本文關(guān)鍵詞：C6膠質(zhì)瘤微環(huán)境中BMSCs惡性轉(zhuǎn)化機制的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目 的通過構(gòu)建C6膠質(zhì)瘤細胞與骨髓間充質(zhì)干細胞(Bone Mesenchymal stem cells,BMSCs)的間接共培養(yǎng)模型,探討C6與BMSCs間接共培養(yǎng)后BMSCs形態(tài)變化及其NF-κB與STAT3表達的變化：通過構(gòu)建惡性轉(zhuǎn)化的BMSCs裸鼠荷瘤模型,并檢測腫塊組織切片NF-κB與STAT3的表達,驗證間接共培養(yǎng)后BMSCs的惡性轉(zhuǎn)化趨勢,從而為BMSCs臨床應(yīng)用的安全性提供實驗基礎(chǔ)及理論依據(jù)。材料與方法1.實驗動物SPF級SD雄性大鼠,3-4周齡、體重40-10g：裸鼠,雄性,5-6周齡,體重約18-20g。以上實驗動物均購買于重慶醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心。2.細胞來源用骨髓貼壁法篩選和分離培養(yǎng)大鼠BMSCs;取24h新生SD大鼠大腦皮層組織,體外分離培養(yǎng)大鼠星型膠質(zhì)細胞；C6膠質(zhì)瘤細胞系由重慶醫(yī)科大學(xué)“兒童發(fā)育與疾病研究所”提供；3.實驗分組本研究分為兩部分,第一部分實驗共分4組：實驗組,C6膠質(zhì)瘤細胞二次培養(yǎng)液與含10%胎牛血清DMEM/F12新鮮培養(yǎng)基以1：1比例培養(yǎng)第三代BMSCs(骨髓間充質(zhì)干細胞),間接共培養(yǎng)7天；陰性對照組,星形膠質(zhì)細胞二次培養(yǎng)液與10%胎牛血清DMEM/F12新鮮培養(yǎng)基1：1比例培養(yǎng)第三代BMSCs,間接共培養(yǎng)7天；空白組,10%胎牛血清DMEM/F12新鮮培養(yǎng)基培養(yǎng)第三代BMSCs;陽性對照組,10%胎牛血清DMEM/F12培養(yǎng)基培養(yǎng)C6膠質(zhì)瘤細胞。第二部分實驗分為三組： 實驗組,裸鼠皮下注射間接共培養(yǎng)后的BMSCs;陽性對照組,裸鼠皮下注射C6腦膠質(zhì)瘤細胞；空白對照組,裸鼠皮下注射單獨培養(yǎng)的BMSCs。4.實驗方法4.1骨髓貼壁法分離篩選培養(yǎng)SD大鼠BMSCs,用尼康倒置顯微鏡鏡下觀察各組細胞形態(tài)。4.2流式細胞術(shù)(Flow cytometry, FCM)檢測CD29、CD90及CD45的表達情況。4.3 RT-PCR、Western blot、細胞及組織免疫熒光(Immunoflurescence,IF)檢測各組NF-κB、STAT3、c-Myc及s-100p的表達情況。4.4細胞遷移實驗檢測各組細胞的遷移能力。4.5裸鼠皮下成瘤實驗檢測各組BMSCs在體內(nèi)的成瘤能力。4.6 HE染色法觀察各組裸鼠荷瘤組織形態(tài)結(jié)構(gòu)。結(jié)果1.FCM結(jié)果顯示第三代骨髓間充質(zhì)干細胞CD29、CD90均呈陽性表達,CD45呈陰性表達；顯微鏡下實驗組BMSCs細胞形態(tài)發(fā)生顯著改變,核質(zhì)比增大,胞體變細長；2.細胞免疫熒光結(jié)果顯示實驗組NF-κB/P65、P-STAT3、s-100β蛋白主要定位于核內(nèi),且陽性表達率顯著高于空白對照組(P0.05),組織免疫熒光結(jié)果顯示實驗組及陽性組NF-KB/p65、s-100β在胞漿及核內(nèi)均有表達,P-STAT3表達于細胞核內(nèi)。3.RT-PCR結(jié)果顯示實驗組NF-KB/p65、STAT3、c-Myc mRNA表達水平顯著高于空白對照組(P值0.05)：4. Western blot蛋白結(jié)果顯示NF-KB/p65、P-STAT3、c-Myc蛋白表達顯著高于空白對照組(P0.05)；5.細胞遷移實驗結(jié)果顯示實驗組細胞遷移能力顯著高于空白對照組(P0.05)：6.裸鼠皮下注射各組BMSCs兩周后,實驗組及陽性組裸鼠注射部位可見有腫塊生長,空白對照組沒有腫塊生長。取各組注射部位組織,HE染色,可見實驗組及陽性對照組有大量無序排列的腫瘤細胞,細胞排列紊亂,并伴有壞死出血。空白對照組HE染色結(jié)果顯示,接種部位無腫塊的生長,保留正常肌肉組織結(jié)構(gòu)。結(jié)論1.間接共培養(yǎng)后BMSCs遷移能力顯著增強,同時存在腫瘤發(fā)生相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子NF-κB/p65、P-STAT3及膠質(zhì)瘤特異性蛋白s-100β的高表達。2.間接共培養(yǎng)后的BMSCs能在裸鼠皮下形成荷瘤,且腫瘤組織的NF-KB/p65、P-STAT3及s-100β的表達陽性率與體外間接共培養(yǎng)后的BMSCs表達一致。
【關(guān)鍵詞】：BMSCs NF-κB/p65 P-STAT3 C6膠質(zhì)瘤細胞
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R739.41
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-6
• 中文摘要6-9
• ABSTRACT9-12
• 前言12-14
• 第一部分 骨髓間充質(zhì)干細胞在C6膠質(zhì)瘤微環(huán)境中間接共培養(yǎng)后NF-κB的表達情況14-37
• 1 材料與方法14-24
• 2 結(jié)果24-32
• 3 討論32-34
• 4 結(jié)論34-35
• 參考文獻35-37
• 第二部分 惡性轉(zhuǎn)化的干細胞裸鼠荷瘤模型的建立及NF-κB和STAT3的表達37-47
• 1 材料與方法37-41
• 2 結(jié)果41-44
• 3 討論44-45
• 4 結(jié)論45-46
• 參考文獻46-47
• 全文總結(jié)47-48
• 文獻綜述48-56
• 參考文獻53-56
• 致謝56-57
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文目錄57

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  本文關(guān)鍵詞：C6膠質(zhì)瘤微環(huán)境中BMSCs惡性轉(zhuǎn)化機制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：298590