背景神經(jīng)系統(tǒng)疾病包括阿爾茲海默癥、帕金森綜合征等,神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)病率逐年增高,目前尚未出現(xiàn)有效的治療手段。小膠質(zhì)細(xì)胞作為一種免疫效應(yīng)細(xì)胞,在神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)生與發(fā)展中都發(fā)揮著重要作用。間充質(zhì)干細(xì)胞具有免疫調(diào)節(jié)功能,研究發(fā)現(xiàn),間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)于神經(jīng)系統(tǒng)疾病具有一定的治療作用,但是具體機(jī)制并不明確。研究間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞的功能及其介導(dǎo)的神經(jīng)炎癥的影響與作用機(jī)制,將為干細(xì)胞應(yīng)用于神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)疾病的臨床治療提供理論基礎(chǔ)。目的1.研究間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞吞噬Aβ的影響及機(jī)制;2.研究間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)LPS刺激的小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的神經(jīng)炎癥的影響。方法1.利用Aβ刺激小膠質(zhì)細(xì)胞并通過MSC條件培養(yǎng)基處理,研究MSC對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞吞噬Aβ的影響。分別通過CCK-8、PI染色、AnnexinV染色檢測(cè)小膠質(zhì)細(xì)胞活力、周期與凋亡情況;并通過熒光標(biāo)記檢測(cè)小膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)Aβ的吞噬情況,通過Western blot檢測(cè)小膠質(zhì)細(xì)胞中Aβ降解酶以及自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)。2.利用LPS刺激小膠質(zhì)細(xì)胞并通過MSC條件培養(yǎng)基處理,研究MSC對(duì)體外培養(yǎng)的小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥反應(yīng)的影響。利用腹腔內(nèi)注射LPS的方法建立小鼠... 

【文章來源】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院河南省

【文章頁(yè)數(shù)】：69 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

β和/或UCMSCs-CM對(duì)BV2細(xì)胞活性的影響

圖 4 .UCMSCs-CM 增強(qiáng)了 BV2 細(xì)胞的 Aβ25–35 吞噬圖注：A.BV2 細(xì)胞用 UCMSCs-CM 培養(yǎng) 24 小時(shí), 然后加入 Fluor Aβ2 小時(shí)后, 用 D對(duì)細(xì)胞進(jìn)行 10 分鐘的染色, 并使用激光掃描共聚焦顯微鏡進(jìn)行觀察 BV2 細(xì)胞中 Aβ 吞情況(綠色)。箭頭處表示 BV2 細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)中的 Aβ�？潭葪U= 50μm。B. Aβ 陽性 BV2胞比例的直方圖分析。數(shù)據(jù)代表至少三個(gè)獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)，并以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。###0.001，以 BV2 + Aβ 組為對(duì)照組。Fig. 4 UCMSCs-CM enhances Aβ25–35 phagocytosis by BV2 cells.Note: A. BV2 cells were incubated wit h ucMSCs-CM for 24 h followed by addition of HiLFluor 488-labeled β-Amyloid 25–35 (Fluor-Aβ25–35) oligomers. After 2 h, cells were stainDAPI for 10 min and examined using laser scanning confocal microscopy.Confocal microscintracellular Fluor-Aβ25–35 (green) in BV2 cells. Arrows indicate BV2 cells phagocytosingAβ25–35 in the cytoplasm. Scale bar =50μm. B. Histogram analysis of the ratio of Fluor-Aβpositive BV2 cells. The data were indicated as the mean ± SD. ###P < 0.001, as compared t

2.5 UCMSCs-CM 能夠促進(jìn) Aβ 刺激下 BV2 細(xì)胞中 Aβ-降解酶的表達(dá)胰島素降解酶 (IDE) 和尼普利菌素 (Nep) 是小膠質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)的Aβ降解酶[70]。為了研究 UCMSCs-CM 是否影響小膠質(zhì)細(xì)胞中 Nepe 和 IDE 的表達(dá), 用 UCMSCs-CM 和/或 Aβ作用于 BV2 細(xì)胞 24小時(shí), 用Western-blot檢測(cè)Nep 和 IDE 的表達(dá)。結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比, UCMSCs-CM 和 Aβ 單獨(dú)作用于 BV2 均不影響 IDE 的表達(dá)量, 但 UCMSCs-CM和Aβ共同作用于BV2細(xì)胞,IDE的表達(dá)量顯著增加 (圖 5B)。而無論 Aβ 存在與否,UCMSCs-CM 都顯著增加了 Nep 的表達(dá) (圖 5C)。這些結(jié)果表明, 在 Aβ25-35 刺激的情況下, UCMSCs-CM 促進(jìn)了 IDE 和 Nep 在 BV2 細(xì)胞中的表達(dá)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]與阿爾茨海默病密切相關(guān)的α-,β-和γ-分泌酶的研究進(jìn)展[J]. 馬波,張建軍.  國(guó)外醫(yī)學(xué).藥學(xué)分冊(cè). 2005(01)



本文編號(hào)：2909939