發(fā)布時(shí)間：2017-04-11 07:13

  本文關(guān)鍵詞：C6膠質(zhì)瘤微環(huán)境中BMSCs惡性轉(zhuǎn)化機(jī)制的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目 的通過(guò)構(gòu)建C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone Mesenchymal stem cells,BMSCs)的間接共培養(yǎng)模型,探討C6與BMSCs間接共培養(yǎng)后BMSCs形態(tài)變化及其NF-κB與STAT3表達(dá)的變化：通過(guò)構(gòu)建惡性轉(zhuǎn)化的BMSCs裸鼠荷瘤模型,并檢測(cè)腫塊組織切片NF-κB與STAT3的表達(dá),驗(yàn)證間接共培養(yǎng)后BMSCs的惡性轉(zhuǎn)化趨勢(shì),從而為BMSCs臨床應(yīng)用的安全性提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)及理論依據(jù)。材料與方法1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SPF級(jí)SD雄性大鼠,3-4周齡、體重40-10g：裸鼠,雄性,5-6周齡,體重約18-20g。以上實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均購(gòu)買于重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。2.細(xì)胞來(lái)源用骨髓貼壁法篩選和分離培養(yǎng)大鼠BMSCs;取24h新生SD大鼠大腦皮層組織,體外分離培養(yǎng)大鼠星型膠質(zhì)細(xì)胞；C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞系由重慶醫(yī)科大學(xué)“兒童發(fā)育與疾病研究所”提供；3.實(shí)驗(yàn)分組本研究分為兩部分,第一部分實(shí)驗(yàn)共分4組：實(shí)驗(yàn)組,C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞二次培養(yǎng)液與含10%胎牛血清DMEM/F12新鮮培養(yǎng)基以1：1比例培養(yǎng)第三代BMSCs(骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞),間接共培養(yǎng)7天；陰性對(duì)照組,星形膠質(zhì)細(xì)胞二次培養(yǎng)液與10%胎牛血清DMEM/F12新鮮培養(yǎng)基1：1比例培養(yǎng)第三代BMSCs,間接共培養(yǎng)7天；空白組,10%胎牛血清DMEM/F12新鮮培養(yǎng)基培養(yǎng)第三代BMSCs;陽(yáng)性對(duì)照組,10%胎牛血清DMEM/F12培養(yǎng)基培養(yǎng)C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞。第二部分實(shí)驗(yàn)分為三組： 實(shí)驗(yàn)組,裸鼠皮下注射間接共培養(yǎng)后的BMSCs;陽(yáng)性對(duì)照組,裸鼠皮下注射C6腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞；空白對(duì)照組,裸鼠皮下注射單獨(dú)培養(yǎng)的BMSCs。4.實(shí)驗(yàn)方法4.1骨髓貼壁法分離篩選培養(yǎng)SD大鼠BMSCs,用尼康倒置顯微鏡鏡下觀察各組細(xì)胞形態(tài)。4.2流式細(xì)胞術(shù)(Flow cytometry, FCM)檢測(cè)CD29、CD90及CD45的表達(dá)情況。4.3 RT-PCR、Western blot、細(xì)胞及組織免疫熒光(Immunoflurescence,IF)檢測(cè)各組NF-κB、STAT3、c-Myc及s-100p的表達(dá)情況。4.4細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞的遷移能力。4.5裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組BMSCs在體內(nèi)的成瘤能力。4.6 HE染色法觀察各組裸鼠荷瘤組織形態(tài)結(jié)構(gòu)。結(jié)果1.FCM結(jié)果顯示第三代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞CD29、CD90均呈陽(yáng)性表達(dá),CD45呈陰性表達(dá)；顯微鏡下實(shí)驗(yàn)組BMSCs細(xì)胞形態(tài)發(fā)生顯著改變,核質(zhì)比增大,胞體變細(xì)長(zhǎng)；2.細(xì)胞免疫熒光結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組NF-κB/P65、P-STAT3、s-100β蛋白主要定位于核內(nèi),且陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于空白對(duì)照組(P0.05),組織免疫熒光結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組及陽(yáng)性組NF-KB/p65、s-100β在胞漿及核內(nèi)均有表達(dá),P-STAT3表達(dá)于細(xì)胞核內(nèi)。3.RT-PCR結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組NF-KB/p65、STAT3、c-Myc mRNA表達(dá)水平顯著高于空白對(duì)照組(P值0.05)：4. Western blot蛋白結(jié)果顯示NF-KB/p65、P-STAT3、c-Myc蛋白表達(dá)顯著高于空白對(duì)照組(P0.05)；5.細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞遷移能力顯著高于空白對(duì)照組(P0.05)：6.裸鼠皮下注射各組BMSCs兩周后,實(shí)驗(yàn)組及陽(yáng)性組裸鼠注射部位可見(jiàn)有腫塊生長(zhǎng),空白對(duì)照組沒(méi)有腫塊生長(zhǎng)。取各組注射部位組織,HE染色,可見(jiàn)實(shí)驗(yàn)組及陽(yáng)性對(duì)照組有大量無(wú)序排列的腫瘤細(xì)胞,細(xì)胞排列紊亂,并伴有壞死出血。空白對(duì)照組HE染色結(jié)果顯示,接種部位無(wú)腫塊的生長(zhǎng),保留正常肌肉組織結(jié)構(gòu)。結(jié)論1.間接共培養(yǎng)后BMSCs遷移能力顯著增強(qiáng),同時(shí)存在腫瘤發(fā)生相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子NF-κB/p65、P-STAT3及膠質(zhì)瘤特異性蛋白s-100β的高表達(dá)。2.間接共培養(yǎng)后的BMSCs能在裸鼠皮下形成荷瘤,且腫瘤組織的NF-KB/p65、P-STAT3及s-100β的表達(dá)陽(yáng)性率與體外間接共培養(yǎng)后的BMSCs表達(dá)一致。
【關(guān)鍵詞】：BMSCs NF-κB/p65 P-STAT3 C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R739.41
【目錄】：

