研究背景:缺血性腦卒中可嚴(yán)重?fù)p傷腦神經(jīng)功能,導(dǎo)致肢體殘疾甚至死亡,是我國目前主要致死致殘原因之一,給社會和家庭帶來沉重的負(fù)擔(dān)。2013年一項全國31個省市,包括155個城鄉(xiāng)中心,共計480 687人的調(diào)查研究顯示:腦卒中的年齡標(biāo)準(zhǔn)化發(fā)病率為246.8/10萬人/年,年齡標(biāo)準(zhǔn)化死亡率為114.8/10萬/年,其中缺血性腦卒占77.8%~([1])。腦缺血可導(dǎo)致腦組織細(xì)胞嚴(yán)重?fù)p傷,血流再通過后,繼之的炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激等引起的再灌注進(jìn)一可步加重腦組織損傷,如何保護(hù)腦組織免受缺血再灌注損傷,成為目前主要研究內(nèi)容。他汀類藥物是一種3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A(HMG-CoA)還原酶抑制劑,臨床上廣泛應(yīng)用于降低血脂,是冠心病和腦梗死的一級和二級預(yù)防用藥~([2,3])。越來越多的研究發(fā)現(xiàn),他汀具有免疫調(diào)節(jié)、穩(wěn)定斑塊、抗氧化應(yīng)激、神經(jīng)保護(hù)等不依賴其降脂機制的作用~([4])。匹伐他汀(pitavastatin,PTV)是第三代他汀類降脂藥,體內(nèi)少量通過肝藥酶CYP2C9代謝,安全性較高,且較其他類他汀而言,PTV不增加糖尿病發(fā)病風(fēng)險~([5])。腦源性神經(jīng)生長因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)高表達(dá)于中樞神經(jīng)系統(tǒng),對神經(jīng)元生長、分化、存活等至關(guān)重要,有臨床研究發(fā)現(xiàn),他汀治療可明顯提高動脈粥樣硬化性腦梗塞病人的神經(jīng)功能,這一作用可能與其升高血清腦源性神經(jīng)生長因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)有關(guān)。亦研究指出,BDNF可通過激活其受體TrkB,起抗缺氧損傷的作用。本研究通過對原代培養(yǎng)的皮層神經(jīng)元進(jìn)行氧糖剝奪(OGD)及復(fù)氧處理,模擬腦缺血再灌注損傷,進(jìn)一步探討PTV是否可通過BDNF-TrkB信號通路對缺氧再灌注損傷后神經(jīng)元具有保護(hù)作用。通過觀察不同濃度匹伐他汀(PTV)溶液對氧糖剝奪(OGD)再復(fù)氧后原代培養(yǎng)的皮層神經(jīng)元的作用,探索匹伐他汀是否對具有神經(jīng)保護(hù)作用及其適當(dāng)濃度范圍;并探討其中的神經(jīng)保護(hù)作用的細(xì)胞分子機制,與BDNF-TrkB信號通路的聯(lián)系。方法:體外培養(yǎng)新生SD大鼠皮層神經(jīng)元,分為正常對照組、匹伐他汀處理組、氧糖剝奪組,氧糖剝奪+匹伐他汀處理組,匹伐他汀的濃度設(shè)為1μmol/L,15μmol/L,30μmol/L,MTT法測各組細(xì)胞活性(OD值);免疫熒光染色觀察各處理組神經(jīng)元形態(tài)變化,計數(shù)神經(jīng)元樹突數(shù)目及長度;提取各處理組蛋白,western blot法測各組蛋白dimmer-mBDNF、homo-mBDNF、TrkB的表達(dá)量。結(jié)果:1.正常對照組與單純1μmol/L,15μmol/L,30μmol/L匹伐他汀處理組間OD值差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);氧糖剝奪及復(fù)氧處理后,皮層神經(jīng)元活性明顯降低(P0.001);1μmol/L和15μmol/L匹伐他汀+OGD處理組較OGD組OD值增高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);1μmol/L匹伐他汀+OGD組與15μmol/L匹伐他汀+OGD處理組組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義;1μmol/L和15μmol/L匹伐他汀處理+OGD處理組較30μmol/L匹伐他汀+OGD組,OD值顯著升高(P0.05);30μmol/L匹伐他汀+OGD組與對照組OD值差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。2.OGD處理組神經(jīng)元樹突分支數(shù)目較正常對照組顯著減少,樹突長度較正常對照組短(P0.05);相較于OGD組,OGD+1μmol/L和15μmol/L匹伐他汀處理組神經(jīng)元樹突分支數(shù)目增多(P0.05),但樹突長度無明顯增長(P0.05),氧糖剝奪+30μmol/L匹伐他汀處理組樹突分支數(shù)目及樹突長度均無明顯差異(P0.05)。3.OGD組與正常對照組比較蛋白dimmer-BDNF,homo-BDNF,TrkB的表達(dá)量均明顯降低(P0.05);1μmol/L,15μmol/L匹伐他汀處理組蛋白dimmer-mBDNF,homo-mBDNF,TrkB的表達(dá)量較正常對照組增高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);30μmol/L匹伐他汀處理組較正常對照組dimmer-BDNF,mBDNF,TrkB的表達(dá)量降低(P0.05);OGD+1μmol/L匹伐他汀,OGD+15μmol/L匹伐他汀處理組蛋白dimmer-BDNF,mBDNF,TrkB的表達(dá)量較OGD組增高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。OGD+30μmol/L匹伐他汀處理組較正常對照組dimmer-BDNF,mBDNF,TrkB的表達(dá)量降低(P0.05);OGD+1μmol/L、15μmol/L、30μmol/L匹伐他汀處理組蛋白dimmer-BDNF,mBDNF,TrkB的表達(dá)量均較相應(yīng)濃度的匹伐他汀處理組降低(P0.05)。結(jié)論:1.氧糖剝奪后復(fù)氧處理對神經(jīng)元有損傷作用。2.匹伐他汀處理對正常神經(jīng)元無明顯作用;對氧糖剝奪后復(fù)氧的神經(jīng)元有保護(hù)作用,該保護(hù)作用具有濃度依賴性。3.匹伐他汀促進(jìn)氧糖剝奪后復(fù)氧對神經(jīng)元樹突的再生,該作用具有濃度依賴性4.匹伐他汀可能通過BDNF-TrkB信號通路保護(hù)缺氧復(fù)氧損傷后神經(jīng)元。
【學(xué)位單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R743.3
【部分圖文】：

