目的:p110α是磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)的重要成員,與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),但目前關(guān)于p110α與膠質(zhì)瘤關(guān)系的研究甚少。本研究旨在探討p110α在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的表達(dá)情況、對(duì)膠質(zhì)瘤SHG44細(xì)胞增殖、侵襲遷移的影響及其可能的分子機(jī)制。方法:采用細(xì)胞增殖檢測試劑盒8(cell counting kit 8,CCK8)法檢測SHG44細(xì)胞增殖能力。采用劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測p110α對(duì)SHG44細(xì)胞遷移和侵襲的影響。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)檢測HEB細(xì)胞組(正常膠質(zhì)細(xì)胞)、SHG44細(xì)胞組(膠質(zhì)瘤細(xì)胞)和PIK75(p110α特異性抑制劑)處理SHG44組中p110α、AKT、mTOR的mRNA水平。采用蛋白質(zhì)印跡法(Western blot,WB)檢測HEB細(xì)胞組、SHG44細(xì)胞組和PIK75處理SHG44組中p110α、P-AKT、AKT、P-mTOR、mTOR蛋白水平的表達(dá)。結(jié)果:CCK8實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,不同濃度的PIK75均能抑制SHG44細(xì)胞的增殖,并呈劑量依賴性,均P0.05。劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,在0.25μmol/LPIK75中SHG44細(xì)胞遷移率為22.43%±1.55%,低于SHG44細(xì)胞組的遷移率54.12%±10.79%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,t=5.035,P0.01。0.25μmol/LPIK75在Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)中顯示能抑制SHG44穿膜細(xì)胞數(shù)為20.67±1.22,低于SHG44細(xì)胞組的44.33±1.90,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,t=18.14,P0.001。SHG44細(xì)胞中p110α、P-AKT、AKT、P-mTOR、mTOR蛋白表達(dá)均高于HEB,均P0.05,且p110α、AKT、mTOR的mRNA水平均高于HEB細(xì)胞,均P0.01。使用PIK75處理SHG44后,p110α、P-AKT、AKT、P-mTOR、mTOR蛋白表達(dá)較處理前均降低,均P0.05,p110α、AKT、mTOR的mRNA水平較處理前均降低,均P0.01。結(jié)論:膠質(zhì)瘤中p110α高表達(dá),并能增強(qiáng)AKT、mTOR的基因轉(zhuǎn)錄、蛋白翻譯、磷酸化活性,進(jìn)而激活PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路。p110α表達(dá)下調(diào)能抑制SHG44細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲,p110α可能成為膠質(zhì)瘤藥物治療的新靶點(diǎn)。
【學(xué)位單位】：貴州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R739.41
【部分圖文】：

h、48 h、72 h 后，顯微鏡下初步觀察在趨勢。避光條件下沿著孔壁每孔加入 10，以避免孔壁上有 CCK8 試劑。培養(yǎng)箱nm 來進(jìn)行光吸收值（A 值）的檢測。收集 SHG44 細(xì)胞，并制成細(xì)胞懸液。中各孔加入 2ml 含血清的培養(yǎng)基，再吸孔板分別從左、右、上、下四個(gè)方向輕輕密度達(dá)到 80%時(shí)，將鋼尺放于 6 孔板上孔板底部劃直線，每孔劃線布局如圖 1

）工作液的配制：根據(jù)實(shí)驗(yàn)所需量，將 BCA 試劑和 Cu ，混勻，備用。）標(biāo)準(zhǔn)品稀釋：用 PBS 將 10μl BSA 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋為 100μl 的 ㎎/ml）向 96 孔板中加入八組稀釋標(biāo)準(zhǔn)品，分別為 0、2、4、6、孔再加入 PBS 補(bǔ)足至 20μl，每組 3 個(gè)復(fù)孔。）將提取的各組蛋白樣品 5 倍或 10 倍稀釋（PBS 稀釋）0μl/孔，每組 3 個(gè)復(fù)孔。）然后再往每孔加入 200μl 提取配制好的 BCA 工作液，in。）用酶標(biāo)儀檢測波長為 562nm 時(shí)的 OD 值，導(dǎo)出到 Exce圖 1-2。最后根據(jù)公式 y=0.1605x-0.0652，計(jì)算稀釋后的

注：PIK75 處理 SHG44 組（0.25 μmol/L PIK75 處理 SHG44 細(xì)胞 24h）圖 2-2 p110α 表達(dá)下調(diào)對(duì) SHG44 細(xì)胞遷移能力的影響（×40）Fig. 2-2 Effect of down-regulation of p110α on the ability of migration of SHG44 cell Transwell 侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果從圖 2-3 可觀察到 SHG44 細(xì)胞侵襲能力強(qiáng)。SHG44 細(xì)胞組和 PIK75 處理G44 組 24 h 后侵襲至小室濾膜下層的細(xì)胞數(shù)分別是 44.33±1.90、20.67±1.異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，t=18.14，P＜0.001，提示 PIK75 處理細(xì)胞后，細(xì)胞侵襲能降。表明 p110α 表達(dá)下調(diào)可以抑制 SHG44 細(xì)胞的侵襲。
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本文編號(hào)：2874721