研究背景谷氨酸在疼痛信息的感知、傳遞和調(diào)控中發(fā)揮了重要作用。研究證實(shí),谷氨酸的過度釋放與神經(jīng)病理性痛的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。囊泡谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體（vesicular glutamate transporters,VGLUTs）是突觸前負(fù)責(zé)將谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)到囊泡內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白質(zhì),因此對以胞吐形式釋放的谷氨酸能神經(jīng)遞質(zhì)具有重要的調(diào)控作用。目前已知的VGLUTs包含三種亞型,其中2型囊泡谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體（vesicular glutamate transporter 2,VGLUT2）主要分布于背根神經(jīng)節(jié)（dorsal root ganglia,DRG）、脊髓、腦干和丘腦等與疼痛信號傳遞和加工密切相關(guān)的部位或區(qū)域。有文獻(xiàn)報(bào)道VGLUT2全身敲除雜合子小鼠的神經(jīng)病理性疼痛癥狀消失或減弱,同時VGLUT2全身敲除純合子胎鼠丘腦神經(jīng)元興奮性突觸后電流的幅度和頻率下降;條件性敲除DRG中VGLUT2導(dǎo)致小鼠熱痛覺過敏消失,但機(jī)械痛敏維持正常。以上研究提示,VGLUT2可能與疼痛,尤其是神經(jīng)病理性痛有關(guān),但在丘腦、脊髓及DRG中的作用有所差異。本實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn),神經(jīng)病理性痛引起脊髓和丘腦等疼痛相關(guān)腦區(qū)VGLUT2... 

【文章來源】：軍事科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：103 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
縮略詞表
中文摘要
Abstract
前言
第一部分 神經(jīng)痛模型動物脊髓VGLUT2表達(dá)變化
    1 實(shí)驗(yàn)材料
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 試劑配方
        2.2 機(jī)械痛閾測定
        2.3 坐骨神經(jīng)分支選擇性損傷（SNI）模型構(gòu)建
        2.4 真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1/myc-His-VGLUT2構(gòu)建
        2.5 PC12細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.6 蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)
        2.7 免疫組化實(shí)驗(yàn)
        2.8 組織免疫熒光雙重標(biāo)記實(shí)驗(yàn)
        2.9 定量和統(tǒng)計(jì)分析
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 VGLUT2抗體驗(yàn)證
        3.2 SNI神經(jīng)病理性痛模型的構(gòu)建及驗(yàn)證
        3.3 SNI術(shù)后不同時間點(diǎn)脊髓VGLUT2表達(dá)變化
    4 小結(jié)
第二部分 VGLUT2shRNA慢病毒對神經(jīng)痛及谷氨酸釋放的影響
    1 實(shí)驗(yàn)材料
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 試劑配方
        2.2 含GFP熒光標(biāo)記的VGLUT2shRNA慢病毒載體構(gòu)建
        2.3 表達(dá)VGLUT2shRNA的慢病毒載體包裝
        2.4 原代神經(jīng)元培養(yǎng)
        2.5 細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)
        2.6 原代培養(yǎng)神經(jīng)元的病毒感染
        2.7 Real-timePCR和蛋白免疫印跡檢測原代培養(yǎng)神經(jīng)元VGLUT2表達(dá)
        2.8 機(jī)械痛閾測定
        2.9 SNI模型構(gòu)建
        2.10 鞘內(nèi)注射VGLUT2shRNA慢病毒
        2.11 丘腦VPL腦區(qū)微量注射VGLUT2shRNA慢病毒
        2.12 原代培養(yǎng)神經(jīng)元谷氨酸釋放實(shí)驗(yàn)
        2.13 脊髓、丘腦突觸體谷氨酸釋放實(shí)驗(yàn)
        2.14 定量和統(tǒng)計(jì)分析
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 VGLUT2shRNA重組慢病毒載體制備與篩選
        3.2 鞘內(nèi)注射VGLUT2shRNA慢病毒對SNI小鼠機(jī)械痛閾的影響
        3.3 丘腦VPL腦區(qū)注射VGLUT2shRNA慢病毒對SNI小鼠機(jī)械痛閾的影響
        3.4 VGLUT2shRNA慢病毒對谷氨酸釋放的影響
    4 小結(jié)
第三部分 神經(jīng)痛模型動物Wnt/β-catenin信號通路的變化及其在VGLUT2表達(dá)調(diào)控中的作用
    1 實(shí)驗(yàn)材料
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 藥品配置
        2.2 機(jī)械痛閾測定
        2.3 SNI模型構(gòu)建
        2.4 Real-timePCR檢測脊髓Wnt基因mRNA水平
        2.5 蛋白免疫印記檢測Wnt1、β-catenin蛋白表達(dá)
        2.6 鞘內(nèi)注射VGLUT2shRNA慢病毒、XAV939、Wnt激動劑、Wnt1、BDNF
        2.7 定量和統(tǒng)計(jì)分析
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 小鼠SNI術(shù)后不同時間Wnt/β-catenin信號分子的表達(dá)變化
        3.2 Wnt/β-catenin信號通路對VGLUT1、VGLUT2蛋白表達(dá)的影響
        3.3 BDNF對VGLUT1、VGLUT2蛋白表達(dá)的影響
        3.4 Wnt/β-catenin信號通路介導(dǎo)的VGLUT2表達(dá)調(diào)控在神經(jīng)痛中的作用
    4 小結(jié)
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
主要簡歷
致謝



本文編號：2910257