目的:p110α是磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)的重要成員,與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),但目前關(guān)于p110α與膠質(zhì)瘤關(guān)系的研究甚少。本研究旨在探討p110α在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的表達(dá)情況、對(duì)膠質(zhì)瘤SHG44細(xì)胞增殖、侵襲遷移的影響及其可能的分子機(jī)制。方法:采用細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒8(cell counting kit 8,CCK8)法檢測(cè)SHG44細(xì)胞增殖能力。采用劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)p110α對(duì)SHG44細(xì)胞遷移和侵襲的影響。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)檢測(cè)HEB細(xì)胞組(正常膠質(zhì)細(xì)胞)、SHG44細(xì)胞組(膠質(zhì)瘤細(xì)胞)和PIK75(p110α特異性抑制劑)處理SHG44組中p110α、AKT、mTOR的mRNA水平。采用蛋白質(zhì)印跡法(Western blot,WB)檢測(cè)HEB細(xì)胞組、SHG44細(xì)胞組和PIK75處理SHG44組中p110α、P-AKT、AKT、P-mTOR、mTOR蛋白水平的表達(dá)。結(jié)果:CCK8實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,不同濃度的PIK75均能抑制SHG44細(xì)胞的增殖,并呈劑量依賴(lài)性,均P0.05。劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,在0.25μmol/LPIK75中SHG44細(xì)胞遷移率為22.43%±1.55%,低于SHG44細(xì)胞組的遷移率54.12%±10.79%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,t=5.035,P0.01。0.25μmol/LPIK75在Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)中顯示能抑制SHG44穿膜細(xì)胞數(shù)為20.67±1.22,低于SHG44細(xì)胞組的44.33±1.90,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,t=18.14,P0.001。SHG44細(xì)胞中p110α、P-AKT、AKT、P-mTOR、mTOR蛋白表達(dá)均高于HEB,均P0.05,且p110α、AKT、mTOR的mRNA水平均高于HEB細(xì)胞,均P0.01。使用PIK75處理SHG44后,p110α、P-AKT、AKT、P-mTOR、mTOR蛋白表達(dá)較處理前均降低,均P0.05,p110α、AKT、mTOR的mRNA水平較處理前均降低,均P0.01。結(jié)論:膠質(zhì)瘤中p110α高表達(dá),并能增強(qiáng)AKT、mTOR的基因轉(zhuǎn)錄、蛋白翻譯、磷酸化活性,進(jìn)而激活PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路。p110α表達(dá)下調(diào)能抑制SHG44細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲,p110α可能成為膠質(zhì)瘤藥物治療的新靶點(diǎn)。
【學(xué)位單位】：貴州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類(lèi)】：R739.41
【部分圖文】：

h、48 h、72 h 后，顯微鏡下初步觀察在趨勢(shì)。避光條件下沿著孔壁每孔加入 10，以避免孔壁上有 CCK8 試劑。培養(yǎng)箱nm 來(lái)進(jìn)行光吸收值（A 值）的檢測(cè)。收集 SHG44 細(xì)胞，并制成細(xì)胞懸液。中各孔加入 2ml 含血清的培養(yǎng)基，再吸孔板分別從左、右、上、下四個(gè)方向輕輕密度達(dá)到 80%時(shí)，將鋼尺放于 6 孔板上孔板底部劃直線(xiàn)，每孔劃線(xiàn)布局如圖 1

）工作液的配制：根據(jù)實(shí)驗(yàn)所需量，將 BCA 試劑和 Cu ，混勻，備用。）標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?zhuān)河?PBS 將 10μl BSA 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋為 100μl 的 ㎎/ml）向 96 孔板中加入八組稀釋標(biāo)準(zhǔn)品，分別為 0、2、4、6、孔再加入 PBS 補(bǔ)足至 20μl，每組 3 個(gè)復(fù)孔。）將提取的各組蛋白樣品 5 倍或 10 倍稀釋?zhuān)≒BS 稀釋?zhuān)?μl/孔，每組 3 個(gè)復(fù)孔。）然后再往每孔加入 200μl 提取配制好的 BCA 工作液，in。）用酶標(biāo)儀檢測(cè)波長(zhǎng)為 562nm 時(shí)的 OD 值，導(dǎo)出到 Exce圖 1-2。最后根據(jù)公式 y=0.1605x-0.0652，計(jì)算稀釋后的

注：PIK75 處理 SHG44 組（0.25 μmol/L PIK75 處理 SHG44 細(xì)胞 24h）圖 2-2 p110α 表達(dá)下調(diào)對(duì) SHG44 細(xì)胞遷移能力的影響（×40）Fig. 2-2 Effect of down-regulation of p110α on the ability of migration of SHG44 cell Transwell 侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果從圖 2-3 可觀察到 SHG44 細(xì)胞侵襲能力強(qiáng)。SHG44 細(xì)胞組和 PIK75 處理G44 組 24 h 后侵襲至小室濾膜下層的細(xì)胞數(shù)分別是 44.33±1.90、20.67±1.異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，t=18.14，P＜0.001，提示 PIK75 處理細(xì)胞后，細(xì)胞侵襲能降。表明 p110α 表達(dá)下調(diào)可以抑制 SHG44 細(xì)胞的侵襲。
【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 胡建宏;王茂林;潘亞文;;高遷移率族蛋白B1在膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展中的作用及其機(jī)制研究[J];國(guó)際神經(jīng)病學(xué)神經(jīng)外科學(xué)雜志;2019年02期

