背景癲癇是兒童最為常見的神經系統(tǒng)疾病之一。據世界衛(wèi)生組織公布,在全球范圍內,每年約有240萬人被診斷為癲癇,其中約2/3為兒童。目前診斷癲癇主要依靠臨床病史、腦電圖和腦成像,但患兒及家屬提供的病史一般不夠詳盡,一般腦電圖捕捉到癇性放電波的可能性較低,除非行持續(xù)的視頻腦電圖監(jiān)測,許多癲癇患者的腦成像是陰性的,這些因素均會導致癲癇診斷錯誤或延遲。因此尋找一種客觀、準確的生物標志物來診斷兒童癲癇是一項急需解決的問題。與癲癇有關的生物標志物主要是電生理、影像學與分子,在這幾種類型中,分子生物標志物特別有吸引力,因為它們提供了快速、簡單和廉價的床邊檢測的可能性。許多研究表明miRNA作為一種新興的腦部疾病生物標志物參與了癲癇的發(fā)生發(fā)展。外泌體作為一種新型的細胞間通訊工具,其不僅能夠介導miRNA的轉運,且能夠自由通過血腦屏障。由于外泌體脂質雙層膜的保護,miRNA能夠進行長時間、長距離的運輸而不被內源性核糖核酸酶降解。近年來,外泌體miRNA作為生物標志物在許多中樞神經系統(tǒng)疾病的很高的診斷價值,如阿爾茲海默病及帕金森。閱讀相關文獻,我們選擇在動物癲癇模型和癲癇患者血清中均明顯上調的微小RNA-155(miR-155)作為研究目標。通過提取癲癇患兒及健康兒童血清中的外泌體,對比血清外泌體中miR-155在癲癇兒童及健康兒童的差異性表達,從而為癲癇的診斷提供一種潛在的生物標志物。目的對比血清外泌體中miR-155在癲癇兒童與健康兒童的表達差異,探討血清外泌體中miR-155對兒童癲癇的診斷價值。方法收集2017年10月至2018年10月在鄭州大學第一附屬醫(yī)院收治的首次確診為癲癇的患兒30例入組癲癇組,選取性別與年齡與癲癇組匹配的同期在本院體檢的健康兒童30例入組健康對照組。應用超速離心法提取血清中的外泌體,應用透射電子顯微鏡、納米粒徑跟蹤分析儀、Western Blot鑒定外泌體,利用Nanodrop對RNA的純度進行測試。運用實時定量PCR(Quantitative Real-time PCR)檢測miR-155在癲癇患兒血清外泌體、去除外泌體的血清懸浮液及健康兒童外泌體中的表達情況,使用SPSS24.0軟件對其表達差異進行統(tǒng)計學分析,P0.05認為差異有統(tǒng)計學意義。隨后制作出受試者工作特性曲線(ROC曲線):對差異表達的miR-155進行ROC曲線分析,以評價血清外泌體中非編碼miR-155對診斷兒童癲癇的可能性。結果1.透射電鏡及納米粒徑跟蹤分析儀方法鑒定血清中的外泌體,能夠檢測到直徑為30-100nm的微囊泡,且Western Blot能夠檢測到外泌體標記蛋白CD63、CD9的表達。2.與健康對照組對比,癲癇組血清外泌體miR-155明顯上調,差異具有統(tǒng)計學意義(t=4.783,P0.05)。3.通過比較癲癇組提取的外泌體中與去除外泌體的血清懸浮液中的miR-155的含量,miR-155在外泌體中比去除外泌體的血清懸浮液明顯上調,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。4.癲癇組血清外泌體miR-155的曲線下面積為AUC值為0.811,特異度為70%,敏感度為83.3%,截斷值為1.49。結論1.本研究應用超速離心法能成功從血清中提取到外泌體。2.本研究表明miR-155在癲癇組血清外泌體中的表達水平明顯高于健康對照組,推測外泌體miR-155可能參與了癲癇的發(fā)病機制。3.本研究表明miR-155在外泌體中比去除外泌體的血清懸浮液高,外泌體miR-155可能對癲癇更具有診斷價值。4.本研究表明當血清外泌體miR-155的表達水平大于1.49時,提示可能患有癲癇。
【學位單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R742.1
【部分圖文】：

清外泌體電子透射顯微鏡形態(tài)圖 圖 2.單個血清外泌體電子透射顯得到的外泌體用透射電子顯微鏡進行掃描，結果如圖 1 和圖 2 所示圓形及杯狀的 50-100nm 小囊泡，圖 2 可清晰看見外泌體表面的磷nm 時外泌體結構可清晰觀察到，內部為低電子密度物質。這與文獻征一致[40]。粒徑跟蹤分析儀（Nanoparticle tracking analysis

圖 1 多個血清外泌體電子透射顯微鏡形態(tài)圖 圖 2.單個血清外泌體電子透射顯微鏡形態(tài)圖將離心得到的外泌體用透射電子顯微鏡進行掃描，結果如圖 1 和圖 2 所示，外泌體是呈圓形、類圓形及杯狀的 50-100nm 小囊泡，圖 2 可清晰看見外泌體表面的磷脂雙分子層。標尺在 100nm 時外泌體結構可清晰觀察到，內部為低電子密度物質。這與文獻報道的外泌體的形態(tài)特征一致[40]。2 納米粒徑跟蹤分析儀（Nanoparticle tracking analysis NTA）檢測結果

圖 1 多個血清外泌體電子透射顯微鏡形態(tài)圖 圖 2.單個血清外泌體電子透射顯微鏡形態(tài)圖將離心得到的外泌體用透射電子顯微鏡進行掃描，結果如圖 1 和圖 2 所示，外泌體是呈圓形、類圓形及杯狀的 50-100nm 小囊泡，圖 2 可清晰看見外泌體表面的磷脂雙分子層。標尺在 100nm 時外泌體結構可清晰觀察到，內部為低電子密度物質。這與文獻報道的外泌體的形態(tài)特征一致[40]。2 納米粒徑跟蹤分析儀（Nanoparticle tracking analysis NTA）檢測結果
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本文編號：2877857