目的:構(gòu)建篩選人源靶向特異PINK1-shRNA敲減質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞并驗證該質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后對PINK1基因的敲減效率,觀察對細(xì)胞線粒體形態(tài)的影響。方法:構(gòu)建兩對人源PINK1-shRNA序列（編號分別為PINK1-shRNA-39和PINK1-shRNA-42）,將這2對干擾序列連接在載體上形成重組載體,經(jīng)測序驗證后,將空載體和兩對敲減質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染SH-SY5Y細(xì)胞,獲得基因敲減的細(xì)胞模型,用CCK-8法檢測細(xì)胞的存活率,用熒光定量PCR方法確定PINK1基因的敲減效率,用蛋白質(zhì)免疫印跡法驗證細(xì)胞內(nèi)PINK1的表達(dá)水平是否發(fā)生改變,用激光共聚焦顯微鏡觀察線粒體的形態(tài)是否發(fā)生了改變。結(jié)果:我們提取的質(zhì)粒,經(jīng)測序結(jié)果顯示,質(zhì)粒載體構(gòu)建成功;轉(zhuǎn)染細(xì)胞后,CCK-8法檢測細(xì)胞存活率發(fā)生了降低,與正常組比較,PINK1-shRNA-39和PINK1-shRNA-42敲減質(zhì)粒組,細(xì)胞的存活率分別降低了13.7%（P<0.05）和14.1%（P<0.05）;熒光定量PCR結(jié)果顯示,與正常組相比,PINK1-shRNA-39組和PINK1-shRNA-42組敲減質(zhì)粒轉(zhuǎn)染... 

【文章來源】：現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2020,20(22)

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

PINK1-sh RNA測序結(jié)果

細(xì)胞正常培養(yǎng)狀態(tài)下，細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)正常、完整；質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，通過倒置熒光顯微鏡觀察SH-SY5Y細(xì)胞內(nèi)綠色熒光蛋白（GFP）的表達(dá)，結(jié)果顯示，正常組細(xì)胞內(nèi)未觀測熒光蛋白的表達(dá)，空載體組和兩個基因敲減組細(xì)胞內(nèi)有較多的綠色熒光蛋白表達(dá)，見圖2。2.3 細(xì)胞存活率的檢測結(jié)果

CCK-8法檢測細(xì)胞存活率結(jié)果顯示，與正常組比較，PINK1-sh RNA-39和PINK1-sh RNA-42敲減質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，細(xì)胞內(nèi)的存活率分別降低了13.7%(P<0.05）和14.1%(P<0.05）；空載體組與正常組比較，表達(dá)水平變化沒有明顯的差異。結(jié)果見表2和圖3。2.4 轉(zhuǎn)染SH-SY5Y細(xì)胞后PINK1基因的m RNA表達(dá)情況

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]溫膽益腦湯聯(lián)合多巴絲肼對老年帕金森病人血清YKL-40、IL-1β、BDNF的影響[J]. 戴軍,羅亞明,曹雄彬,南毛球,周航,劉雅芳.  中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志. 2018(09)
[2]三七總皂苷微乳對帕金森模型小鼠行為學(xué)及紋狀體多巴胺含量的影響[J]. 任靜,吳玉梅,馬麗,常夢春,劉勃纓,張麗娜,劉志東.  天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報. 2018(03)
[3]針刺舞蹈震顫控制區(qū)對帕金森病小鼠腦內(nèi)黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元及BDNF表達(dá)的影響[J]. 馮婧,孫紅梅,王媛媛,許紅,吳海霞,和欣,高譽(yù)珊,張淑靜,龔小鋼.  北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報. 2014(01)



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