目的通過對大鼠行眶下神經(jīng)結(jié)扎術(shù)構(gòu)建三叉神經(jīng)痛動物模型,注射縫隙連接蛋白1(Pannexin-1,Panx 1)特異性si RNA阻斷三叉神經(jīng)節(jié)中Panx 1的表達,采用Von Frey hairs測痛法,Western blot和q RT-PCR檢測Panx 1在三叉神經(jīng)節(jié)中的表達及其在三叉神經(jīng)痛中的作用。方法對雄性SD大鼠行左側(cè)眶下神經(jīng)慢性縮窄術(shù)(ION-CCI)建立三叉神經(jīng)痛大鼠模型(ION-CCI組),并建立假手術(shù)組,即僅暴露眶下神經(jīng)但不行結(jié)扎術(shù)。用Von Frey hairs纖維絲對兩組大鼠左側(cè)觸須墊的機械刺激閾值進行檢測,驗證三叉神經(jīng)痛大鼠模型是否建立成功。然后將ION-CCI大鼠隨機分為兩組,CCI+Panx1-si RNA組:對ION-CCI大鼠術(shù)側(cè)經(jīng)眶下孔達三叉神經(jīng)節(jié)區(qū)域局部注射Panx 1特異性si RNA;CCI+Ctl-si RNA組:對ION-CCI大鼠術(shù)側(cè)經(jīng)眶下孔達三叉神經(jīng)節(jié)區(qū)域局部注射陰性對照si RNA。采用q RT-PCR比較兩組大鼠術(shù)側(cè)三叉神經(jīng)節(jié)中Panx 1m RNA的表達量,采用Western blot比較兩組大鼠術(shù)側(cè)三叉神經(jīng)節(jié)中Panx 1蛋白質(zhì)的表達量。通過Von Frey hairs行為學檢測比較兩組大鼠機械刺激疼痛閾值。結(jié)果1.Von Frey hairs行為學檢測顯示ION-CCI大鼠術(shù)側(cè)觸須墊區(qū)域的機械刺激疼痛閾值明顯低于假手術(shù)組,表明三叉神經(jīng)痛大鼠模型構(gòu)建成功。2.q RT-PCR和Western blot的結(jié)果均表明CCI+Panx 1-si RNA組大鼠術(shù)側(cè)三叉神經(jīng)節(jié)中Panx 1表達量明顯低于CCI+Ctl-si RNA組。表明Panx特異性si RNA有效抑制了三叉神經(jīng)節(jié)中Panx 1的表達。3.Von Frey hairs行為學檢測顯示CCI+Panx 1-si RNA組大鼠機械刺激閾值顯著高于CCI+Ctl-si RNA組大鼠。結(jié)論通過眶下神經(jīng)慢性壓迫損失建立三叉神經(jīng)痛大鼠模型,抑制三叉神經(jīng)節(jié)中Panx 1表達可以緩解三叉神經(jīng)痛的痛敏反應(yīng)。
【學位單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R745.11
【部分圖文】：

值達到最低（sham組：1.38 g± 0.18 g，ION-CCI組：0.22 g ± 0.14 g，n =8，P < 0.001）。ION-CCI組大鼠術(shù)側(cè)機械刺激疼痛超敏反應(yīng)一直持續(xù)到術(shù)后第7周。Sham組大鼠從術(shù)后第1天至第7周內(nèi)的術(shù)側(cè)機械刺激疼痛閾值無明顯變化（P > 0.05）。見圖1。

安徽醫(yī)科大學碩士學位論文23圖2：CCI + Ctl-siRNA組和CCI + Panx 1-siRNA組大鼠三叉神經(jīng)節(jié)內(nèi)Panx 1 mRNA的相對表達（n = 4，與CCI + Ctl-siRNA組大鼠相比，**P < 0.01）Fig 2: Relative expression of Panx 1 mRNA in the trigeminal ganglion in CCI + Ctl-siRNA and CCI +Panx 1-siRNA rats（n = 4，**P < 0.01 vs the CCI + Ctl-siRNA group）3.3 大鼠三叉神經(jīng)節(jié)中Panx 1蛋白表達量持續(xù)注射 siRNA 后第 4 天將各組大鼠麻醉并處死，取出左側(cè)三叉神經(jīng)節(jié)通過Western blot 檢測 Panx 1 的蛋白表達水平。Western blot 結(jié)果顯示，CCI + Panx1-siRNA 組大鼠三叉神經(jīng)節(jié)中 Panx 1 蛋白表達量低于 CCI + Ctl-siRNA 組（n = 4， P <0.05）。通過 qRT-PCR 和 Western blot 實驗結(jié)果表明 Panx 1 特異性 siRNA 降低了ION-CCI 大鼠三叉神經(jīng)節(jié)中的 Panx 1 的表達。見圖 3。

安徽醫(yī)科大學碩士學位論文24圖3：CCI + Ctl-siRNA組和CCI + Panx 1-siRNA組大鼠三叉神經(jīng)節(jié)內(nèi)Panx 1蛋白的相對表達量（n =4，與CCI + Ctl-siRNA組大鼠相比，* P < 0.05）Fig 3: Relative expression of Panx 1 protein in the trigeminal ganglion in CCI + Ctl-siRNA and CCI +Panx 1-siRNA rats.（n = 4，*P < 0.05 vs the CCI + Ctl-siRNA group）3.4 三叉神經(jīng)節(jié)中Panx 1對大鼠機械疼痛超敏反應(yīng)的影響通過 Von Frey hairs 纖維絲檢測 ION-CCI 大鼠注射 siRNA 后的機械刺激疼痛閾值。結(jié)果顯示，與 CCI + Ctl-siRNA 組相比，CCI + Panx 1-siRNA 組大鼠的機械刺激疼痛閾值顯著增加，第四日差異最明顯，CCI + Ctl-siRNA 組為 0.25 g± 0.18 g，CCI + Panx1-siRNA 為 1.05 g ± 0.26 g（n =8
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本文編號：2856474