2 楊海霞;李曉鳴;;外泌體與膠質(zhì)瘤關(guān)系的研究進(jìn)展[J];臨床與病理雜志;2017年11期

3 秦麗娟;賈永森;趙喜慶;張?zhí)?張偉;孫娜;;鴉膽子油乳注射液對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲性的影響及其可能機(jī)制[J];四川大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2016年03期

4 齊玲;徐俊杰;紀(jì)朋艷;呂士杰;韓磊;王瑋瑤;;西蘭花多肽抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的機(jī)制研究[J];中國(guó)藥學(xué)雜志;2014年12期

5 萬(wàn)政強(qiáng);陳晨;伏林山;孫關(guān);;吡格列酮對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制研究[J];東南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2013年01期

6 李?,王楓,繆珊,駱文靜;過(guò)量鋅對(duì)鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞體外生長(zhǎng)的影響[J];解放軍預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2001年04期

7 楊偉廉,王堯,韋永新,阮長(zhǎng)耿,杜子威;抗膠質(zhì)瘤細(xì)胞單克隆抗體SZ-38及其識(shí)別抗原的生化特征[J];生物化學(xué)雜志;1988年06期

8 斯可哉;;在體外和體內(nèi)用利血平調(diào)節(jié)C_6膠質(zhì)瘤細(xì)胞亞系對(duì)ACNU的抗藥性[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(腫瘤學(xué)分冊(cè));1988年02期

9 楊偉廉;抗膠質(zhì)瘤細(xì)胞單克隆抗體SZ—38及其識(shí)別抗原的生化特征[J];蘇州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1989年01期

10 李方園;高翼之;王世浚;;四種人癌基因在腦瘤中的擴(kuò)增和重排(摘要)[J];鐵道醫(yī)學(xué);1989年01期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 程志華;“分子海綿”長(zhǎng)鏈非編碼RNA XIST通過(guò)i調(diào)控膠質(zhì)瘤成瘤及血管新生的機(jī)制研究[D];吉林大學(xué);2019年

2 董博奇;顱內(nèi)免疫膠質(zhì)瘤裂解物聯(lián)合鞭毛蛋白誘導(dǎo)的抗小鼠腦膠質(zhì)瘤效應(yīng)[D];吉林大學(xué);2019年

3 朱丹化;MicroRNA-497通過(guò)靶向調(diào)控mTOR及Bcl-2增強(qiáng)膠質(zhì)瘤對(duì)替莫唑胺的耐藥性[D];蘇州大學(xué);2018年

4 肖瑾;多模態(tài)MRI在人腦膠質(zhì)瘤病理分級(jí)、基因型及其預(yù)后評(píng)估中的應(yīng)用[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2018年

5 尤昕;Nexilin表達(dá)下調(diào)對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)特性的影響及機(jī)制研究[D];延邊大學(xué);2015年

6 鄧鑫;HAX-1蛋白通過(guò)Akt1通路對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖和調(diào)亡的影響及機(jī)制研究[D];鄭州大學(xué);2018年

7 唐純海;miR-130a調(diào)控靶基因HMGB2抑制膠質(zhì)瘤增殖和EMT的分子機(jī)制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2018年

8 孫瑾;MiR-152-3p靶向調(diào)控DNMT1-NF2通路與膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡、侵襲機(jī)制的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2018年

9 盧鳳飛;miR-497/Wnt3a/c-jun反饋環(huán)路調(diào)控神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和上皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)化的分子機(jī)制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2018年

10 李峰;阻斷CD47-SIRPα信號(hào)通路對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞/膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的靶向治療研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2018年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 周洲;敲減長(zhǎng)鏈非編碼RNA CRNDE促進(jìn)miR-136表達(dá)并抑制膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞的遷移與侵襲[D];江蘇大學(xué);2019年

2 張德龍;LncRNA ASB16-AS1對(duì)膠質(zhì)瘤生物學(xué)行為的影響[D];皖南醫(yī)學(xué)院;2019年

3 劉俊;lncRNA BLACAT1及miR204-5p在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及預(yù)后的相關(guān)研究[D];皖南醫(yī)學(xué)院;2019年

4 周黃貴;長(zhǎng)鏈非編碼RNA BLACAT1對(duì)膠質(zhì)瘤增殖、侵襲、遷移的影響[D];皖南醫(yī)學(xué)院;2019年

5 鄢騰峰;MiR-512-5p靶向JAG1抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯[D];南昌大學(xué);2019年

6 肖冬玲;多模態(tài)磁共振成像在膠質(zhì)瘤術(shù)前分級(jí)及與Ki-67、Survivin表達(dá)的相關(guān)性研究[D];西南醫(yī)科大學(xué);2016年

7 楊亞麗;長(zhǎng)鏈非編碼RNA LINC00461調(diào)控膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖和遷移[D];武漢大學(xué);2017年

8 郭彩麗;IKBKE通過(guò)激活A(yù)KT/NF-KB信號(hào)通路調(diào)控膠質(zhì)瘤的生長(zhǎng)過(guò)程及增強(qiáng)膠質(zhì)瘤的抗藥性[D];鄭州大學(xué);2019年

9 張仁;lncRNA ENST00000413528作用于miR-593-5p通過(guò)調(diào)控PLK1對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、侵襲和調(diào)亡的影響[D];鄭州大學(xué);2019年

10 曾凡濤;IDH1R132H突變與膠質(zhì)瘤相關(guān)性癲癇患者術(shù)后癇性再發(fā)的關(guān)系[D];鄭州大學(xué);2019年

本文編號(hào)：2874721