背景癲癇是兒童最為常見(jiàn)的神經(jīng)系統(tǒng)疾病之一。據(jù)世界衛(wèi)生組織公布,在全球范圍內(nèi),每年約有240萬(wàn)人被診斷為癲癇,其中約2/3為兒童。目前診斷癲癇主要依靠臨床病史、腦電圖和腦成像,但患兒及家屬提供的病史一般不夠詳盡,一般腦電圖捕捉到癇性放電波的可能性較低,除非行持續(xù)的視頻腦電圖監(jiān)測(cè),許多癲癇患者的腦成像是陰性的,這些因素均會(huì)導(dǎo)致癲癇診斷錯(cuò)誤或延遲。因此尋找一種客觀、準(zhǔn)確的生物標(biāo)志物來(lái)診斷兒童癲癇是一項(xiàng)急需解決的問(wèn)題。與癲癇有關(guān)的生物標(biāo)志物主要是電生理、影像學(xué)與分子,在這幾種類型中,分子生物標(biāo)志物特別有吸引力,因?yàn)樗鼈兲峁┝丝焖�、�?jiǎn)單和廉價(jià)的床邊檢測(cè)的可能性。許多研究表明miRNA作為一種新興的腦部疾病生物標(biāo)志物參與了癲癇的發(fā)生發(fā)展。外泌體作為一種新型的細(xì)胞間通訊工具,其不僅能夠介導(dǎo)miRNA的轉(zhuǎn)運(yùn),且能夠自由通過(guò)血腦屏障。由于外泌體脂質(zhì)雙層膜的保護(hù),miRNA能夠進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間、長(zhǎng)距離的運(yùn)輸而不被內(nèi)源性核糖核酸酶降解。近年來(lái),外泌體miRNA作為生物標(biāo)志物在許多中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的很高的診斷價(jià)值,如阿爾茲海默病及帕金森。閱讀相關(guān)文獻(xiàn),我們選擇在動(dòng)物癲癇模型和癲癇患者血清中均明顯上調(diào)的微小RNA-155(miR-155)作為研究目標(biāo)。通過(guò)提取癲癇患兒及健康兒童血清中的外泌體,對(duì)比血清外泌體中miR-155在癲癇兒童及健康兒童的差異性表達(dá),從而為癲癇的診斷提供一種潛在的生物標(biāo)志物。目的對(duì)比血清外泌體中miR-155在癲癇兒童與健康兒童的表達(dá)差異,探討血清外泌體中miR-155對(duì)兒童癲癇的診斷價(jià)值。方法收集2017年10月至2018年10月在鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院收治的首次確診為癲癇的患兒30例入組癲癇組,選取性別與年齡與癲癇組匹配的同期在本院體檢的健康兒童30例入組健康對(duì)照組。應(yīng)用超速離心法提取血清中的外泌體,應(yīng)用透射電子顯微鏡、納米粒徑跟蹤分析儀、Western Blot鑒定外泌體,利用Nanodrop對(duì)RNA的純度進(jìn)行測(cè)試。運(yùn)用實(shí)時(shí)定量PCR(Quantitative Real-time PCR)檢測(cè)miR-155在癲癇患兒血清外泌體、去除外泌體的血清懸浮液及健康兒童外泌體中的表達(dá)情況,使用SPSS24.0軟件對(duì)其表達(dá)差異進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,P0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。隨后制作出受試者工作特性曲線(ROC曲線):對(duì)差異表達(dá)的miR-155進(jìn)行ROC曲線分析,以評(píng)價(jià)血清外泌體中非編碼miR-155對(duì)診斷兒童癲癇的可能性。結(jié)果1.透射電鏡及納米粒徑跟蹤分析儀方法鑒定血清中的外泌體,能夠檢測(cè)到直徑為30-100nm的微囊泡,且Western Blot能夠檢測(cè)到外泌體標(biāo)記蛋白CD63、CD9的表達(dá)。2.與健康對(duì)照組對(duì)比,癲癇組血清外泌體miR-155明顯上調(diào),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.783,P0.05)。3.通過(guò)比較癲癇組提取的外泌體中與去除外泌體的血清懸浮液中的miR-155的含量,miR-155在外泌體中比去除外泌體的血清懸浮液明顯上調(diào),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4.癲癇組血清外泌體miR-155的曲線下面積為AUC值為0.811,特異度為70%,敏感度為83.3%,截?cái)嘀禐?.49。結(jié)論1.本研究應(yīng)用超速離心法能成功從血清中提取到外泌體。2.本研究表明miR-155在癲癇組血清外泌體中的表達(dá)水平明顯高于健康對(duì)照組,推測(cè)外泌體miR-155可能參與了癲癇的發(fā)病機(jī)制。3.本研究表明miR-155在外泌體中比去除外泌體的血清懸浮液高,外泌體miR-155可能對(duì)癲癇更具有診斷價(jià)值。4.本研究表明當(dāng)血清外泌體miR-155的表達(dá)水平大于1.49時(shí),提示可能患有癲癇。
【學(xué)位單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R742.1
【部分圖文】：

清外泌體電子透射顯微鏡形態(tài)圖 圖 2.單個(gè)血清外泌體電子透射顯得到的外泌體用透射電子顯微鏡進(jìn)行掃描，結(jié)果如圖 1 和圖 2 所示圓形及杯狀的 50-100nm 小囊泡，圖 2 可清晰看見(jiàn)外泌體表面的磷nm 時(shí)外泌體結(jié)構(gòu)可清晰觀察到，內(nèi)部為低電子密度物質(zhì)。這與文獻(xiàn)征一致[40]。粒徑跟蹤分析儀（Nanoparticle tracking analysis

圖 1 多個(gè)血清外泌體電子透射顯微鏡形態(tài)圖 圖 2.單個(gè)血清外泌體電子透射顯微鏡形態(tài)圖將離心得到的外泌體用透射電子顯微鏡進(jìn)行掃描，結(jié)果如圖 1 和圖 2 所示，外泌體是呈圓形、類圓形及杯狀的 50-100nm 小囊泡，圖 2 可清晰看見(jiàn)外泌體表面的磷脂雙分子層。標(biāo)尺在 100nm 時(shí)外泌體結(jié)構(gòu)可清晰觀察到，內(nèi)部為低電子密度物質(zhì)。這與文獻(xiàn)報(bào)道的外泌體的形態(tài)特征一致[40]。2 納米粒徑跟蹤分析儀（Nanoparticle tracking analysis NTA）檢測(cè)結(jié)果

圖 1 多個(gè)血清外泌體電子透射顯微鏡形態(tài)圖 圖 2.單個(gè)血清外泌體電子透射顯微鏡形態(tài)圖將離心得到的外泌體用透射電子顯微鏡進(jìn)行掃描，結(jié)果如圖 1 和圖 2 所示，外泌體是呈圓形、類圓形及杯狀的 50-100nm 小囊泡，圖 2 可清晰看見(jiàn)外泌體表面的磷脂雙分子層。標(biāo)尺在 100nm 時(shí)外泌體結(jié)構(gòu)可清晰觀察到，內(nèi)部為低電子密度物質(zhì)。這與文獻(xiàn)報(bào)道的外泌體的形態(tài)特征一致[40]。2 納米粒徑跟蹤分析儀（Nanoparticle tracking analysis NTA）檢測(cè)結(jié)果
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本文編號(hào)：2877857