目的本實(shí)驗(yàn)的目的是試圖通過在低氧狀態(tài)下觀察280nm LED-紫外線(Light Emitting Diode-Ultraviolet,LED-UV)對人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株(SH-SY5Y細(xì)胞株)的形態(tài)變化、增殖情況、細(xì)胞凋亡及Bcl-2基因的表達(dá)的影響,進(jìn)一步探討其發(fā)生機(jī)制,探索低毒、高效的體外凈化方法,以期為體外凈化提供理論依據(jù)。方法1.本實(shí)驗(yàn)以對數(shù)生長期的人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株(SH-SY5Y細(xì)胞株)為研究對象,以280nm LED-UV為光源,用終濃度為150μmol/L的氯化鈷(C_OCl_2)創(chuàng)建化學(xué)低氧細(xì)胞培養(yǎng)體系。2.將SH-SY5Y細(xì)胞隨機(jī)分為對照組和實(shí)驗(yàn)組(對照組A,實(shí)驗(yàn)組B、C、D三組):對照組A為未處理的細(xì)胞;實(shí)驗(yàn)組B為低氧組(用終濃度為150μmol/L的C_OCl_2處理后的細(xì)胞);實(shí)驗(yàn)組C為紫外線組(用劑量為30J/m~2的280nm LED-UV照射后的細(xì)胞);實(shí)驗(yàn)組D為低氧+紫外線組(在用終濃度為150μmol/L的C_OCl_2處理的基礎(chǔ)上,加用劑量為30J/m~2的280nm LED-UV照射后的細(xì)胞)。3.將各組細(xì)胞加入等量含10%胎牛血清的DMEM/F-12培養(yǎng)基中,置于37℃、5%CO_2、飽和濕度的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h。4.用倒置顯微鏡觀察SH-SY5Y細(xì)胞的形態(tài)變化、增殖情況,用CCK-8檢測SH-SY5Y細(xì)胞的增殖抑制率,流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡,熒光定量PCR檢測Bcl-2基因的表達(dá)。結(jié)果1.SH-SY5Y細(xì)胞形態(tài)、密度變化:培養(yǎng)48h后,在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)、計(jì)算細(xì)胞密度。對照組A細(xì)胞密度大,為(21.10±1.41)×10~4/ml,貼壁生長、排列整齊、形態(tài)完整,突起明顯,胞漿豐富,細(xì)胞核大。與對照組A比較,實(shí)驗(yàn)組B-D細(xì)胞密度均明顯減小(P均0.01),分別為(17.43±1.17)×10~4/ml、(6.83±0.76)×10~4/ml、(2.33±0.85)×10~4/ml,排列紊亂,部分細(xì)胞漂浮,突起回縮或斷裂,胞體固縮,呈圓點(diǎn)狀,網(wǎng)絡(luò)消失,各組間的比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=199.53,P均0.01)。實(shí)驗(yàn)組C、D均較B細(xì)胞密度減小,貼壁細(xì)胞減少,漂浮細(xì)胞增多,以實(shí)驗(yàn)組D最為顯著,各實(shí)驗(yàn)組間的比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均0.05)。2.SH-SY5Y細(xì)胞增殖抑制率:與對照組比較,實(shí)驗(yàn)組B-D組的增殖抑制率均明顯升高(P均0.01),分別為(16.93±1.19)%、(67.93±7.35)%、(89.69±2.32)%,各組間的比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=206.35,P均0.01)。實(shí)驗(yàn)組C、D增殖抑制率明顯高于實(shí)驗(yàn)組B,以實(shí)驗(yàn)組D最為顯著,各實(shí)驗(yàn)組間的比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均0.05)。3.SH-SY5Y細(xì)胞凋亡率:對照組A細(xì)胞凋亡率為(4.41±0.31)%,與對照組比較,實(shí)驗(yàn)組B-D的細(xì)胞凋亡率均明顯升高(P均0.01),分別為(9.10±0.32)%、(22.93±0.33)%、(25.33±0.55)%,各組間的比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=2071.78,P均0.01)。實(shí)驗(yàn)組C、D凋亡率明顯高于實(shí)驗(yàn)組B,實(shí)驗(yàn)組D最為顯著,各實(shí)驗(yàn)組間的比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均0.05)。4.SH-SY5Y細(xì)胞Bcl-2基因表達(dá):與對照組比較,實(shí)驗(yàn)組B-D的Bcl-2表達(dá)量均明顯降低(P均0.01),分別為(0.7073±0.0176)、(0.3987±0.0070)、(0.2137±0.0037),各組間的比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=1504.84,P均0.01)。實(shí)驗(yàn)組C、D的Bcl-2基因表達(dá)量低于實(shí)驗(yàn)組B,實(shí)驗(yàn)組D最為顯著,各實(shí)驗(yàn)組間的比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均0.05)。結(jié)論1.低氧、280nm LED-UV均能抑制SH-SY5Y細(xì)胞增殖、促進(jìn)其凋亡,且280nm LED-UV對其增殖的抑制及促凋亡作用較低氧強(qiáng),在低氧條件下的280nm LED-UV對SH-SY5Y細(xì)胞增殖的抑制作用及促凋亡效果最顯著。提示低氧、紫外線是通過促進(jìn)SH-SY5Y細(xì)胞凋亡來抑制細(xì)胞增殖。2.低氧、280nm LED-UV均能下調(diào)SH-SY5Y細(xì)胞Bcl-2基因的表達(dá),280nm LED-UV下調(diào)Bcl-2基因表達(dá)的作用比低氧強(qiáng),在低氧條件下的280nm LED-UV對Bcl-2基因表達(dá)的下調(diào)作用最顯著。提示Bcl-2基因表達(dá)減少可能是低氧條件下280nm LED-UV照射誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞凋亡的機(jī)制之一。
【學(xué)位單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R739.41
【部分圖文】：

C 組（紫外線組） D 組（低氧+紫外線組）圖 2 不同實(shí)驗(yàn)條件下 SH-SH5Y 細(xì)胞生長狀態(tài)（×200 倍，培養(yǎng) 48h）SH-SY5Y 細(xì)胞增殖抑制率與對照組比較，實(shí)驗(yàn)組 B-D 組的增殖抑制率均明顯升高（P 均<0.01），結(jié)果下，各組間的比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=206.35，P 均<0.01）。實(shí)驗(yàn)組 C、D殖抑制率明顯高于實(shí)驗(yàn)組 B，以實(shí)驗(yàn)組 D 最為顯著，各實(shí)驗(yàn)組間的比較差異均有計(jì)學(xué)意義（P 均＜0.05）（見表 7、圖 3）。表 7 不同實(shí)驗(yàn)條件下 SH-SY5Y 細(xì)胞增殖抑制率（%， X±SD）分組 處理方式 增殖抑制率（%， X±SD）B（低氧組） CoCl216.93±1.19aC（紫外線組） 30J/m267.93±7.35abD（低氧+紫外線組） 30J/m2+CoCl289.69±2.32abc

結(jié)果分 組凋亡率（%）對 照 組 低 氧 組 紫 外 線 組 低 氧 +紫 外 線 組01 02 03 0圖 4 不同實(shí)驗(yàn)條件下 SH-SY5Y 細(xì)胞凋亡率
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本文編號：2873514