發(fā)布時(shí)間：2020-12-04 00:26

　　目的:PTEN-Long是第10號染色體缺失的磷酸酶和張力蛋白同源基因（phosohatase and tensin homolgue deleted on chromosome 10,PTEN）的翻譯變體,探索PTEN-Long對膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251增殖、遷移、侵襲的影響及相關(guān)分子機(jī)制,并分析PTEN-Long在體內(nèi)水平對膠質(zhì)細(xì)胞瘤的影響。方法:1.將攜帶PTEN-Long基因的重組慢病毒載體轉(zhuǎn)染人膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251,未感染慢病毒的細(xì)胞為對照組（U251）;感染LV-EGFP的細(xì)胞為空載組（U251-EGFP）;感染LV-PTEN-Long-EGFP的細(xì)胞為過表達(dá)組（U251-PTEN-Long-EGFP）。通過熒光顯微鏡觀察綠色熒光蛋白表達(dá)情況,并應(yīng)用RT-PCR、Western blot法檢測轉(zhuǎn)染效率。2.應(yīng)用CCK8法檢測PTEN-Long過表達(dá)后對各組細(xì)胞增殖能力的影響。通過流式細(xì)胞分析術(shù)檢測各組的細(xì)胞周期差異。3.通過劃痕實(shí)驗(yàn)檢測PTEN-Long過表達(dá)后對各組細(xì)胞遷移能力的影響,并通過Transwell小室法檢測各組細(xì)胞的侵襲能力。4.通過RT-PCR、Western bl... 

【文章來源】：河北大學(xué)河北省

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

（A）U251細(xì)胞系光鏡表達(dá)

（a）Western blot 法檢測轉(zhuǎn)染前后 PTEN-Long 蛋白表達(dá)情況，高于對照組。（b）統(tǒng)計(jì)分析各組目的蛋白/β-Actin，過表達(dá)組蛋對照組。（c）通過 2 △△Ct法分析細(xì)胞中 PTEN-Long 的 mRNA 達(dá)量明顯高于對照組。n=3，**P﹤0.01，***P﹤0.001。EN-Long 抑制人膠質(zhì)瘤細(xì)胞 U251 增殖能力CK-8 法檢測不同時(shí)間點(diǎn)（0H、24H、48H、72H）的 OD 值，與過表達(dá)組細(xì)胞增殖能力降低（F=18.42，P﹤0.01；F=79.92，P﹤0.0見圖 1-3、表 1-2）。通過流式細(xì)胞儀檢測各組細(xì)胞周期情況，周期被阻滯在 G0/G1 期（F=26.32，P﹤0.01）（見圖 1-4）。

法檢測 PTEN-Long 過表達(dá)后對細(xì)胞增殖的抑制作用。n=表 1-2 PTEN-Long 對 U251 細(xì)胞增殖的影響roups nOD0h 24h 48h 72hU251 3 0.58 1.59±0.09 2.29±0.08 2.76±0.1EFP 3 0.58 1.60±0.11 2.14±0.09 2.61±0.1TEN-L 3 0.58 1.21±0.14**1.58±0.11**1.08±0.0﹤0.01


本文編號：2896710