背景:膠質(zhì)瘤的治療主要包括手術(shù)切除后聯(lián)合術(shù)后放化療,但由于膠質(zhì)瘤惡性程度高且容易對(duì)化療產(chǎn)生耐藥性,它的預(yù)后仍然很差。因此,新的治療策略有待開(kāi)發(fā)。鐵死亡（Ferroptosis）是一種新發(fā)現(xiàn)的非凋亡細(xì)胞死亡形式,其主要生化特征是鐵依賴(lài)性的脂質(zhì)活性氧的過(guò)度積累,誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生鐵死亡是一種新的殺死腫瘤細(xì)胞的思路。近來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)自噬在鐵死亡的過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。RSL3是一種通過(guò)抑制谷胱甘肽過(guò)氧化物酶4（GPX4）活性來(lái)誘導(dǎo)鐵死亡的小分子化合物,已被報(bào)道可誘導(dǎo)多種腫瘤細(xì)胞死亡,但是RSL3對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的殺傷作用以及RSL3是否會(huì)導(dǎo)致膠質(zhì)瘤細(xì)胞的自噬性死亡尚不清楚。腫瘤細(xì)胞以糖酵解作為主要的能量來(lái)源,誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生糖酵解功能障礙是殺死腫瘤細(xì)胞的策略之一。雖然已經(jīng)有大量研究探討了RSL3在鐵死亡相關(guān)通路中的作用機(jī)制,但目前還不清楚RSL3是否對(duì)腫瘤細(xì)胞的糖酵解功能有影響。探討RSL3引起膠質(zhì)瘤細(xì)胞死亡的具體機(jī)制,有助于為其臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。目的:采用大鼠C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞,人U373、U87和U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞以及荷瘤裸鼠模型探討RSL3能否誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞自噬性死亡并探討其發(fā)生機(jī)制。方法:1... 

【文章來(lái)源】： 王選重 吉林大學(xué)

【文章頁(yè)數(shù)】：55 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

MTT檢測(cè)結(jié)果表明RSL3以濃度依賴(lài)的方式抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞活力Fig4.1MTTassayindicatedRSL3inhibitedtheviabilitiesofgliomacellsinadose-

第4章實(shí)驗(yàn)結(jié)果184.1.2RSL3誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞死亡我們進(jìn)一步使用LDH法來(lái)檢測(cè)RSL3對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性，發(fā)現(xiàn)在U373、U87和U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞中,RSL3可明顯誘導(dǎo)細(xì)胞死亡，而且隨著RSL3濃度的升高，細(xì)胞的死亡率逐漸增加。因此，我們證實(shí)了RSL3對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞有劑量依賴(lài)的細(xì)胞毒性。圖4.2LDH釋放試驗(yàn)證明RSL3以濃度依賴(lài)的方式誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞死亡Fig4.2LDHreleaseassayshowedRSL3inducedgliomacelldeathinadose-dependentmanner.4.2RSL3誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞發(fā)生自噬為了研究RSL3能否誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞發(fā)生自噬，我們通過(guò)WesternBlotting的方法來(lái)分析RSL3處理后膠質(zhì)瘤細(xì)胞內(nèi)自噬相關(guān)蛋白的水平的變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著RSL3濃度的升高，細(xì)胞內(nèi)自噬標(biāo)記蛋白beclin-1、ATG5、ATG12、LC3B水平逐漸提高，p62水平逐漸下降。我們用RPF-GFP-LC3慢病毒轉(zhuǎn)染U87細(xì)胞以監(jiān)測(cè)自噬流是否開(kāi)放。與對(duì)照組相比,我們發(fā)現(xiàn)RSL3處理后細(xì)胞內(nèi)紅色和綠色的熒光點(diǎn)明顯增多（圖像融合后為黃色熒光點(diǎn)），這說(shuō)明RSL3處理后細(xì)胞內(nèi)自噬體合成明顯增加。與此同時(shí)，在RSL3組中觀察到了只發(fā)紅色熒光而無(wú)綠色熒光的斑點(diǎn)(箭頭所示),這是自噬

第4章實(shí)驗(yàn)結(jié)果19流開(kāi)放的一個(gè)關(guān)鍵證據(jù)，因?yàn)樵谧允审w-溶酶體融合形成自噬溶酶體過(guò)程中，標(biāo)記LC3的綠色熒光蛋白對(duì)溶酶體酸性微環(huán)境敏感性而會(huì)降解，使得自噬溶酶體只發(fā)紅色熒光。因此，我們證明RSL3能夠激活膠質(zhì)瘤細(xì)胞發(fā)生自噬。圖4.3WesternBlotting實(shí)驗(yàn)證實(shí)在RSL3濃度梯度樣品中ATG5，ATG12，Beclin-1和LC3B蛋白水平增加，p62水平下降Fig4.3WesternBlottingassayprovedRSL3-inducedincreasingproteinlevelsofATG5,ATG12,Beclin-1,LC3Banddecreasingproteinlevelofp62.圖4.4熒光顯微鏡顯示RSL3處理后RPF-GFP-LC3慢病毒轉(zhuǎn)染U87細(xì)胞內(nèi)自噬


本文編號(hào)：2972631