背景神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)振蕩是一種節(jié)律性神經(jīng)同步電活動(dòng),存在于海馬、杏仁核及大腦皮層等多個(gè)腦區(qū)。其中,海馬區(qū)gamma(γ,30~80Hz)節(jié)律與腦的高級(jí)認(rèn)知功能如學(xué)習(xí)和記憶密切相關(guān),是神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)振蕩的一種重要的表現(xiàn)形式。急性甲基苯丙胺(Methamphetamine,MA)暴露增加了γ節(jié)律,但其細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通道仍不清楚。目的探討急性MA應(yīng)用對離體海馬腦片CA3區(qū)γ節(jié)律的影響及細(xì)胞機(jī)制。方法1.采用恒溫(28℃~32℃)界面灌流系統(tǒng)進(jìn)行含有混合氣體(95%O_2+5%CO_2)和人工腦脊液(ACSF)進(jìn)行灌流(流速:1.5 ml/min,pH值:7.35~7.45)。2.3-4周齡的雄性SD大鼠,給予水合氯醛(0.3-0.4mL/100g)腹腔注射麻醉后用預(yù)冷(0℃)的切片液心臟灌流,直至大鼠四肢均變?yōu)橥该靼咨?.快速取出所需腦組織,然后放入氧飽和的切片腦脊液中,采用LEICA VT1000S振動(dòng)切片機(jī)水平切割腦組織,得到厚度為400μm的海馬腦片。4.將腦片轉(zhuǎn)移至記錄槽內(nèi),用含有混合氣體的ACSF(28℃~32℃,3-4ml/min)灌流約1h后,行場電位記錄。紅藻氨酸受體激動(dòng)劑(Kainate,KA)用于誘導(dǎo)穩(wěn)定的γ節(jié)律(30~80 Hz)。5.觀察MA(20μM)對海馬CA3區(qū)γ節(jié)律的影響。之后,再使用多巴胺受體阻斷劑,NMDA受體阻斷劑,PI3K、Akt、ERK、PKA等細(xì)胞內(nèi)激酶的抑制劑來探討急性MA應(yīng)用對海馬神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)活動(dòng)作用的細(xì)胞機(jī)制。記錄數(shù)據(jù)通過Spike 2軟件進(jìn)行分析,統(tǒng)計(jì)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差的方式表示。使用Sigmastat軟件作統(tǒng)計(jì)分析,若P≤0.05,則認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1.MA對大鼠海馬CA3區(qū)γ節(jié)律的調(diào)節(jié)具有明顯增加作用。2.PI3K的抑制劑Wortmannin(0.2μM)不能阻斷MA對海馬γ節(jié)律增加作用。3.ERK阻斷劑U0126(2.5μM)、PKA阻斷劑H89不能阻斷MA對海馬γ節(jié)律增加作用。4.D1受體部分阻斷了MA對海馬γ節(jié)律的增加作用、D2受體完全阻斷了MA對海馬γ節(jié)律的增加作用、NMDA受體阻斷劑D-AP5則逆轉(zhuǎn)了MA對海馬γ節(jié)律的增加作用。5.Akt的抑制劑Tricribine(5μM)阻斷了MA對海馬γ節(jié)律的增強(qiáng)作用。結(jié)論MA對海馬CA3區(qū)γ節(jié)律具有明顯的增強(qiáng)作用;其增強(qiáng)機(jī)制與D2R、NMDA受體及Akt信號(hào)分子的激活相關(guān)。
【學(xué)位單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R741
【部分圖文】：

新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文2 結(jié)果2.1 MA 增強(qiáng)了 KA 誘導(dǎo)的γ節(jié)律使用 200nM KA 灌流離體海馬腦片，誘導(dǎo)出γ節(jié)律，達(dá)到穩(wěn)態(tài)后（50-120min），給予濃度為 20μM 的MA持續(xù)灌流約 30min，發(fā)現(xiàn) MA增強(qiáng)了γ節(jié)律的能譜(圖1B)，當(dāng)洗掉 MA 后，γ節(jié)律的能譜可以部分或者完全恢復(fù)(圖 1C)，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明，MA 導(dǎo)致的增強(qiáng)具有顯著性意義(260.9±10.2% ，與對照組比較，***P<0.001，paired T-test，n=12)。上述結(jié)果表明了 MA 明顯增加了 KA 誘導(dǎo)的γ節(jié)律。

新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文阻斷劑）、Raclopride（DR2/3/4 阻斷劑）自身的γ節(jié)律的調(diào)節(jié)作用以及對 MA 作用的影響。應(yīng)用含有濃度為 10μM SCH23390 的腦脊液灌流腦片，發(fā)現(xiàn)γ節(jié)律功率譜輕度增加(18.9±4.1%，*P<0.05，paired T-test，n=11，圖 2 A-C)，再加入 20μM MA后，γ節(jié)律的功率譜無明顯改變（8.4±4.4%，與 SCH23390 相比，P>0.05，pairedT-test ， n=11 ， 圖 2 A-C) 。 與 20μM MA 單 獨(dú) 作 用 (260.9±10.2%) 相 比 ，SCH23390+MA 對γ節(jié)律的作用（32.6±4.6%)具有顯著性差異(P<0.05，T-test) 這些結(jié)果表明：DR1 阻斷劑部分阻斷了 MA 的作用。

新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文2.3 D2/3/4 阻斷劑 Raclopride 對 MA 增強(qiáng)γ節(jié)作用的影響應(yīng)用含有濃度為 10μM Raclopride 的腦脊液灌流腦片,對γ節(jié)律功率譜沒有明顯影響(103±8.6%,與對照組相比，P >0.05，paired T-test，n=6，圖 3A-C)。進(jìn)一步加入20μM MA，γ節(jié)律的能譜顯示了輕度降低，但沒有顯著性差異(91.1±21%，與對照組相比，P >0.05， paired T-test，n=6，圖 3A-C)。這些結(jié)果表明：DR2 阻斷劑完全阻斷了 MA 的作用，說明 MA 對γ節(jié)律的增強(qiáng)作用主要涉及到 DR2 的激活。
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 楊黎華;白潔;;單胺類神經(jīng)遞質(zhì)在藥物成癮中的作用機(jī)制[J];中國藥理學(xué)通報(bào);2015年02期

本文編號(hào)：2860028