發(fā)布時間：2020-11-06 18:37

　　 目的本實驗的目的是試圖通過在低氧狀態(tài)下觀察280nm LED-紫外線(Light Emitting Diode-Ultraviolet,LED-UV)對人神經母細胞瘤細胞株(SH-SY5Y細胞株)的形態(tài)變化、增殖情況、細胞凋亡及Bcl-2基因的表達的影響,進一步探討其發(fā)生機制,探索低毒、高效的體外凈化方法,以期為體外凈化提供理論依據(jù)。方法1.本實驗以對數(shù)生長期的人神經母細胞瘤細胞株(SH-SY5Y細胞株)為研究對象,以280nm LED-UV為光源,用終濃度為150μmol/L的氯化鈷(C_OCl_2)創(chuàng)建化學低氧細胞培養(yǎng)體系。2.將SH-SY5Y細胞隨機分為對照組和實驗組(對照組A,實驗組B、C、D三組):對照組A為未處理的細胞;實驗組B為低氧組(用終濃度為150μmol/L的C_OCl_2處理后的細胞);實驗組C為紫外線組(用劑量為30J/m~2的280nm LED-UV照射后的細胞);實驗組D為低氧+紫外線組(在用終濃度為150μmol/L的C_OCl_2處理的基礎上,加用劑量為30J/m~2的280nm LED-UV照射后的細胞)。3.將各組細胞加入等量含10%胎牛血清的DMEM/F-12培養(yǎng)基中,置于37℃、5%CO_2、飽和濕度的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h。4.用倒置顯微鏡觀察SH-SY5Y細胞的形態(tài)變化、增殖情況,用CCK-8檢測SH-SY5Y細胞的增殖抑制率,流式細胞術檢測細胞凋亡,熒光定量PCR檢測Bcl-2基因的表達。結果1.SH-SY5Y細胞形態(tài)、密度變化:培養(yǎng)48h后,在倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)、計算細胞密度。對照組A細胞密度大,為(21.10±1.41)×10~4/ml,貼壁生長、排列整齊、形態(tài)完整,突起明顯,胞漿豐富,細胞核大。與對照組A比較,實驗組B-D細胞密度均明顯減小(P均0.01),分別為(17.43±1.17)×10~4/ml、(6.83±0.76)×10~4/ml、(2.33±0.85)×10~4/ml,排列紊亂,部分細胞漂浮,突起回縮或斷裂,胞體固縮,呈圓點狀,網絡消失,各組間的比較差異均有統(tǒng)計學意義(F=199.53,P均0.01)。實驗組C、D均較B細胞密度減小,貼壁細胞減少,漂浮細胞增多,以實驗組D最為顯著,各實驗組間的比較差異均有統(tǒng)計學意義(P均0.05)。2.SH-SY5Y細胞增殖抑制率:與對照組比較,實驗組B-D組的增殖抑制率均明顯升高(P均0.01),分別為(16.93±1.19)%、(67.93±7.35)%、(89.69±2.32)%,各組間的比較差異均有統(tǒng)計學意義(F=206.35,P均0.01)。實驗組C、D增殖抑制率明顯高于實驗組B,以實驗組D最為顯著,各實驗組間的比較差異均有統(tǒng)計學意義(P均0.05)。3.SH-SY5Y細胞凋亡率:對照組A細胞凋亡率為(4.41±0.31)%,與對照組比較,實驗組B-D的細胞凋亡率均明顯升高(P均0.01),分別為(9.10±0.32)%、(22.93±0.33)%、(25.33±0.55)%,各組間的比較差異均有統(tǒng)計學意義(F=2071.78,P均0.01)。實驗組C、D凋亡率明顯高于實驗組B,實驗組D最為顯著,各實驗組間的比較差異均有統(tǒng)計學意義(P均0.05)。4.SH-SY5Y細胞Bcl-2基因表達:與對照組比較,實驗組B-D的Bcl-2表達量均明顯降低(P均0.01),分別為(0.7073±0.0176)、(0.3987±0.0070)、(0.2137±0.0037),各組間的比較差異有統(tǒng)計學意義(F=1504.84,P均0.01)。實驗組C、D的Bcl-2基因表達量低于實驗組B,實驗組D最為顯著,各實驗組間的比較差異均有統(tǒng)計學意義(P均0.05)。結論1.低氧、280nm LED-UV均能抑制SH-SY5Y細胞增殖、促進其凋亡,且280nm LED-UV對其增殖的抑制及促凋亡作用較低氧強,在低氧條件下的280nm LED-UV對SH-SY5Y細胞增殖的抑制作用及促凋亡效果最顯著。提示低氧、紫外線是通過促進SH-SY5Y細胞凋亡來抑制細胞增殖。2.低氧、280nm LED-UV均能下調SH-SY5Y細胞Bcl-2基因的表達,280nm LED-UV下調Bcl-2基因表達的作用比低氧強,在低氧條件下的280nm LED-UV對Bcl-2基因表達的下調作用最顯著。提示Bcl-2基因表達減少可能是低氧條件下280nm LED-UV照射誘導SH-SY5Y細胞凋亡的機制之一。
【學位單位】：青島大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R739.41
【部分圖文】：

C 組（紫外線組） D 組（低氧+紫外線組）圖 2 不同實驗條件下 SH-SH5Y 細胞生長狀態(tài)（×200 倍，培養(yǎng) 48h）SH-SY5Y 細胞增殖抑制率與對照組比較，實驗組 B-D 組的增殖抑制率均明顯升高（P 均<0.01），結果下，各組間的比較差異均有統(tǒng)計學意義（F=206.35，P 均<0.01）。實驗組 C、D殖抑制率明顯高于實驗組 B，以實驗組 D 最為顯著，各實驗組間的比較差異均有計學意義（P 均＜0.05）（見表 7、圖 3）。表 7 不同實驗條件下 SH-SY5Y 細胞增殖抑制率（%， X±SD）分組 處理方式 增殖抑制率（%， X±SD）B（低氧組） CoCl216.93±1.19aC（紫外線組） 30J/m267.93±7.35abD（低氧+紫外線組） 30J/m2+CoCl289.69±2.32abc

結果分 組凋亡率（%）對 照 組 低 氧 組 紫 外 線 組 低 氧 +紫 外 線 組01 02 03 0圖 4 不同實驗條件下 SH-SY5Y 細胞凋亡率
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本文編號：2873514