• 英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照5-6
• 中文摘要6-9
• ABSTRACT9-12
• 前言12-14
• 第一部分 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在C6膠質(zhì)瘤微環(huán)境中間接共培養(yǎng)后NF-κB的表達(dá)情況14-37
• 1 材料與方法14-24
• 2 結(jié)果24-32
• 3 討論32-34
• 4 結(jié)論34-35
• 參考文獻(xiàn)35-37
• 第二部分 惡性轉(zhuǎn)化的干細(xì)胞裸鼠荷瘤模型的建立及NF-κB和STAT3的表達(dá)37-47
• 1 材料與方法37-41
• 2 結(jié)果41-44
• 3 討論44-45
• 4 結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-47
• 全文總結(jié)47-48
• 文獻(xiàn)綜述48-56
• 參考文獻(xiàn)53-56
• 致謝56-57
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文目錄57

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3 仝海波,江澄川,唐鎮(zhèn)生,金一尊;膠質(zhì)瘤細(xì)胞化學(xué)增敏作用實(shí)驗(yàn)研究[J];山西臨床醫(yī)藥;2000年07期

4 李嗍,王楓,繆珊,駱文靜;過(guò)量鋅對(duì)鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞體外生長(zhǎng)的影響[J];解放軍預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2001年04期

5 梁一鳴,郭國(guó)慶,鄭少俊,沈偉哉;膠質(zhì)瘤血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)的調(diào)節(jié)[J];臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志;2001年02期

6 曲元明,韓韜,李桂林,王成偉;血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子抗體對(duì)膠質(zhì)瘤生長(zhǎng)的影響[J];山東醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2001年02期

7 黃強(qiáng),董軍;膠質(zhì)瘤的分子外科治療[J];中國(guó)微侵襲神經(jīng)外科雜志;2001年04期

8 葉明,周岱,周幽心,王瑋,傅建新,黃煜倫;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)[J];腫瘤;2002年06期

9 顧宇翔,陳銜城,王宇倩;膠質(zhì)瘤對(duì)親細(xì)胞非均質(zhì)分子脂質(zhì)和幾種藥物敏感性的比較[J];復(fù)旦學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2003年02期

10 王成偉 ,劉福生 ,曲元明 ,李桂林;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子抗體抑制膠質(zhì)瘤生長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)研究[J];中華神經(jīng)外科雜志;2003年01期

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2 吳安華;王運(yùn)杰;Ohlfest JR;Wei Chen;Low WC;;膠質(zhì)瘤的生物治療-從實(shí)驗(yàn)室到臨床[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)神經(jīng)外科學(xué)分會(huì)第九次學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

3 徐宏;韓楊云;孫中書(shū);李新軍;;與膠質(zhì)瘤代謝通路相關(guān)的候選基因篩選[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)神經(jīng)外科學(xué)分會(huì)第九次學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

4 潘冬生;;多基因修飾膠質(zhì)瘤細(xì)胞疫苗的抗腫瘤免疫反應(yīng)[A];中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)神經(jīng)外科醫(yī)師分會(huì)第六屆全國(guó)代表大會(huì)論文匯編[C];2011年

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10 黃強(qiáng);;膠質(zhì)瘤生成細(xì)胞研究[A];第三屆中國(guó)腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)教育論文集[C];2004年

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1 衣曉峰　馮宇曦;中藥三氧化二砷有望成為治療膠質(zhì)瘤新藥[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2011年

2 記者 匡遠(yuǎn)深;讓膠質(zhì)瘤干細(xì)胞不再“繁殖”[N];健康報(bào);2011年

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4 白毅;人腦膠質(zhì)瘤基礎(chǔ)與應(yīng)用研究喜結(jié)“九大碩果”[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2006年

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1 董軍;CUL4B在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤中的作用研究[D];山東大學(xué);2015年

2 張睿;循環(huán)miR-221/222在膠質(zhì)瘤診斷與預(yù)后中的價(jià)值與基于CED的中樞神經(jīng)系統(tǒng)給藥新方法的研究[D];山東大學(xué);2015年

3 許森林;ALDH1A1在膠質(zhì)瘤侵襲和結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移中的作用和機(jī)制[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

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9 黃素寧;TNFRSF6B在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖及凋亡的作用研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

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1 張大慶;單核細(xì)胞趨化蛋白-1在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向膠質(zhì)瘤細(xì)胞趨化中的作用研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2012年

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10 李文華;Slit2/Robo1在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及臨床意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

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