本文關(guān)鍵詞：肢體遠(yuǎn)程缺血后處理對(duì)腦缺血再灌注后大鼠HIF-1α及HSP70表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的采用線栓法建立局灶性腦缺血(MCAO)模型,觀察再灌注不同時(shí)間點(diǎn)大鼠神經(jīng)功能損傷情況,以及大鼠腦梗死區(qū)周圍低氧誘導(dǎo)因子-1α(Hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、熱休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)的表達(dá)變化,初步探討LRIP對(duì)腦梗死周邊區(qū)神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞保護(hù)作用的可能機(jī)制。方法健康成年雄性SD大鼠,隨機(jī)分為3組分別為假手術(shù)組(Sham)、局灶性腦缺血再灌注損傷模型組(I/R)和肢體遠(yuǎn)程缺血后處理組(LRIP)。采用魚(yú)線線栓法建立局灶性大腦中動(dòng)脈腦缺血(1h)再灌注損傷模型;橡皮筋結(jié)扎大鼠雙下肢,結(jié)扎10min,放松10min,重復(fù)3次建立肢體遠(yuǎn)程缺血后處理模型;于再灌注1d、3d分別斷頭取腦,Zea longa評(píng)分作為判斷模型成功的標(biāo)準(zhǔn),Garcia JH神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分方法用于檢測(cè)大鼠神經(jīng)行為學(xué)損傷程度,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)法檢測(cè)腦梗死體積,EB用于檢測(cè)血腦屏障通透性大小,HE、Nissl染色觀察大鼠腦組織形態(tài)學(xué)變化。Q-PCR用于檢測(cè)HIF-1αm RNA的表達(dá)變化,Western blotting檢測(cè)HSP70的蛋白表達(dá)變化,免疫組織化學(xué)及免疫熒光方法用于檢測(cè)HIF-1α和HSP70陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)變化以及細(xì)胞定位。結(jié)果1.Garcia JH結(jié)果顯示,與假手術(shù)組比,I/R和LRIP組大鼠神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分明顯降低(P0.05),而LRIP處理后神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分明顯增加(P0.05)。2.TTC染色發(fā)現(xiàn)I/R和LRIP組大鼠大腦皮質(zhì)及紋狀體出現(xiàn)明顯梗死;與I/R組比,LRIP大鼠腦梗死體積明顯減少(P0.05)。3.EB檢測(cè)結(jié)果顯示I/R和LRIP大鼠皮質(zhì)和紋狀體出現(xiàn)明顯EB滲漏(P0.01),應(yīng)用LRIP處理后EB滲漏明顯降低(P0.05)。4.HE染色結(jié)果顯示腦缺血再灌注損傷后神經(jīng)元出現(xiàn)萎縮、細(xì)胞核變小、染色加深。5.Nissl染色結(jié)果顯示腦缺血再灌注損傷后神經(jīng)元尼氏體數(shù)量減少甚至消失。6.Q-PCR和免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示,與Sham組比,HIF-1αm RNA和陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)表達(dá)顯著增加,應(yīng)用LRIP后HIF-1αm RNA表達(dá)明顯減少其中1d(P0.05),3d無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯降低(P0.01),主要表達(dá)在神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞。7.Western blotting和免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示腦缺血再灌注損傷后HSP70蛋白和陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)明顯增加,應(yīng)用LRIP處理后HSP70蛋白表達(dá)明顯增加,其中1d組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),3d組有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),HSP70陽(yáng)性表達(dá)主要在梗死區(qū)周圍神經(jīng)元、部分血管內(nèi)皮細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞突起。結(jié)論1.大鼠雙下肢橡皮筋結(jié)扎10min,放松10min,重復(fù)3次對(duì)腦缺血再灌注損傷具有明顯保護(hù)作用。2.LRIP發(fā)揮腦保護(hù)作用可能與其下調(diào)皮質(zhì)梗死區(qū)周圍神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞HIF-1α表達(dá),上調(diào)神經(jīng)元、血管內(nèi)皮細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞HSP70表達(dá)有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：腦缺血再灌注損傷 肢體遠(yuǎn)程缺血后處理 大鼠 缺氧誘導(dǎo)因子-1α 熱休克蛋白70
【學(xué)位授予單位】：成都醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R743.3
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-13
• 1 材料與儀器13-22
• 1.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器13-14
• 1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑14-16
• 1.3 主要試劑的配置16-22
• 2 實(shí)驗(yàn)方法22-37
• 2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組22
• 2.2 局灶性腦缺血（MCAO）模型制備22-23
• 2.3 假手術(shù)組（sham）模型制備23
• 2.4 肢體缺血后處理（LRIP）模型制備23
• 2.5 神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分23-24
• 2.6 腦梗死體積測(cè)定24-25
• 2.7 血腦屏障（BBB）通透性檢測(cè)25-26
• 2.8 Q-PCR26-28
• 2.9 Western blotting分析28-31
• 2.10 石蠟切片的制作31-33
• 2.11 冰凍切片33
• 2.12 石蠟切片HE染色33-34
• 2.13 石蠟切片免疫組織化學(xué)染色34-35
• 2.14 冰凍切片免疫熒光染色35
• 2.15 Nissl染色35-36
• 2.16 圖像分析及統(tǒng)計(jì)方法36-37
• 3 結(jié)果37-51
• 3.1 LRIP改善神經(jīng)行為學(xué)損傷37-38
• 3.2 LRIP減少腦梗死體積38-39
• 3.3 LRIP降低血腦屏障通透性39-41
• 3.4 HE41
• 3.5 Nissl染色41-42
• 3.6 Q-PCR42-43
• 3.7 Western blotting分析43-44
• 3.8 免疫組織化學(xué)44-51
• 4 討論51-57
• 4.1 LRIP降低CIR51-52
• 4.2 LRIP調(diào)控HIF-1α 表達(dá)52-53
• 4.3 LRIP調(diào)控HSP70 表達(dá)53-54
• 4.4 HIF-1α 與HSP7054-57
• 5 結(jié)論57-58
• 參考文獻(xiàn)58-63
• 綜述63-74
• 參考文獻(xiàn)70-74
• 附錄74-76
• 攻讀學(xué)位期間研究成果76-77
• 致謝77-78

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前9條

1 陳萌;李涵;趙淑敏;孔祥玉;;預(yù)處理與腦缺血耐受的研究進(jìn)展[J];承德醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2008年01期

2 鄭關(guān)毅;陳曉春;劉昌云;方芳;張靜;黃天文;曾育琦;;一氧化氮激活應(yīng)激活化蛋白激酶/c-Jun氨基末端激酶及p38MAP激酶誘導(dǎo)腦缺血再灌注后神經(jīng)元凋亡[J];解剖學(xué)報(bào);2006年06期

3 姜維喜;劉慶;袁賢瑞;;預(yù)適應(yīng)與后適應(yīng)聯(lián)合干預(yù)對(duì)腦缺血/再灌注損傷的保護(hù)作用[J];中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2014年01期

4 白v，

本文編號(hào)：298389