本文關(guān)鍵詞：HCMV感染巨噬細(xì)胞對(duì)惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：人巨細(xì)胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)屬于皰疹病毒β亞科,是導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)先天性異常的最重要病原體之一。HCMV在人群中感染非常普遍,我國(guó)成人感染率大于90%。越來(lái)越多的研究顯示,HCMV感染與腫瘤之間存在密切聯(lián)系,在多種腫瘤組織如腦膠質(zhì)瘤、結(jié)腸癌等中都可檢測(cè)到HCMV的基因及蛋白。本研究組前期的實(shí)驗(yàn)證明了HCMV對(duì)膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展起到影響。為進(jìn)一步了解HCMV感染與膠質(zhì)瘤之間的作用機(jī)制,以佛波酯為誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)THP-1單核細(xì)胞成為巨噬細(xì)胞,建立了THP-1源性巨噬細(xì)胞模型。以RT-PCR檢測(cè)HCMV即刻早期基因(IE)及晚期基因(UL99)的表達(dá),結(jié)果顯示巨噬細(xì)胞可完整表達(dá)IE及UL99。利用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)對(duì)巨噬細(xì)胞感染HCMV后的表皮生長(zhǎng)因子(EGF)進(jìn)行檢測(cè),發(fā)現(xiàn)HCMV可促進(jìn)巨噬細(xì)胞EGF的分泌。共培養(yǎng)巨噬細(xì)胞與U87細(xì)胞,HCMV感染巨噬細(xì)胞后以Western-blot檢測(cè)U87細(xì)胞表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)的表達(dá)變化,結(jié)果表明HCMV感染巨噬細(xì)胞組的U87細(xì)胞EGFR表達(dá)量高于對(duì)照組(p0.05),HCMV感染巨噬細(xì)胞可上調(diào)U87細(xì)胞EGFR的表達(dá)。利用Transwell體外侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)HCMV感染的巨噬細(xì)胞對(duì)U87侵襲能力的影響,結(jié)果顯示HCMV感染組侵襲到小室膜下的細(xì)胞數(shù)量高于未感染組(p0.05),HCMV感染巨噬細(xì)胞可促進(jìn)U87細(xì)胞的侵襲。再以Western-blot檢測(cè)局部黏著斑激酶(FAK)及Tyr397 FAK,結(jié)果表明HCMV感染組Tyr397 FAK蛋白相對(duì)表達(dá)量高于對(duì)照組(p0.05),HCMV感染可上調(diào)FAK的磷酸化。本研究分析了HCMV感染的巨噬細(xì)胞對(duì)膠質(zhì)瘤惡性行為的影響,這為進(jìn)一步闡釋HCMV感染的分子機(jī)制及HCMV感染與腫瘤之間的關(guān)系奠定了理論基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：人巨細(xì)胞病毒 惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤 巨噬細(xì)胞 細(xì)胞侵襲
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R739.41
【目錄】：

• 摘要2-3
• Abstract3-7
• 引言7-9
• 第一章 實(shí)驗(yàn)材料9-13
• 1.1 細(xì)胞9
• 1.2 病毒9
• 1.3 主要試驗(yàn)儀器設(shè)備9-13
• 1.3.1 主要實(shí)驗(yàn)試劑及其配制方法10
• 1.3.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑10-11
• 1.3.3 主要試劑配制11-13
• 第二章 實(shí)驗(yàn)方法13-23
• 2.1 U87細(xì)胞的培養(yǎng)13-14
• 2.1.1 細(xì)胞復(fù)蘇13
• 2.1.2 細(xì)胞傳代13-14
• 2.1.3 細(xì)胞凍存14
• 2.2 HCMV株毒種的制備和定量14-15
• 2.2.1 HCMV株毒種的制備14
• 2.2.2 病毒感染滴度的測(cè)定（空斑定量）14-15
• 2.3 巨噬細(xì)胞的誘導(dǎo)15-16
• 2.3.1 THP-1 細(xì)胞的培養(yǎng)及傳代方法15
• 2.3.2 THP-1 細(xì)胞誘導(dǎo)成為巨噬細(xì)胞15-16
• 2.4 RT-PCR檢測(cè)HCMV IE、UL99基因在THP-1細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、HELF中的表達(dá)16-18
• 2.5 ELISA檢測(cè)HCMV感染對(duì)巨噬細(xì)胞EGF的影響18-19
• 2.6 Western-blot檢測(cè)HCMV感染巨噬細(xì)胞對(duì)U87細(xì)胞EGFR表達(dá)的影響19-21
• 2.7 Transwell檢測(cè)HCMV感染巨噬細(xì)胞對(duì)U87細(xì)胞侵襲的影響21
• 2.8 Western-blot檢測(cè)HCMV感染對(duì)U87細(xì)胞FAK、Tyr397 FAK蛋白表達(dá)的影響21-22
• 2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析22-23
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果23-30
• 3.1 細(xì)胞培養(yǎng)23-24
• 3.2 巨噬細(xì)胞的誘導(dǎo)24
• 3.3 HCMV毒株的擴(kuò)增24-25
• 3.4 RT-PCR檢測(cè)HCMV IE、UL99基因在THP-1細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、HELF中的表達(dá)25-26
• 3.5 HCMV感染促進(jìn)巨噬細(xì)胞EGF的表達(dá)與分泌26-27
• 3.6 HCMV感染巨噬細(xì)胞促進(jìn)U87細(xì)胞EGFR的表達(dá)27-28
• 3.7 HCMV感染巨噬細(xì)胞增加U87細(xì)胞的侵襲能力28-29
• 3.8 HCMV感染對(duì)U87細(xì)胞FAK、Tyr397 FAK表達(dá)的影響29-30
• 第四章 討論30-32
• 第五章 結(jié)論32-33
• 參考文獻(xiàn)33-36
• 文獻(xiàn)綜述 人巨細(xì)胞病毒感染在單核巨噬細(xì)胞中的調(diào)控作用36-47
• 綜述參考文獻(xiàn)43-47
• 攻讀學(xué)位期間研究成果47-48
• 致謝48-49

  本文關(guān)鍵詞：HCMV感染巨噬細(xì)胞對(duì)惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：293577