突交織成網(wǎng)，形成神經(jīng)網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。400 倍光鏡下觀察單個神經(jīng)元，可見神經(jīng)元細(xì)胞核及樹突上細(xì)小分枝；MAP-2 標(biāo)記成熟神經(jīng)元顯示為紅色熒光，熒光顯微鏡下觀察神經(jīng)元形態(tài)結(jié)構(gòu)完整，平均每視野有80%以上的MAP-2陽性細(xì)胞（圖1）。圖 1 不同時間點神經(jīng)元形態(tài)及神經(jīng)元純度鑒定注：圖A 剛接種時、BDIV1、CDIV3、DDIV7，200倍光鏡下攝取，圖E，DIV7，400倍光鏡下攝取,圖F，DIV7，200倍熒光顯微鏡下攝取。

不同PTV濃度處理細(xì)胞活性變化

PTV+OGD 組 與 30μmol/L 的 PTV 組 比 較 樹 突 數(shù) 目 減 少 (P<0.05) ，OGD+30μmol/LPTV 處理組與單純OGD組比較樹突分支數(shù)目明顯減少(P<0.05)，表明30μmol/L 的PTV對氧糖剝奪后的神經(jīng)元有損傷作用(圖3.3)。圖 3 各處理組神經(jīng)元形態(tài)比較
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前6條

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本文編號：2873064