本文關(guān)鍵詞：過氧化氫干預(yù)下Rab30在PC12細(xì)胞中的表達(dá)及通路研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:研究經(jīng)過氧化氫(H2O2)損傷干預(yù)下Rab30在PC12細(xì)胞中的表達(dá)情況,初步探討Rab30在PC12細(xì)胞中的信號通路。方法:1、PC12細(xì)胞購自中國科學(xué)院上海細(xì)胞生物研究所,用完全培養(yǎng)基(含10%的胎牛血清、90%的1640培養(yǎng)液、100 U/ml青-鏈霉素溶液),調(diào)節(jié)p H值至為7.2~7.4,于37℃、5%CO2飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng),待細(xì)胞生長匯合率達(dá)80%左右,用胰蛋白酶消化、傳代,選取對數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行研究;2、實(shí)驗(yàn)分為:正常組和H2O2組兩組;3、四甲基偶氮唑鹽(MTT)法測定各細(xì)胞存活率變化;4、Annexin V-FITC/PI雙染法檢測各組細(xì)胞的凋亡率;5、Western-blot法檢測Rab30、JNK3、GM130、Caspase-3的蛋白表達(dá)情況。結(jié)果:1、PC12細(xì)胞在顯微鏡下呈多角型細(xì)胞,貼壁不穩(wěn),易成團(tuán),周圍有暈光,折光度強(qiáng),成簇生長,培養(yǎng)5~7天后可形成密集的細(xì)胞簇,布滿整個(gè)培養(yǎng)瓶。2、用四甲基偶氮唑鹽(MTT)酶反應(yīng)檢測法檢測PC12細(xì)胞存活率,發(fā)現(xiàn)經(jīng)H2O2損傷干預(yù)后的吸光度A值(0.1577±0.0100)與正常組(0.2553±0.0084)比較減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);3、用Annexin V-FITC/PI法檢測細(xì)胞凋亡率,發(fā)現(xiàn)經(jīng)H2O2損傷干預(yù)后細(xì)胞的凋亡率明顯增加,即H2O2組(32.7500±1.0485,46.1167±1.1501)的早期凋亡率和總凋亡率均較正常組(0.5033±0.0216,0.6333±0.0450)顯著增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.05)。4、Western-blot法檢測各蛋白相對表達(dá)量,發(fā)現(xiàn)經(jīng)H2O2損傷干預(yù)后中的JNK3、Caspase-3在PC12細(xì)胞中表達(dá)較正常組顯著增加,Rab30、GM130較正常組表達(dá)下降。Rab30在H2O2組(0.0570±0.0014)中的蛋白表達(dá)與正常組(0.2272±0.0020)比較,P0.05,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;JNK3在H2O2組(0.6904±0.0211)中蛋白表達(dá)與正常組(0.1167±0.0024)比較,P0.05,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;GM130在H2O2組(0.0821±0.0038)、與正常組(0.2704±0.0053)比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);Caspase-3在H2O2組(0.8620±0.0198)與正常組(0.3232±0.0006)比較,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1、H2O2可誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷和凋亡;2、H2O2干預(yù)下Rab30在PC12細(xì)胞中的表達(dá)下調(diào);3、H2O2可能通過激活JNK3的表達(dá)而下調(diào)Rab30、GM130的表達(dá),使高爾基體結(jié)構(gòu)破碎成片,并可通過調(diào)控Caspase-3的表達(dá),誘導(dǎo)PC12細(xì)胞的凋亡和死亡。
【關(guān)鍵詞】：PC12細(xì)胞 Rab30 過氧化氫 氧化應(yīng)激 神經(jīng)退行性疾病
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R741
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• ABSTRACT7-11
• 英文縮略詞11-13
• 前言13-15
• 第1章 材料和方法15-25
• 第2章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果25-27
• 第3章 討論27-33
• 第4章 結(jié)論33-35
• 參考文獻(xiàn)35-41
• 附圖41-45
• 綜述45-55
• 參考文獻(xiàn)50-55
• 碩士期間參與的科研項(xiàng)目及發(fā)表的論文55-57
• 致謝57-58

【參考文獻(xiàn)】

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 趙黔魯;魚藤酮損傷PC12細(xì)胞的機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2005年

  本文關(guān)鍵詞：過氧化氫干預(yù)下Rab30在PC12細(xì)胞中的表達(dá)及通路研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：303354