)干細胞分化率40
• 1.5 蛋白質(zhì)印跡法檢測RB1 的表達40
• 1.6 統(tǒng)計方法40-42
• 2 結(jié)果42-45
• 2.1 低濃度維甲酸能誘導神經(jīng)干細胞分化42-43
• 2.2 加入自噬抑制劑LY294002 分化率無明顯變化43-44
• 2.3 FIP200 的相互作用蛋白RB1 的表達44-45
• 3 討論45-47
• 第四部分 高濃度ATRA誘導NSCs凋亡與FIP200 表達呈負相關，，抑制自噬可以增加亡47-53
• 1 實驗材料與方法47-49
• 1.1 實驗材料47
• 1.2 流式細胞術檢測神經(jīng)干細胞凋亡率47-48
• 1.3 加入自噬抑制劑檢測凋亡率的變化48
• 1.4 統(tǒng)計方法48-49
• 2 結(jié)果49-51
• 2.1 高濃度維甲酸能誘導神經(jīng)干細胞凋亡49-50
• 2.2 加入自噬抑制劑LY294002 可以明顯增加凋亡率50-51
• 3 討論51-53
• 結(jié)論53-54
• 參考文獻54-59
• 綜述59-70
• 參考文獻65-70
• 致謝70-71
• 在學期間研究成果71-72
• 個人簡介72

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 許麗,張珍祥,徐永健;香煙煙霧提取物對氣道上皮細胞增殖和FIP200表達的影響[J];第四軍醫(yī)大學學報;2005年19期

  本文關鍵詞：FIP200在ATRA誘導NSCs自噬、分化和凋亡過程中表達的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：303613