背景:細(xì)胞毒素(Lymphotoxin,LT)是一種主要表達(dá)于細(xì)胞表面的淋巴因子,亞型LTα與一到兩個與另一膜相關(guān)亞型LTβ結(jié)合形成LTα1β2或LTα2β1異源三聚體。其中,占主導(dǎo)地位的LTα1β2主要與表達(dá)于內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、上皮細(xì)胞、單核細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞的淋巴毒素β受體(LTβR)相結(jié)合。過去對于LTβR信號通路的相關(guān)研究主要局限于淋巴組織器官的形成與發(fā)展。但是,對于其在神經(jīng)系統(tǒng)中,特別是神經(jīng)發(fā)生(neurogenesis)中的作用還是未知的。在本實驗中,我們將探究并揭示LTβR是否是調(diào)節(jié)信號通路對神經(jīng)干細(xì)胞神經(jīng)發(fā)生的分化的作用。方法:1.應(yīng)用C57BL/6J野生型與GFAP-dnIκBα轉(zhuǎn)基因型小鼠,分別于胚胎期與成熟期小鼠大腦中分離出原代神經(jīng)干細(xì)胞成球培養(yǎng),首次傳代后行單層細(xì)胞培養(yǎng)、擴(kuò)增及傳代。2.應(yīng)用腺病毒調(diào)節(jié)的NFκB-螢火蟲熒光素酶報告基因試驗與p65/RelB/p52核轉(zhuǎn)位試驗實現(xiàn)NFκB的激活。3.運用實時定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(quantitative RT-PCR)評估LTβR信使RNA的表達(dá)。4.運用免疫組織化學(xué)法與蛋白質(zhì)印跡法評估LTβR蛋白的表達(dá)。5.使用熒光共焦顯微鏡觀察多標(biāo)記免疫細(xì)胞化學(xué)法處理后的神經(jīng)干細(xì)胞分化情況并拍照記錄以備數(shù)據(jù)分析。6.應(yīng)用Graphpad Prism軟件繪圖并數(shù)據(jù)分析。結(jié)果:在培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞/神經(jīng)祖細(xì)胞中,經(jīng)LTα1β2作用后可同時激活NFκB經(jīng)典與非經(jīng)典信號通路。并且,在小鼠大腦中已確立的神經(jīng)源性區(qū)域內(nèi)也被檢測到具有類似LTβR免疫活性的GFAP+/Sox2+神經(jīng)干細(xì)胞。同時,運用實時定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)與蛋白質(zhì)印跡法也證實了LTβR分別表達(dá)于體外培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞/神經(jīng)祖細(xì)胞與小鼠大腦神經(jīng)源性區(qū)域內(nèi)。不難看出,LTβR的表達(dá)與神經(jīng)細(xì)胞的分化關(guān)系十分密切。在體外培養(yǎng)實驗中,經(jīng)LTα1β2作用的野生型神經(jīng)干/祖細(xì)胞會更傾向于向星形膠質(zhì)細(xì)胞系和少突膠質(zhì)細(xì)胞系分化,而抑制了其向神經(jīng)元分化。而對于GFAP-dn IκBα轉(zhuǎn)基因小鼠提取的神經(jīng)干/祖細(xì)胞,由于表達(dá)GFAP的神經(jīng)細(xì)胞,即星形膠質(zhì)細(xì)胞,NFκB信號通路并不能被激活,其分化傾向也隨之有所不同。結(jié)論:本實驗第一次揭露了淋巴毒素β受體信號通路在神經(jīng)干/祖細(xì)胞的表達(dá)與功能。激活LTβR信號通路可以增強(qiáng)膠質(zhì)細(xì)胞系的分化。同時,本實驗的實驗結(jié)果也證實了獲得性免疫反應(yīng)與炎癥反應(yīng)都具有調(diào)節(jié)神經(jīng)再生的功能。
【學(xué)位單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R741
【文章目錄】：
英漢縮略語名詞對照
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 淋巴毒素α1β2在神經(jīng)干/祖細(xì)胞中通過經(jīng)典和非經(jīng)典通路激活NFκB信號通路
    1 材料
    2 方法
    3 結(jié)果
第二部分 淋巴毒素β受體分別存在于體內(nèi)和體外培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞
    1 材料
    2 方法
    3 結(jié)果
第三部分 淋巴毒素α1β2抑制神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化促進(jìn)向膠質(zhì)細(xì)胞分化
    1 材料
    2 方法
    3 結(jié)果
第四部分 膠質(zhì)細(xì)胞NFκB被阻斷后的分化情況
    1 材料
    2 方法
    3 結(jié)果
討論
結(jié)論
    補(bǔ)充材料
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間完成的論文

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